Исследование глиальных Влияние неоднородности сотовый на рост Axon Использование нового метода Coculture
Summary
В этом протоколе, мы описали новый метод изучения влияния гетерогенности глиальных ячейку аксон роста с<em> В пробирке</em> Со-системе культуры. Крыса корковых глиальные клетки культивировали до слияния и cocultured с высокоочищенного крыс нейроны ганглиев спинного корня. Различные глиальных влияние на нейроны ячейки адгезию и рост аксонов сравнивали непосредственно в той же культуре. Этот метод обеспечивает новый способ непосредственного изучения влияния гетерогенности глиальных ячейку нейрона адгезии и аксонов роста.
Abstract
В центральной нервной системе всех млекопитающих, разорвала аксоны после травмы не в состоянии регенерировать их первоначальными целями и восстановления функций очень плохое 1. Провал регенерации аксонов совместным результатом нескольких факторов, включая враждебные глиальных среде клетки, тормозящий миелина связанных молекул и снижения внутреннего нейрона регенеративной способностью 2. Астроциты являются наиболее преобладающим типом клеток глии в центральной нервной системе и играют важную роль в аксон функций в соответствии с физиологии и патологии условиях 3. Отличие от гомологичной олигодендроцитов, астроцитов являются гетерогенными популяции клеток состоит различными астроцитов субпопуляций с различными морфологии и экспрессии генов 4. Функциональное значение этой неоднородности, такие, как их влияния на рост аксонов, в значительной степени неизвестно.
Для изучения глиальных клеток, особенно функции астроцитов неоднородности в поведении нейронов, мы установили новый метод совместного культивирования высоким спинным очищенный корень ганглиев нейронов с глиальных клеток, полученных от крыс коры головного мозга. По этой техники, мы имели возможность непосредственно сравнить адгезии нейронов и аксонов роста на различных субпопуляций астроцитов при том же условии.
В данном отчете мы приводим подробный протокол этого метода для астроцитов изоляции и культуры, задний корешок ганглиях нейронах выделения и очистки, а также со-культуры DRG нейроны с астроцитов. Этот метод также может быть распространена и на другие области мозга для изучения клеточной или региональной специфики взаимодействия нейронов и глиальных клеток.
Protocol
Discussion
Этот эксперимент протокол был разработан, чтобы достичь две цели для изучения глиальных клеток, влияние особенно астроцитов неоднородности на нейрон адгезии и аксонов роста. Первая цель заключалась в поддержании астроцитов неоднородность как можно больше, в этом эксперименте, сливаю…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это исследование было поддержано FMMU новое открытие фундамент и частично NIH финансирования.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM(high glucose) | Invitrogen | 10313-039 | ||
| L15 medium | Invitrogen | 11415-114 | ||
| FBS | Invitrogen | 10437-077 | ||
| Neurobasal Medium | Invitrogen | 21103-049 | ||
| poly-lysine | Sigma | P4832 | culture grade | |
| NGF(2.5S) | Invitrogen | 13257-019 | ||
| B27 supplyment | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| FUDR | Sigma | F0503 | ||
| neurofilament antibody | Abcam | ab24575 |
References
- Rossignol, S., Schwab, M., Schwartz, M., Fehlings, M. G. Spinal cord injury: time to move?. J Neurosci. 27 (44), 11782-11792 (2007).
- Yiu, G., He, Z. Glial inhibition of CNS axon regeneration. Nat Rev Neurosci. 7 (8), 617-627 (2006).
- Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).
- Matyash, V., Kettenmann, H. Heterogeneity in astrocyte morphology and physiology. Brain Res Rev. , (2009).
- Wanner, I. B., Deik, A., Torres, M., Rosendahl, A., Neary, J. T., Lemmon, V. P., Bixby, J. L. A new in vitro model of the glial scar inhibits axon growth. Glia. 56 (15), 1691-1709 (2008).
- Kuffler, D. P., Sosa, I. J., Reyes, O. Schwann cell chondroitin sulfate proteoglycan inhibits dorsal root ganglion neuron neurite outgrowth and substrate specificity via a soma and not a growth cone mechanism. J Neurosci Res. 87 (13), 2863-2871 (2009).
- Kleitman, N., Wood, P. M., Bunge, R. P. Tissue culture method for the study of myelination. Culturing nerve cells. , P559-P559 (1998).
