En direct de l'imagerie Drosophila melanogaster Migrations hémocytaires embryonnaires
Summary
Hémocytes drosophile se dispersent sur l'ensemble de l'embryon en développement. Ce protocole démontre comment monter et à l'image de ces migrations à partir d'embryons avec les hémocytes marqués par fluorescence.
Abstract
Beaucoup de migration cellulaire des études utilisant l'adresse<em> In vitro</emMéthodes>, alors que l'environnement physiologiquement pertinente est celle de l'organisme lui-même. Nous présentons ici un protocole pour le montage<em> Drosophila melanogaster</em> Embryons et ultérieures imagerie en temps réel des hémocytes marqués par fluorescence, les macrophages embryonnaire de cet organisme. En utilisant le système UAS-Gal4<sup> 1</sup> Nous conduisons l'expression d'une variété d'organismes génétiquement codés, des marqueurs de fluorescence marqués dans les hémocytes de suivre leur dispersion à travers le développement de l'embryon. Après la collecte d'embryons au stade de développement souhaité, le chorion externe est enlevée et les embryons sont ensuite montés dans l'huile d'halocarbures entre un hydrophobe, perméable aux gaz de membrane et une lamelle de verre pour l'imagerie en direct. En plus de paramètres brute migrateurs tels que la vitesse et la directivité, de l'imagerie haute résolution couplée à l'utilisation des reporters fluorescents de F-actine et les microtubules peuvent fournir des informations plus détaillées concernant la dynamique de ces composants du cytosquelette.
Protocol
Discussion
Les éléments les plus importants de cette procédure sont à la sélection d'embryons sains avec hémocytes clairement étiquetés et de les monter avec soin sans les endommager. Une fois que les embryons sont des halocarbures dans l'huile ils sont résistants à la déshydratation et une fois montée peut être imagée pendant plusieurs heures. Dans nos mains, nous pouvons hémocytes d'image pendant trois heures, avec une déshydratation négligeable de l'embryon ou du photo-dommages évidents, en pre…
Acknowledgements
Ce protocole a été développé par notre travail au sein et en collaboration avec les laboratoires de Paul Martin et Antonio Jacinto. Nous remercions le Centre Stock Bloomington pour son excellent service et la communauté drosophile de continuer à partager les lignes voler. BS est actuellement financé par une subvention du BBSRC projet. WW est financé par une bourse du Wellcome Trust en développement de carrière.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell strainer | BD Falcon | 352350 | 70μm pores | |
| Halcarbon oil 700 | Sigma | H8898 | ||
| Lumox/Petriperm dish | Sarstedt | 96077305 |
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