Floreale-dip Trasformazione Arabidopsis thaliana Per esaminare PTSO2:: β-glucuronidasi Reporter espressione genica
Summary
Questo articolo illustra la floreali-dip metodo di<em> Agrobacterium tumefaciens</em>-Mediata trasformazione del<em> Arabidopsis thaliana</em>. Con l'introduzione di un ciclo cellulare regolata promotore-reporter,<em> PTSO2:: β-glucuronidasi (GUS)</em>, In<em> Arabidopsis</em>, Ci illustra come si rileva giornalista espressione GUS in piantine transgeniche.
Abstract
La possibilità di introdurre geni estranei in un organismo è il fondamento della biologia moderna e le biotecnologie. Nella pianta fiorita modello<em> Arabidopsis thaliana</em>, I fiori-dip trasformazione del metodo<sup> 1-2</sup> Ha sostituito tutti i metodi precedenti per la sua semplicità, efficienza e basso costo. In particolare, i germogli di fioritura giovani<em> Arabidopsis</emPiante> sono immersi in una soluzione di<em> Agrobacterium tumefaciens</em> Trasporto specifico costruisce plasmide. Dopo l'immersione, le piante vengono restituiti alla crescita normale e semi di resa, una piccola percentuale dei quali sono trasformate con il gene estraneo e possono essere selezionati per il supporto contenente antibiotici. Questo floreali-dip metodo significativamente facilitato<em> Arabidopsis</emDi ricerca> e ha contribuito notevolmente alla comprensione della funzione dell'impianto gene. In questo studio, si usa il floreali-dip metodo per trasformare un gene reporter,<em> Β-glucuronidasi (GUS)</em>, Sotto il controllo di<em> TSO2</em> Promotore.<em> TSO2</em>, Che codifica per la ribonucleotide reduttasi (RNR) subunità piccola<sup> 3</sup>, È un gene del ciclo cellulare regolata essenziale per la biosintesi dNDP nella fase S del ciclo cellulare. Esame della<em> GUS</emEspressione> in transgenico<em> Arabidopsis</em> Piantine mostra che<em> TSO2</em> È espressa in modo attivo divisione tessuti. Il metodo riportato sperimentale e materiali può essere facilmente adattato non solo per la ricerca ma anche di istruzione alle scuole superiori e livelli di college.
Protocol
Discussion
L'efficienza di trasformazione è determinato da molti fattori diversi, che sono discussi di seguito:
- La salute delle piante e la loro età sono di primaria importanza. Circa un mese impianti di produzione di numerose gemme floreali immaturi sono l'ideale. Taglio fuori spara primario di incoraggiare secondaria giornate di formazione sparare 3-4 prima della trasformazione aumenterà l'efficienza della trasformazione. Vecchi impianti darà origine a trasformanti ma ad un tasso inferiore.
- …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ringraziamo Chunxin Wang per la costruzione di pTSO2:: GUS e per le foto in figura 1, Detlef Weigel per la condivisione del GUS-infallibile protocollo, Paja Sijacic, e Courtney Hollender per gli utili commenti. La ricerca in laboratorio, Z. L s è supportato dal US National Science Foundation (IOB0616096 e MCB0744752). ZL è parzialmente supportata dalla University of Maryland Stazione esperimento agricola.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 6-benzyladenine | Sigma | 852430 | ||
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Toxic, wear gloves | ||
| Murashige and Skoog Basal medium (MS) | Sigma | M5519 | ||
| Gamborg’s vitamin solution 1000X | Sigma | G1019 | ||
| X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt | Biosynth | B-7300 | Toxic, light sensitive keep in the dark | |
| Micropore 3M Tape | Fisher | 19027761 |
References
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).
- Wang, C., Liu, Z. Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development. Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).
