Floral-לטבול טרנספורמציה של ארבידופסיס thaliana לבדיקת PTSO2: β-glucuronidase Gene Expression Reporter
Summary
מאמר זה ממחיש את הפרחים, טובלים שיטת<em> Agrobacterium tumefaciens</em> בתיווך הטרנספורמציה של<em> ארבידופסיס thaliana</em>. על ידי החדרת תא מחזור מוסדר האמרגן, כתב,<em> PTSO2: β-glucuronidase (גאס)</em> אל<em> ארבידופסיס</em> אנו מדגים כיצד מזהה ביטוי גאס הכתב שתילים מהונדס.
Abstract
היכולת להכניס גנים זרים לתוך אורגניזם היא הבסיס הביולוגיה והביוטכנולוגיה המודרנית. בשנת הצמח פורח מודל<em> ארבידופסיס thaliana</em>, פרחים, לטבול שיטת הטרנספורמציה<sup> 1-2</sup> החליף את כל השיטות הקודמות בגלל הפשטות שלה, יעילות, ועלות נמוכה. באופן ספציפי, יורה פריחה צעיר<em> ארבידופסיס</emצמחים> הם טבול בתמיסה של<em> Agrobacterium tumefaciens</em> נושא בונה פלסמיד מסוים. לאחר טבילה, הצמחים הם חזרו לצמיחה נורמלית זרעים תשואה, אחוז קטן מהם הופכים עם גן זר יכול להיבחר על מדיום המכיל אנטיביוטיקה. שיטה זו פרחוני לטבול הקלו באופן משמעותי<em> ארבידופסיס</em> מחקר תרמו רבות להבנת תפקוד הגן צמח. במחקר זה, אנו משתמשים פרחים לטבול שיטה להפוך את גן הכתב,<em> Β-glucuronidase (גאס)</em>, תחת שליטתו של<em> TSO2</em> האמרגן.<em> TSO2</em>, קידוד עבור reductase ribonucleotide (RNR) למקטע קטן<sup> 3</sup>, הוא מחזור התא גן מוסדר חיוני ביוסינתזה dNDP בשלב-S של מחזור התא. בחינת<em> גאס</em> ביטוי מהונדס<em> ארבידופסיס</em> שתילים מראה כי<em> TSO2</em> בא לידי ביטוי באופן פעיל בחלוקת הרקמות. שיטה ניסיונית דיווח וחומרים ניתן להתאים בקלות בתיכון רמות המכללה לא רק למחקר אלא גם עבור החינוך.
Protocol
Discussion
היעילות של השינוי נקבע על ידי גורמים רבים ושונים, אשר נדון להלן:
- בריאות הצמחים ואת גילם הם בעלי חשיבות ראשונית. בערך אחד הצמחים ישנים חודש לייצר מספר רב של בלוטות פרחים בשלה הם אידיאליים. זמירה את יורה העיקרית לעודד מ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו מודים Chunxin וואנג לבניית pTSO2: גאס עבור תמונות באיור 1, דטלף ווייגל לשיתוף פרוטוקול גאס-חסינת תקלות, פג'ה Sijacic, ואת קורטני הולנדר על הערות מועילות. מחקר במעבדה של צ'L נתמכת על ידי המוסד האמריקני למדע (IOB0616096 ו MCB0744752). ZL נתמך בחלקו על ידי האוניברסיטה של מרילנד תחנת ניסוי חקלאי.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 6-benzyladenine | Sigma | 852430 | ||
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Toxic, wear gloves | ||
| Murashige and Skoog Basal medium (MS) | Sigma | M5519 | ||
| Gamborg’s vitamin solution 1000X | Sigma | G1019 | ||
| X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt | Biosynth | B-7300 | Toxic, light sensitive keep in the dark | |
| Micropore 3M Tape | Fisher | 19027761 |
References
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).
- Wang, C., Liu, Z. Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development. Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).
