新しい共培養法を用いた軸索の成長に関する研究グリア細胞の不均一性の影響
Summary
このプロトコルでは、我々は、ある軸索の成長にグリア細胞の不均一性の影響を研究する新しい方法を説明<em> in vitroで</em>共培養系。ラット皮質グリア細胞をコンフルエントに培養し、高度にラットの後根神経節の神経細胞を精製して培養した。神経細胞の接着や軸索の成長上の別のグリア細胞の影響は、同じ文化の中で直接比較した。このメソッドは、直接神経細胞の接着や軸索の成長に対するグリア細胞の不均一性の影響を研究する新しい方法を提供します。
Abstract
すべての哺乳類の中枢神経系では、損傷後の切断軸索が元のターゲットに再生成することができないと機能回復は1非常に悪いです。軸索再生の失敗は、敵対的なグリア細胞の環境を含むいくつかの要因の組み合わせの結果である、抑制性ミエリン関連分子と内因性ニューロン再生の容量2を減少させた。アストロサイトは、中枢神経系で最も優勢なグリア細胞の種類であり、生理学及び病理学の条件3の下軸索の機能に重要な役割を果たす。相同なオリゴデンドロサイトとは対照的に、アストロサイトは、多様な形態と遺伝子発現4別の星状膠細胞亜集団によって構成される不均一な細胞集団である。このような軸索の成長に与える影響として、この不均一性の機能的意義は、、あまり知られていない。
特にグリア細胞、神経細胞の挙動におけるアストロサイト異質の機能を調べるために、我々は、ラットの大脳皮質から得られるグリア細胞と共培養する高精製された後根神経節の神経細胞によって新しい方法を確立した。この技術によって、我々が直接、同一条件で別の星状膠細胞の亜集団のニューロンの接着と軸索の成長を比較することができた。
このレポートでは、我々はこのアストロサイトの単離および培養のための方法、後根神経節ニューロンの単離及び精製、及びアストロサイトとニューロンのDRGの共培養の詳細なプロトコルを与える。この方法はまた、ニューロンとグリア細胞間の細胞または地域の特定の相互作用を研究するために他の脳領域に拡張することができます。
Protocol
Discussion
この実験のプロトコルは、グリア細胞、神経細胞の接着や神経突起の成長に特にアストロサイトの不均質性の影響を検討する2つの目標を達成するために設計されました。最初の目標は、この実験ではアストロサイトの不均一性を可能な限り、維持することでした、コンフルエントグリア細胞培養濃縮星状膠細胞は、さらに細胞を損傷し、アストロサイトの傷害応答を誘発する可能性のある化…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究はFMMU新しい発見の基盤と部分的にNIHの資金提供によってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM(high glucose) | Invitrogen | 10313-039 | ||
| L15 medium | Invitrogen | 11415-114 | ||
| FBS | Invitrogen | 10437-077 | ||
| Neurobasal Medium | Invitrogen | 21103-049 | ||
| poly-lysine | Sigma | P4832 | culture grade | |
| NGF(2.5S) | Invitrogen | 13257-019 | ||
| B27 supplyment | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| FUDR | Sigma | F0503 | ||
| neurofilament antibody | Abcam | ab24575 |
References
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