בחינת מבנה ה-G-הסככה הטלומרים ב Trypanosoma brucei</em
Summary
הטלומרים חיוניים יציבות הכרומוזום ואת מבנה הטלומרים G-הסככה חיוני תחזוקה telomerase בתיווך הטלומרים. אימצנו לאחרונה שתי שיטות לאיתור מבנה הטלומרים G-הסככה ב<em> Trypanosoma brucei</em>, שהם הילידים ג'ל הכלאה לבין קשירת בתיווך הרחבה פריימר, אשר יתוארו.
Abstract
מבנה ה-G-הסככה הטלומרים זוהתה אאוקריוטים רבים, כולל שמרים, חוליות, ו Trypanosoma brucei. היא משמשת מצע עבור telomerase עבור סינתזה דה נובו הטלומרים בדנ"א, ולכן הוא חשוב לצורך תחזוקה הטלומרים. ט brucei הוא טפיל protozoan שגורמת מחלת השינה בבני אדם nagana בבקר. המארח יונקים נגועים פעם, ט תא brucei בקביעות מתגים אנטיגן פני השטח שלו להתחמק ההתקפה החיסונית של המארח. אנחנו הוכיחו לאחרונה כי ט מבנה brucei הטלומרים ממלא תפקיד חיוני בוויסות ביטוי הגנים אנטיגן פני השטח, שהוא קריטי עבור T. brucei בפתוגנזה. עם זאת, ט ' מבנה brucei הטלומרים לא נחקרה בהרחבה עקב הגבלה של שיטות ניתוח של מבנה זה המקצועית. יש לנו עכשיו אימצו בהצלחה את הילידים ג'ל הכלאה ו בתיווך קשירת תחל הרחבה שיטות בדיקה של מבנה ה-G-הסככה הטלומרים וכן קשירת מתאם שיטה לקביעת המסוף הטלומרים נוקלאוטיד ב ט brucei תאים. כאן, נתאר את הפרוטוקולים בפירוט ולהשוות יתרונות שונים שלהם ואת המגבלות.
Protocol
Discussion
Trypanosoma brucei גורם מחלת השינה אצל בני אדם. מחלה זו, אם אינו מטופל, הוא קטלני באופן בלתי נמנע. ט תאים brucei ב המארחים יונקים לעבור וריאציה antigenic בקביעות כדי להתחמק ההתקפה החיסונית של המארח 7. לכן קשה מאוד לחסל ט תאים brucei פעם דלקת היא הוקמה. אנחנו ה?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ברצוננו להודות מחיר ד"ר קרולין לדיונים מדעיים הצעות תובנה. עבודה זו נתמכת על ידי NIH מענק AI066095 (PI: Bibo Li).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SeaKem LE Agarose | Lonza | 50004 | ||
| Agarose Type VII (low melting agarose) | Sigma | A4018 | ||
| Proteinase K, recombinant, PCR grade | Roche Diagnostic | 03 115801001 | ||
| Exo I | NEB | M0293 | ||
| Exo T | NEB | M0265 | ||
| T7 exonuclease | NEB | M0263 | ||
| T4 DNA polymerase | NEB | M0203 | ||
| QIAquick nucleotide removal kit | Qiagen | 28304 |
References
- Munoz-Jordan, J. L., Cross, G. A., de Lange, T., Griffith, J. D. t-loops at trypanosome telomeres. EMBO J. 20, 579-588 (2001).
- Li, B., Espinal, A., Cross, G. A. M. Trypanosome telomeres are protected by a homologue of mammalian TRF2. Mol Cell Biol. 25, 5011-5021 (2005).
- Wellinger, R. J., Wolf, A. J., Zakian, V. A. Saccharomyces telomeres acquire single-strand TG1-3 tails late in S phase. Cell. 72, 51-60 (1993).
- McElligott, R., Wellinger, R. J. The terminal DNA structure of mammalian chromosomes. EMBO J. 16, 3705-3714 (1997).
- Harrington, L. A., Greider, C. W. Telomerase primer specificity and chromosome healing. Nature. 353, 451-454 (1991).
- Jacob, N. K., Skopp, R., Price, C. M. G-overhang dynamics at Tetrahymena telomeres. Embo J. 20, 4299-4308 (2001).
- Barry, J. D., McCulloch, R. Antigenic variation in trypanosomes: enhanced phenotypic variation in a eukaryotic parasite. Adv Parasitol. 49, 1-70 (2001).
- Yang, X., Figueiredo, L. M., Espinal, A., Okubo, E., Li, B. RAP1 is essential for silencing telomeric variant surface glycoprotein genes in Trypanosoma brucei. Cell. 137, 99-109 (2009).
