Floral-daldırma Dönüşüm Arabidopsis thaliana Inceleyin PTSO2: β-glucuronidase Reporter Gen İfadesi
Summary
Bu makale, çiçek-daldırma yöntemi göstermektedir.<em> Agrobacterium tumefaciens</em> Aracılı dönüşüm<em> Arabidopsis thaliana</em>. Bir hücre döngüsü düzenlenir organizatörü muhabiri tanıtarak,<em> PTSO2: β-glucuronidase (GUS)</em> Içine<em> Arabidopsis</em>, Bir transgenik fide GUS muhabir ifade nasıl algıladığı göstermektedir.
Abstract
Bir organizmanın içine yabancı genlerin tanıtmak için yetenek, modern biyoloji ve biyoteknolojinin temelini oluşturur. Model çiçekli bitki<em> Arabidopsis thaliana</em> Çiçek daldırma dönüşüm yöntemi<sup> 1-2</sup> Basitlik, verimlilik ve düşük maliyet nedeniyle önceki tüm yöntemler yerini almıştır. Özellikle genç çiçeklenme, sürgünler<em> Arabidopsis</em> Bitkilerin bir çözüm batırılmış<em> Agrobacterium tumefaciens</em> Belirli plazmid yapıları taşımak. Daldırma sonra, bitkilerin normal büyüme ve verim tohumları küçük bir yüzdesi, yabancı gen ile dönüştürülmüş ve antibiyotik içeren orta için seçilebilir iade edilir. Önemli ölçüde kolaylaştırdı Bu çiçek daldırma yöntemi<em> Arabidopsis</em> Araştırma ve bitki gen fonksiyon anlayışımıza büyük katkıda bulunmuştur. Bu çalışmada, biz, bir muhabir gen dönüştürmek için çiçek daldırma yöntemi kullanın<em> Β-glucuronidase (GUS)</em> Kontrolü altında<em> TSO2</em> Organizatörü.<em> TSO2</em> Ribonukleotid redüktaz (RNR) küçük altbirim için kodlama<sup> 3</sup>, Hücre döngüsü, hücre döngüsünün S-fazında dNDP biyosentezi için gerekli bir düzenlenir gen. İncelenmesi<em> GUS</emTransgenik> ifadesi<em> Arabidopsis</em> Fide olduğunu gösteriyor<em> TSO2</em> Aktif dokularda bölünerek ifade edilir. , Yüksek okul ve üniversite düzeylerinde araştırma için değil, aynı zamanda eğitim için değil, sadece bildirilen deneysel yöntem ve malzemeleri kolaylıkla adapte edilebilir.
Protocol
Discussion
Dönüşüm verimliliği aşağıda tartışılmıştır çok farklı faktörler tarafından belirlenir:
- Birincil öneme sahip bitkilerin sağlık ve yaşlarına. Üreten çok sayıda olgunlaşmamış çiçek tomurcukları yaklaşık bir aylık bitkiler idealdir. Dönüşüm ikincil ateş oluşumu 3-4 gün önce teşvik etmek birincil sürgünler kapalı Kırpma dönüşüm verimliliği artacaktır. Önceki bitkiler transformants doğuran, ancak daha düşük bir oranda.
- Bitkilerin Doğurganlık ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
GUS GUS-kusursuz bir protokol, Paja Sijacic ve Courtney Hollender paylaşımı için yararlı yorum ve Şekil 1, Detlef Weigel fotoğraflar için: Biz Chunxin Wang pTSO2 inşa için teşekkür ederiz . Z. L s laboratuvarda Araştırma, ABD Ulusal Bilim Vakfı (IOB0616096 ve MCB0744752) tarafından desteklenmektedir. ZL, Maryland Zirai Araştırma İstasyonu Üniversitesi tarafından kısmen destekleniyor.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 6-benzyladenine | Sigma | 852430 | ||
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Toxic, wear gloves | ||
| Murashige and Skoog Basal medium (MS) | Sigma | M5519 | ||
| Gamborg’s vitamin solution 1000X | Sigma | G1019 | ||
| X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt | Biosynth | B-7300 | Toxic, light sensitive keep in the dark | |
| Micropore 3M Tape | Fisher | 19027761 |
References
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).
- Wang, C., Liu, Z. Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development. Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).
