Floral dip transformación de la Arabidopsis thaliana Para el Examen de PTSO2:: β-glucuronidasa Reporter Expresión Génica
Summary
En este artículo se ilustra el método de inmersión floral de<em> Agrobacterium tumefaciens</em> La transformación mediada de<em> Arabidopsis thaliana</em>. Mediante la introducción de un ciclo celular regulados promotor-reportero,<em> PTSO2:: β-glucuronidasa (GUS)</em>, En<em> Arabidopsis</em>, Que ilustra cómo se detecta la expresión de GUS en plantas transgénicas reportero.
Abstract
La capacidad de introducir genes extraños en un organismo es la base de la biología moderna y la biotecnología. En el modelo de planta de flores<em> Arabidopsis thaliana</em>, El floral dip transformación del método<sup> 2.1</sup> Ha sustituido a todos los métodos anteriores, debido a su simplicidad, eficiencia y bajo costo. En concreto, los brotes jóvenes de la floración<em> Arabidopsis</emPlantas> se sumergen en una solución de<em> Agrobacterium tumefaciens</em> La realización específica construcciones de plásmidos. Después de la inmersión, las plantas se volvió a su normal crecimiento y rendimiento de semillas, un pequeño porcentaje de los cuales son transformados con el gen extraño y pueden ser seleccionados para el medio con antibióticos. Este método de inmersión floral facilitado considerablemente<em> Arabidopsis</em> Investigación y contribuyó enormemente a nuestra comprensión de la función de genes de plantas. En este estudio, utilizamos el método de inmersión floral para transformar un gen reportero,<em> Β-glucuronidasa (GUS)</em>, Bajo el control de<em> TSO2</em> Promotor.<em> TSO2</em>, Que codifica para la ribonucleótido reductasa (RNR) subunidad pequeña<sup> 3</sup>, Es un gen ciclo celular está regulado esencial para la biosíntesis de dNDP en la fase S del ciclo celular. El examen de<em> GUS</em> Expresión en plantas transgénicas<em> Arabidopsis</em> Plántulas muestra que<em> TSO2</em> Se expresa en los tejidos se dividen activamente. El método experimental reportado y los materiales pueden ser fácilmente adaptados no sólo a la investigación sino también para la educación en la escuela secundaria y superior.
Protocol
Discussion
La eficiencia de transformación está determinada por muchos factores diferentes, que se analizan a continuación:
- La salud de las plantas y su edad son de vital importancia. Aproximadamente un mes las plantas produciendo numerosos botones florales inmaduros son ideales. Recorte de los brotes principales para fomentar la formación secundaria días 3-4 disparar antes de la transformación se incrementará la eficiencia de transformación. Las plantas más viejas dará lugar a transformantes, pero a un ritm…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Damos las gracias a Chunxin Wang para la construcción de pTSO2:: GUS y las fotos en la Figura 1, Detlef Weigel para compartir el protocolo de GUS-a prueba de tontos, Sijacic Paja y Hollender Courtney por sus valiosos comentarios. Investigación en el laboratorio Z. L s es apoyado por los EE.UU. National Science Foundation (IOB0616096 y MCB0744752). ZL es parcialmente financiado por la Universidad de Maryland Estación Experimental Agrícola.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 6-benzyladenine | Sigma | 852430 | ||
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Toxic, wear gloves | ||
| Murashige and Skoog Basal medium (MS) | Sigma | M5519 | ||
| Gamborg’s vitamin solution 1000X | Sigma | G1019 | ||
| X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt | Biosynth | B-7300 | Toxic, light sensitive keep in the dark | |
| Micropore 3M Tape | Fisher | 19027761 |
References
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).
- Wang, C., Liu, Z. Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development. Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).
