के लाइव इमेजिंग ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर भ्रूण Hemocyte migrations
Summary
ड्रोसोफिला hemocytes विकासशील भ्रूण की सम्पूर्णता पर फैलाने. इस प्रोटोकॉल को दर्शाता है कैसे माउंट करने के लिए और छवि इन fluorescently लेबल hemocytes के साथ भ्रूण का उपयोग प्रवास.
Abstract
कई अध्ययनों से पता सेल का उपयोग प्रवास<em> इन विट्रो में</em> विधियों, जबकि physiologically प्रासंगिक पर्यावरण कि जीव ही है. यहाँ हम बढ़ते के लिए एक प्रोटोकॉल वर्तमान<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em> भ्रूण और fluorescently लेबल hemocytes के बाद रहते इमेजिंग, इस जीव के भ्रूण मैक्रोफेज. Gal4 – UAS प्रणाली का उपयोग<sup> 1</sup> हम आनुवंशिक रूप से इनकोडिंग hemocytes में fluorescently टैग मार्करों भ्रूण भर में अपने विकास प्रसार का पालन करें की एक किस्म की अभिव्यक्ति ड्राइव. भ्रूण के विकास के वांछित स्तर पर निम्नलिखित संग्रह, बाहरी chorion निकाल दिया है और भ्रूण तो एक hydrophobic, गैस पारगम्य झिल्ली और रहते इमेजिंग के लिए एक गिलास coverslip के बीच हेलोकार्बन तेल में बढ़ रहे हैं. गति और दिशात्मकता, उच्च संकल्प एफ actin और सूक्ष्मनलिकाएं अधिक इन cytoskeletal घटकों की गतिशीलता से संबंधित विस्तृत जानकारी प्रदान कर सकते हैं फ्लोरोसेंट संवाददाताओं के उपयोग के साथ युग्मित इमेजिंग के रूप में सकल प्रवासी मापदंडों के अलावा.
Protocol
Discussion
इस प्रक्रिया का सबसे महत्वपूर्ण तत्वों को स्पष्ट रूप से लेबल hemocytes के साथ स्वस्थ भ्रूण के चयन कर रहे हैं और उन्हें नुकसान पहुँचाए बिना उन्हें ध्यान से माउंट. एक बार भ्रूण हेलोकार्बन तेल में हैं वे निर्जल…
Acknowledgements
इस प्रोटोकॉल के भीतर और पॉल मार्टिन और एंटोनियो Jacinto की प्रयोगशालाओं के साथ सहयोग में हमारे काम के माध्यम से विकसित किया गया है. हम अपनी उत्कृष्ट सेवा के लिए और शेयर के लिए उड़ान भरने लाइनों जारी रखने के लिए ड्रोसोफिला समुदाय ब्लूमिंगटन स्टॉक केंद्र धन्यवाद. बी एस वर्तमान में एक बीबीएसआरसी परियोजना अनुदान द्वारा वित्त पोषित है. WW वेलकम ट्रस्ट कैरियर विकास फैलोशिप द्वारा वित्त पोषित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell strainer | BD Falcon | 352350 | 70μm pores | |
| Halcarbon oil 700 | Sigma | H8898 | ||
| Lumox/Petriperm dish | Sarstedt | 96077305 |
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