पुष्प डुबकी परिवर्तन Arabidopsis thaliana जांच करने के लिए PTSO2:: बीटा glucuronidase रिपोर्टर जीन एक्सप्रेशन
Summary
इस अनुच्छेद के पुष्प स्नान की विधि दिखाता है<em> Agrobacterium tumefaciens</em> मध्यस्थता के परिवर्तन<em> Arabidopsis thaliana</em>. एक सेल चक्र विनियमित प्रमोटर रिपोर्टर को शुरू करके,<em> PTSO2:: बीटा glucuronidase (गस)</em> में,<em> Arabidopsis</em>, हम दिखाता है कि कैसे एक गस ट्रांसजेनिक seedlings में संवाददाता अभिव्यक्ति का पता लगाता है.
Abstract
एक जीव में विदेशी जीन परिचय करने की क्षमता आधुनिक जीवविज्ञान और जैवप्रौद्योगिकी के लिए नींव है. मॉडल फूल पौधे<em> Arabidopsis thaliana</em>, पुष्प डुबकी परिवर्तन विधि<sup1-2></sup> अपनी सादगी, दक्षता, और कम लागत की वजह से सभी पिछले विधियों की जगह है. विशेष रूप से युवा फूल का, गोली मारता है<em> Arabidopsis</em> पौधों की एक समाधान में डूबा हुआ हैं<em> Agrobacterium tumefaciens</em> विशिष्ट प्लाज्मिड constructs ले. सूई के बाद, पौधों सामान्य वृद्धि और उपज बीज, जो विदेशी जीन के साथ बदल रहे हैं और एंटीबायोटिक दवाओं युक्त मध्यम के लिए चुना जा सकता है है एक छोटा सा प्रतिशत के लिए लौट रहे हैं. इस पुष्प डुबकी काफी मदद की विधि<em> Arabidopsis</em> अनुसंधान और संयंत्र जीन समारोह की हमारी समझ के लिए बहुत योगदान दिया. इस अध्ययन में, हम पुष्प डुबकी विधि का उपयोग करने के लिए एक पत्रकार के जीन को बदलने,<em> Β-glucuronidase (गस)</em>, के नियंत्रण के अधीन<emTSO2></em> प्रमोटर.<emTSO2></em> Ribonucleotide (RNR) reductase छोटे सबयूनिट के लिए कोडिंग<sup> 3</sup> एक कोशिका चक्र को विनियमित जीन कोशिका चक्र के एस चरण में dNDP biosynthesis के लिए आवश्यक है. की परीक्षा<em> गस</em> अभिव्यक्ति में ट्रांसजेनिक<em> Arabidopsis</em> Seedlings कि पता चलता है<emTSO2></em> सक्रिय विभाजन के ऊतकों में व्यक्त किया है. रिपोर्ट प्रयोगात्मक विधि और सामग्री आसानी से हाई स्कूल और कॉलेज स्तर पर जा सकता है न केवल अनुसंधान के लिए, लेकिन यह भी शिक्षा के लिए अनुकूलित.
Protocol
Discussion
परिवर्तन की क्षमता कई अलग अलग कारक है, जो नीचे चर्चा कर रहे हैं द्वारा निर्धारित किया जाता है:
- पौधों के स्वास्थ्य और उनकी उम्र के प्राथमिक महत्व के हैं. लगभग एक महीने पुराने कई अपरिपक्व पुष्प कलियो?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम Chunxin वांग pTSO2 निर्माण करने के लिए धन्यवाद: गस और उपयोगी टिप्पणी के लिए प्रोटोकॉल गस आसान, Paja Sijacic, और कोर्टनी Hollender साझा करने के लिए चित्रा 1, Detlef Weigel में तस्वीरों के लिए. जेड एस एल प्रयोगशाला में अनुसंधान अमेरिका के राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (IOB0616096 और MCB0744752) द्वारा समर्थित है. ZL आंशिक रूप से मैरीलैंड कृषि प्रयोग स्टेशन के विश्वविद्यालय द्वारा समर्थित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 6-benzyladenine | Sigma | 852430 | ||
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Toxic, wear gloves | ||
| Murashige and Skoog Basal medium (MS) | Sigma | M5519 | ||
| Gamborg’s vitamin solution 1000X | Sigma | G1019 | ||
| X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt | Biosynth | B-7300 | Toxic, light sensitive keep in the dark | |
| Micropore 3M Tape | Fisher | 19027761 |
References
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).
- Wang, C., Liu, Z. Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development. Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).
