النظر في هيكل G - المتراكمة في التيلومير المثقبية البروسية</em
Summary
التيلوميرات ضرورية لتحقيق الاستقرار كروموسوم والتيلومير G – عبء بنية أساسية لتيلوميراز بوساطة صيانة التيلومير. اعتمدنا مؤخرا طريقتين للكشف عن التيلومير G – المتراكمة في هيكل<em> المثقبية البروسية</em> ، الذي هم السكان الأصليون في جل التهجين وربط التمديد بوساطة التمهيدي ، والتي سيتم وصفها.
Abstract
تم التعرف على مجموعة عبء التيلومير هيكل في حقيقيات النوى بما في ذلك العديد من الخميرة ، والفقاريات ، والمثقبية البروسية. انها بمثابة الركيزة لتيلوميراز لنوفو توليف الحمض النووي دي التيلومير ولذا فمن المهم للصيانة التيلومير. T. البروسية هو طفيلي الذي يسبب مرض النوم في البشر والماشية في nagana. الثدييات المضيفة المصابة مرة واحدة ، T. البروسية خلية مفاتيح مستضد سطحه بانتظام لتجنب هجوم المضيف المناعية. وقد أثبتت لنا مؤخرا أن T. البروسية التيلومير هيكل يلعب دورا أساسيا في تنظيم التعبير الجيني مستضد السطح ، وهو أمر حاسم بالنسبة T. البروسية المرضية. ومع ذلك ، T. لم البروسية التيلومير هيكل درس على نطاق واسع نظرا لمحدودية وسائل لتحليل هذه البنية المتخصصة. لدينا الآن اعتمدت بنجاح الأصلي في هلام التهجين وربط التمديد بوساطة أساليب الفحص التمهيدي للهيكل G – عبء التيلومير وسيلة ربط محول للعزم محطة التيلومير النوكليوتيدات في T. خلايا البروسية. هنا ، فإننا سوف تصف البروتوكولات بالتفصيل ومقارنة مزاياها المختلفة والقيود.
Protocol
Discussion
المثقبية البروسية يسبب مرض النوم في البشر. هذا المرض ، إذا ما تركت دون علاج ، إلى الوفاة لا محالة. T. البروسية في خلايا الثدييات يستضيف اختلاف مستضدي الخضوع بشكل منتظم من أجل التهرب من هجوم المضيف المناعي 7. وبالتالي فإنه من الصعب جدا للقضاء على T. تم…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نود أن نشكر الدكتورة كارولين السعر للمناقشات العلمية والاقتراحات الثاقبة. ويؤيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح AI066095 (PI : بيبو لى).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SeaKem LE Agarose | Lonza | 50004 | ||
| Agarose Type VII (low melting agarose) | Sigma | A4018 | ||
| Proteinase K, recombinant, PCR grade | Roche Diagnostic | 03 115801001 | ||
| Exo I | NEB | M0293 | ||
| Exo T | NEB | M0265 | ||
| T7 exonuclease | NEB | M0263 | ||
| T4 DNA polymerase | NEB | M0203 | ||
| QIAquick nucleotide removal kit | Qiagen | 28304 |
References
- Munoz-Jordan, J. L., Cross, G. A., de Lange, T., Griffith, J. D. t-loops at trypanosome telomeres. EMBO J. 20, 579-588 (2001).
- Li, B., Espinal, A., Cross, G. A. M. Trypanosome telomeres are protected by a homologue of mammalian TRF2. Mol Cell Biol. 25, 5011-5021 (2005).
- Wellinger, R. J., Wolf, A. J., Zakian, V. A. Saccharomyces telomeres acquire single-strand TG1-3 tails late in S phase. Cell. 72, 51-60 (1993).
- McElligott, R., Wellinger, R. J. The terminal DNA structure of mammalian chromosomes. EMBO J. 16, 3705-3714 (1997).
- Harrington, L. A., Greider, C. W. Telomerase primer specificity and chromosome healing. Nature. 353, 451-454 (1991).
- Jacob, N. K., Skopp, R., Price, C. M. G-overhang dynamics at Tetrahymena telomeres. Embo J. 20, 4299-4308 (2001).
- Barry, J. D., McCulloch, R. Antigenic variation in trypanosomes: enhanced phenotypic variation in a eukaryotic parasite. Adv Parasitol. 49, 1-70 (2001).
- Yang, X., Figueiredo, L. M., Espinal, A., Okubo, E., Li, B. RAP1 is essential for silencing telomeric variant surface glycoprotein genes in Trypanosoma brucei. Cell. 137, 99-109 (2009).
