フローラルディップ変換のシロイヌナズナ調べに pTSO2：：β-グルクロニダーゼレポーター遺伝子発現
Summary
この記事はのフローラルディップ法を示しています。<em>アグロバクテリウムツメファシエンス</em>媒介形質転換の<em>シロイヌナズナ</em>。細胞周期調節プロモーター – レポーターを導入することにより、<em> pTSO2：：β-グルクロニダーゼ（GUS）</em>、へ<em>シロイヌナズナ</em>、我々は1つがトランスジェニック実生におけるGUSレポーターの発現を検出する方法を示しています。
Abstract
生物に外来遺伝子を導入する能力は、現代生物学とバイオテクノロジーの基盤となります。モデルの顕花植物の<em>シロイヌナズナ</em>、フローラルディップ変換法<sup> 1月2日</sup>は、その単純さ、効率、および低コストのすべての以前のメソッドを置き換えています。特に、若い開花の芽<em>シロイヌナズナ</em>植物はの溶液に浸漬されています<em>アグロバクテリウムツメファシエンス</em>特定のプラスミド構築物を運ぶ。浸漬した後、植物が正常な成長と収量の種子、外来遺伝子で形質転換され、抗生物質を含む培地上でのために選択できるのわずかな割合に戻されます。著しく促進このフローラルディップ法<em>シロイヌナズナ</em>研究と植物の遺伝子機能の理解に大きく貢献した。本研究では、我々は、レポーター遺伝子を変換するフローラルディップ法を使用してください<em>β-グルクロニダーゼ（GUS）</em>、の制御下に<em> TSO2</em>プロモーター。<em> TSO2</em>、リボヌクレオチド還元酵素（RNR）小サブユニットをコードする<sup> 3</sup>、細胞周期のS期にdNDP生合成に不可欠な細胞周期調節遺伝子である。の検討<em> GUS</emトランスジェニックの>表現<em>シロイヌナズナ</em>苗がいることを示しています<em> TSO2</em>活発に分裂組織で発現される。報告された実験方法と材料は容易に高校や大学レベルでの研究のためだけでなく、教育のためだけでなく、適合させることができます。
Protocol
Discussion
形質転換の効率は以下に説明されているさまざまな要素によって決定されます。
- 植物の健康と自分の年齢が最も重要です。多数の未熟な花芽を生産する約1ヵ月の古い植物は理想的です。変換する前に二次シュート形成3-4日奨励するために、主枝をオフにトリミング形質転換効率を向上します。古い植物は、形質転換することではなく、より低いレートで上昇を与える。
- 植物?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々はpTSO2を構築するための純新王に感謝：：GUSと図1の写真、デトレフワイゲル有益なコメントをGUS -フールプルーフプロトコル、Paja Sijacic、とコートニーホランダーを共有するための。 Z. Lの研究室の研究は米国国立科学財団（IOB0616096とMCB0744752）によってサポートされています。 ZLは部分的にメリーランド州農業試験場の大学によってサポートされています。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 6-benzyladenine | Sigma | 852430 | ||
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Toxic, wear gloves | ||
| Murashige and Skoog Basal medium (MS) | Sigma | M5519 | ||
| Gamborg’s vitamin solution 1000X | Sigma | G1019 | ||
| X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt | Biosynth | B-7300 | Toxic, light sensitive keep in the dark | |
| Micropore 3M Tape | Fisher | 19027761 |
References
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).
- Wang, C., Liu, Z. Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development. Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).
