审核端粒G -悬结构锥虫布氏</em
Summary
端粒是染色体的稳定至关重要，并介导的端粒酶的端粒维持端粒G -悬结构是必不可少的。最近，我们通过两种方法检测端粒G -悬结构<em>锥虫布氏</em>，这是原生 – 凝胶杂交和连接介导的引物延伸，这将是描述。
Abstract
端粒的G -悬结构已被确定在许多真核生物，包括酵母，脊椎动物和布氏锥虫。它作为基板从头端粒DNA合成的端粒酶，因此，重要的端粒维持 T 。 布氏是一种原生动物寄生虫引起的睡眠疾病在人类和牛的那加那病。一旦被感染的哺乳动物主机， T.定期交换机布氏细胞的表面抗原，以逃避宿主的免疫攻击。我们最近表明的T.布氏端粒的结构起着至关重要的作用，在调控的表面抗原基因的表达，这是 T的关键布氏的发病机制。然而，T.布氏端粒的结构还没有被广泛研究，由于这个专门的结构分析方法的局限性。我们现在已经成功地通过在凝胶杂交和连接介导的引物延长端粒G -悬结构， 在 T核苷酸测定端粒终端适配器结扎方法检查方法的原生布氏细胞。在这里，我们将详细描述了协议，并比较其不同的优势和局限。
Protocol
1。检测T。布氏端粒G -悬使用母语-凝胶杂交3 原理（图1）：在自然条件下，结束标记（CCCTAA）4（TELC）寡核苷酸探针只能杂交的单链端粒G -悬地区。杂交强度悬的长度成正比。变性，中和后，相同的探测器将能够杂交整个端粒区域。杂交强度代表总端粒DNA量和可用于装载控制。这个实验的两个标准控制杂交使用末端标记（TTAGGG）4（TELG）寡核苷酸…
Discussion
布氏锥虫引起睡在人类的疾病。这种疾病，如果不及时治疗，必然是致命的 T 。 布氏在哺乳动物宿主细胞进行定期抗原变异，以逃避宿主的免疫攻击7。因此，它是非常难以消除T。布氏一旦感染细胞的建立。最近，我们已经证明， 端粒 T的表达调控发挥了重要作用布氏表面抗原基因8。因此，重要的是进一步了解在 T端粒维持端粒的?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们想感谢卡罗琳价格博士科学讨论和有见地的建议。这项工作是由美国国立卫生研究院授予AI066095（PI李：碧波）的支持。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SeaKem LE Agarose | Lonza | 50004 | ||
| Agarose Type VII (low melting agarose) | Sigma | A4018 | ||
| Proteinase K, recombinant, PCR grade | Roche Diagnostic | 03 115801001 | ||
| Exo I | NEB | M0293 | ||
| Exo T | NEB | M0265 | ||
| T7 exonuclease | NEB | M0263 | ||
| T4 DNA polymerase | NEB | M0203 | ||
| QIAquick nucleotide removal kit | Qiagen | 28304 |
References
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Cite This Article
Sandhu, R., Li, B. Examination of the Telomere G-overhang Structure in Trypanosoma brucei. J. Vis. Exp. (47), e1959, doi:10.3791/1959 (2011).