Рассмотрение теломер G-навес структуры в Trypanosoma brucei</em
Summary
Теломеры имеют важное значение для стабильности и хромосом теломеры G-навес структура будет необходима для теломеразы-опосредованной обслуживание теломер. Мы недавно приняли два метода для обнаружения теломер G-навес структуры в<em> Trypanosoma brucei</em>, Которые являются родными в-гель гибридизации и лигирования-опосредованной удлинения праймера, который будет описан.
Abstract
Теломер G-навес структуры были выявлены во многих эукариот, включая дрожжи, позвоночных и Trypanosoma brucei. Она служит в качестве субстрата для теломеразы для вновь синтеза ДНК теломер и, следовательно, важным для поддержания теломер. Т. brucei является простейшим паразитом, который вызывает сонную болезнь у людей и Нагана крупного рогатого скота. После заражения млекопитающего, Т. brucei клетка регулярно переключает свой поверхностный антиген уклониться от иммунной атаки хозяев. Недавно мы показали, что Т. brucei теломер структура играет важную роль в регулировании поверхностного антигена экспрессии генов, которая имеет решающее значение для Т. brucei патогенез. Тем не менее Т. brucei теломер структура не изучена из-за ограничений методов анализа этой специализированной структуры. Мы уже успешно внедрен в родном-гель гибридизации и лигирования-опосредованной удлинения праймера методы изучения теломер G-навес структуры и метод перевязки адаптер для определения теломеров терминал нуклеотид в Т. brucei клеток. Здесь мы опишем протоколов в деталях и сравнить их преимущества и ограничения.
Protocol
Discussion
Trypanosoma brucei причины сонной болезни у людей. Это заболевание, если его не лечить, неизбежно фатальным. Т. brucei клеток млекопитающих хостов пройти антигенные изменения регулярно, так как уклониться от иммунной атаки хозяина 7. Следовательно, очень трудно устранить Т. brucei …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы хотели бы поблагодарить доктора Каролин Цена для научных дискуссий и проницательный предложения. Эта работа проводится при поддержке гранта NIH AI066095 (PI: Бибо Li).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SeaKem LE Agarose | Lonza | 50004 | ||
| Agarose Type VII (low melting agarose) | Sigma | A4018 | ||
| Proteinase K, recombinant, PCR grade | Roche Diagnostic | 03 115801001 | ||
| Exo I | NEB | M0293 | ||
| Exo T | NEB | M0265 | ||
| T7 exonuclease | NEB | M0263 | ||
| T4 DNA polymerase | NEB | M0203 | ||
| QIAquick nucleotide removal kit | Qiagen | 28304 |
References
- Munoz-Jordan, J. L., Cross, G. A., de Lange, T., Griffith, J. D. t-loops at trypanosome telomeres. EMBO J. 20, 579-588 (2001).
- Li, B., Espinal, A., Cross, G. A. M. Trypanosome telomeres are protected by a homologue of mammalian TRF2. Mol Cell Biol. 25, 5011-5021 (2005).
- Wellinger, R. J., Wolf, A. J., Zakian, V. A. Saccharomyces telomeres acquire single-strand TG1-3 tails late in S phase. Cell. 72, 51-60 (1993).
- McElligott, R., Wellinger, R. J. The terminal DNA structure of mammalian chromosomes. EMBO J. 16, 3705-3714 (1997).
- Harrington, L. A., Greider, C. W. Telomerase primer specificity and chromosome healing. Nature. 353, 451-454 (1991).
- Jacob, N. K., Skopp, R., Price, C. M. G-overhang dynamics at Tetrahymena telomeres. Embo J. 20, 4299-4308 (2001).
- Barry, J. D., McCulloch, R. Antigenic variation in trypanosomes: enhanced phenotypic variation in a eukaryotic parasite. Adv Parasitol. 49, 1-70 (2001).
- Yang, X., Figueiredo, L. M., Espinal, A., Okubo, E., Li, B. RAP1 is essential for silencing telomeric variant surface glycoprotein genes in Trypanosoma brucei. Cell. 137, 99-109 (2009).
