Die Untersuchung der Telomere G-Überhang Struktur in Trypanosoma brucei
Summary
Telomere sind unerlässlich für das Chromosom Stabilität und die Telomer-G-Überhang Struktur ist essentiell für Telomerase-vermittelte Telomererhaltung. Wir haben vor kurzem zwei Verfahren zum Nachweis der Telomer-G-Überhang Struktur in verabschiedet<em> Trypanosoma brucei</em> Sind die einheimischen In-Gel-Hybridisierung und Ligation-vermittelte Primer-Extension, die beschrieben werden.
Abstract
Die Telomer-G-Überhang Struktur hat sich in vielen Eukaryonten, einschließlich Hefe, Wirbeltieren und Trypanosoma brucei identifiziert worden. Es dient als Substrat für die Telomerase für die de novo Telomere DNA-Synthese und ist daher für Telomererhaltung wichtig. T. brucei ist ein einzelliger Parasit, dass die Schlafkrankheit bei Menschen und Nagana bei Rindern verursacht. Einmal infiziert Säugerwirt, T. brucei Zelle regelmäßig wechselt seinen Oberflächen-Antigen auf das Immunsystem des Wirts Angriff auszuweichen. Wir haben kürzlich gezeigt, dass die T. brucei Telomer-Struktur spielt eine wesentliche Rolle bei der Regulation der Oberflächen-Antigen Genexpression, die kritisch für T. ist brucei Pathogenese. Allerdings T. brucei Telomer-Struktur noch nicht ausführlich untersucht worden aufgrund der Begrenzung von Methoden zur Analyse dieser speziellen Struktur. Wir haben nun erfolgreich die einheimische In-Gel-Hybridisierung und Ligation-vermittelte Primer-Extension-Methoden zur Untersuchung der Telomer-G-Überhang-Struktur und eine Adaptorligation Methode zur Bestimmung der Telomere terminalen Nukleotids in T. angenommen brucei Zellen. Hier werden wir die Protokolle im Detail zu beschreiben und vergleichen ihre verschiedenen Vor-und Nachteile.
Protocol
Discussion
Trypanosoma brucei verursacht Schlafkrankheit beim Menschen. Diese Krankheit, die unbehandelt unweigerlich tödlich. T. brucei Zellen in Säugetierwirten unterziehen antigene Variation regelmäßig, so dass das Immunsystem des Wirts Attacke 7 auszuweichen. Daher ist es sehr schwierig, T. beseitigen brucei Zellen einmal eine Infektion festgestellt wird. Wir haben kürzlich gezeigt, dass die Telomere eine wichtige Rolle spielen bei der Regulierung der Expression von T. br…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir möchten Dr. Carolyn Preis für wissenschaftliche Diskussionen und aufschlussreiche Anregungen bedanken. Diese Arbeit wird durch NIH AI066095 (: Bibo Li PI) unterstützt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SeaKem LE Agarose | Lonza | 50004 | ||
| Agarose Type VII (low melting agarose) | Sigma | A4018 | ||
| Proteinase K, recombinant, PCR grade | Roche Diagnostic | 03 115801001 | ||
| Exo I | NEB | M0293 | ||
| Exo T | NEB | M0265 | ||
| T7 exonuclease | NEB | M0263 | ||
| T4 DNA polymerase | NEB | M0203 | ||
| QIAquick nucleotide removal kit | Qiagen | 28304 |
References
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