Telomer G-çıkıntı Yapısı incelenmesi Trypanosoma brucei</em
Summary
Telomerler kromozom istikrar için çok önemlidir ve telomer G-çıkıntı yapısı, telomeraz aracılı telomer bakımı için önemlidir. Biz son zamanlarda telomer G-çıkıntı yapı tespit etmek için iki yöntem kabul<em> Trypanosoma brucei</em> Jel hibridizasyon ve açıklanacaktır ligasyonu aracılı astar uzantısı, yerli vardır.
Abstract
Maya, omurgalıların ve Trypanosoma brucei dahil olmak üzere pek çok ökaryotlarda telomer G-çıkıntı yapı tespit edilmiştir. Telomeraz için de novo telomer DNA sentezi için substrat olarak görür ve bu nedenle telomer bakımı için önemlidir. T. brucei sığır ve nagana insanlarda uyku hastalığa neden olan bir protozoa bir parazittir . Hastalığa yakalandıktan sonra konak memeli, T. brucei hücre yüzey antijeni konağın bağışıklık saldırı kaçınmak için düzenli geçer. Yakın zamanda göstermiştir ki T. brucei telomer yapısı T. için kritik yüzey antijeni gen ekspresyonu, düzenlenmesinde önemli bir rol oynar brucei patogenezinde. Ancak, T. brucei telomer yapısı bu özel yapının analizi için yöntemler sınırlaması nedeniyle yoğun çalışma yapılmamıştır. Şimdi başarıyla hibridizasyon ve telomer G-çıkıntı yapısının incelenmesi ve T. telomer terminal nükleotid belirlenmesi için bir adaptör ligasyonu yöntemi ligasyonu aracılı astar uzatma yöntemleri jel doğal kabul brucei hücreleri. Burada ayrıntılı olarak protokolleri anlatmak ve onların farklı avantajları ve sınırlamaları karşılaştırın.
Protocol
Discussion
Trypanosoma brucei insanlarda hastalık uyku neden olur. Bu hastalık, tedavi edilmediği takdirde, kaçınılmaz olarak ölümcül T. memeli ev sahipliği brucei hücrelerin düzenli konağın bağışıklık saldırı 7 kaçınmak için antijenik değişim yaşanmadığını. Bu nedenle T. ortadan kaldırmak için çok zordur. brucei bir enfeksiyon kez hücreleri kurulmuştur. Biz son zamanlarda telomer T. ifade düzenlenmesinde önemli bir rol oynadığ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz bilimsel tartışmalar ve anlayışlı önerileri için Dr. Carolyn Fiyat teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma NIH hibe AI066095 (PI: Bibo Li) tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SeaKem LE Agarose | Lonza | 50004 | ||
| Agarose Type VII (low melting agarose) | Sigma | A4018 | ||
| Proteinase K, recombinant, PCR grade | Roche Diagnostic | 03 115801001 | ||
| Exo I | NEB | M0293 | ||
| Exo T | NEB | M0265 | ||
| T7 exonuclease | NEB | M0263 | ||
| T4 DNA polymerase | NEB | M0203 | ||
| QIAquick nucleotide removal kit | Qiagen | 28304 |
References
- Munoz-Jordan, J. L., Cross, G. A., de Lange, T., Griffith, J. D. t-loops at trypanosome telomeres. EMBO J. 20, 579-588 (2001).
- Li, B., Espinal, A., Cross, G. A. M. Trypanosome telomeres are protected by a homologue of mammalian TRF2. Mol Cell Biol. 25, 5011-5021 (2005).
- Wellinger, R. J., Wolf, A. J., Zakian, V. A. Saccharomyces telomeres acquire single-strand TG1-3 tails late in S phase. Cell. 72, 51-60 (1993).
- McElligott, R., Wellinger, R. J. The terminal DNA structure of mammalian chromosomes. EMBO J. 16, 3705-3714 (1997).
- Harrington, L. A., Greider, C. W. Telomerase primer specificity and chromosome healing. Nature. 353, 451-454 (1991).
- Jacob, N. K., Skopp, R., Price, C. M. G-overhang dynamics at Tetrahymena telomeres. Embo J. 20, 4299-4308 (2001).
- Barry, J. D., McCulloch, R. Antigenic variation in trypanosomes: enhanced phenotypic variation in a eukaryotic parasite. Adv Parasitol. 49, 1-70 (2001).
- Yang, X., Figueiredo, L. M., Espinal, A., Okubo, E., Li, B. RAP1 is essential for silencing telomeric variant surface glycoprotein genes in Trypanosoma brucei. Cell. 137, 99-109 (2009).
