Study Gliazellen Heterogenität Einfluss auf Axon Wachstum Mit einer neuen Methode Cokultur
Summary
In diesem Protokoll beschrieben wir eine neue Methode, um den Einfluss von Gliazellen Heterogenität auf Axon Wachstum mit einer Studie<em> In-vitro-</em> Co-Kultur-System. Rat kortikalen Gliazellen wurden bis zur Konfluenz kultiviert und kokultiviert mit hoch gereinigtem Ratten Spinalganglien Neuronen. Verschiedene Gliazellen Einfluss auf Neuronen Haftung und Axon-Wachstum wurde direkt in der gleichen Kultur verglichen. Diese Methode bietet eine neue Möglichkeit, direkt Studie der Gliazellen Heterogenität Einfluss auf Neuron Adhäsion und Wachstum der Axone.
Abstract
In dem zentralen Nervensystem von Säugetieren, sind abgetrennte Axone nach einer Verletzung nicht in ihre ursprünglichen Ziele und funktionelle Wiederherstellung zu regenerieren ist sehr schlecht 1. Das Scheitern der Axonregeneration ist ein kombiniertes Ergebnis von mehreren Faktoren ab, einschließlich der feindlichen Gliazellen Umwelt, hemmende Myelin verwandten Molekülen und verminderte innere Neuron regenerative Kapazität 2. Astrozyten sind der vorherrschende Typ Gliazellen im zentralen Nervensystem und spielen eine wichtige Rolle bei der Axon-Funktionen unter Physiologie und Pathologie Bedingungen 3. Gegensatz zu den homologen Oligodendrozyten, Astrozyten sind eine heterogene Zellpopulation durch verschiedene Astrozyten Subpopulationen mit unterschiedlichen Morphologien und Genexpression 4 zusammen. Die funktionelle Bedeutung dieser Heterogenität, wie ihre Einflüsse auf die Axon-Wachstum, ist weitgehend unbekannt.
Zur Untersuchung der Gliazellen, vor allem die Funktion der Astrozyten Heterogenität in Neuron Verhalten, haben wir eine neue Methode durch Co-Kultivierung hoch gereinigten Spinalganglien Neuronen mit Gliazellen aus der Ratte Cortex erhalten. Mit dieser Technik konnten wir den direkten Vergleich Neuron Haftung und Axon-Wachstum auf verschiedenen Astrozyten Subpopulationen unter den gleichen Bedingungen.
In diesem Bericht geben wir die ausführliche Protokoll dieser Methode für Astrozyten Isolation und Kultur, Spinalganglien Neuronen Isolierung und Aufreinigung, und die Co-Kultur von DRG-Neuronen mit Astrozyten. Diese Methode könnte auch auf andere Hirnregionen erweitert werden, um zelluläre oder regional spezifische Wechselwirkung zwischen Neuronen und Gliazellen zu studieren.
Protocol
Discussion
This experiment protocol was designed to reach two goals to study glial cells, especially astrocyte heterogeneity’s influence on neuron adhesion and neurite growth. The first goal was to maintain astrocyte heterogeneity as much as possible, in this experiment, the confluent glial cell culture enriched astrocytes was mixed primary culture without any chemical treatment and digestion propagation, which may further damage the cell and induce injury response of astrocytes. The final astrocyte purity is more than 90% GFAP pos…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Studie wurde von FMMU neue Erkenntnis Stiftung und teilweise NIH finanziell unterstützt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM(high glucose) | Invitrogen | 10313-039 | ||
| L15 medium | Invitrogen | 11415-114 | ||
| FBS | Invitrogen | 10437-077 | ||
| Neurobasal Medium | Invitrogen | 21103-049 | ||
| poly-lysine | Sigma | P4832 | culture grade | |
| NGF(2.5S) | Invitrogen | 13257-019 | ||
| B27 supplyment | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| FUDR | Sigma | F0503 | ||
| neurofilament antibody | Abcam | ab24575 |
References
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