Overview
このビデオでは、成体ゼブラフィッシュの素因性細胞へのDNA送達の技術である 生体内 エレクトロポレーションについて説明します。
Protocol
1. エレクトロポレーション
- スポンジに保持しながら、注射のセットアップから魚を削除します。
- 電極の先端の内側を超音波ゲルに浸します。
- 少量の超音波ゲルで魚のテレンスファルンをカバーします。
- 魚の頭部を電極の間に置き、正極を魚の頭部の腹側に置き、負極を裏側(図1C)に置き、魚の体をスポンジに保持したままにします。これは、室外領域に位置するエペンディモリアを電気ポポレートするために必要な電流の流れの方向を設定する。
- 電極をテレンセバロンに対して穏やかに正確に押し付け(図1C)。フットペダルで電流を管理します。5つのパルスがすべて完成するまで電極を所定の位置に保持します。
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Representative Results
図1:常にゼブラフィッシュのテレンスファロンのコロナセクションの模式図表.(A)ゼブラフィッシュ・テレンスファロンのコロナ・セクションのスキームは、心室表面を裏打ちし、腹室室壁を構築しているエピデンディモリア細胞の位置を強調する。後末層は、2つの半球をつなぎ、心室(V)を覆い、2つの細胞層の間に位置する、エペンディモリアとエペンディマルである。(B)左に、上から撮影したゼブラフィッシュの頭部の写真が、テレンスファロンの位置を白い破線で強調している。ガラスキャピラリーは、毛細血管挿入のターゲット部位と一緒に赤で描かれています。右の写真は、プラスミド注射の位置を赤色で示すゼブラフィッシュ脳の模式図である。ガラスの毛細管はテレンスファルに触れないし、プラスミドが心室にテレンスファルンのすぐ上に注入されることに留意すべきである。T = テレンスファロン、OT = 光学テクタム。(C)左に描かれているのはゼブラフィッシュヘッドの写真(側面図)で、右側はテレンセバロンをターゲットにするための電極の位置を示すヘッド(側面図)の描写である。
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Ultrasound gel | SignaGel, Parker laboratories INC | 15-60 | Electrode Gel |
BTX Tweezertrodes Electrodes | Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus | 45-0486 | 1mm diameter |
Electroporation device | BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus | 45-0662 |