Estudio de células gliales Influencia heterogeneidad de crecimiento de los axones se utiliza un método co-cultivo de Nueva
Summary
En este protocolo, que describe un nuevo método para estudiar la influencia de la heterogeneidad de las células gliales en el crecimiento del axón con una<em> In vitro</em> Co-cultura del sistema. Rata células gliales corticales se cultivaron hasta la confluencia con cocultured y altamente purificado rata dorsal neuronas de los ganglios de la raíz. Influencia de diferentes células de la glía en la adhesión de las neuronas y crecimiento de los axones se comparó directamente en la misma cultura. Este método proporciona una nueva forma de estudiar directamente la influencia de células gliales heterogeneidad en la adhesión neuronal y el crecimiento del axón.
Abstract
En el sistema nervioso central de los mamíferos, axones dañados después de una lesión no son capaces de regenerar a sus objetivos originales y la recuperación funcional es muy pobre 1. El fracaso de la regeneración axonal es el resultado combinado de varios factores, incluyendo el ambiente hostil de células gliales, las moléculas inhibidoras de mielina y disminución de la relación intrínseca capacidad de regeneración de las neuronas 2. Los astrocitos son el tipo de células gliales más predominante en el sistema nervioso central y desempeñan un papel importante en las funciones del axón en la fisiología y la patología de condiciones 3. A diferencia de los oligodendrocitos homólogos, los astrocitos son una población celular heterogénea compuesta por diferentes sub-poblaciones de astrocitos con diversas morfologías y la expresión génica 4. La importancia funcional de esta heterogeneidad, como su influencia en el crecimiento axonal, es prácticamente desconocida.
Para el estudio de las células gliales, especialmente la función de la heterogeneidad de los astrocitos en el comportamiento de las neuronas, que estableció un nuevo método de cultivo de alta co-purificado neuronas raíz dorsal ganglios con células gliales obtenido de la corteza cerebral de rata. Mediante esta técnica, hemos sido capaces de comparar directamente la adhesión neuronal y el crecimiento de los axones en las subpoblaciones astrocitos diferentes en las mismas condiciones.
En este informe, le damos el protocolo detallado de este método para el aislamiento de los astrocitos y la cultura, los ganglios de la raíz dorsal neuronas aislamiento y purificación, y el co-cultivo de neuronas DRG con los astrocitos. Este método también podría extenderse a otras regiones del cerebro para estudiar la interacción celular específica o regionales entre las neuronas y células gliales.
Protocol
Discussion
Este protocolo experimento fue diseñado para alcanzar dos metas para estudiar las células gliales, la influencia de la heterogeneidad, especialmente los astrocitos en la adhesión neuronal y el crecimiento de las neuritas. El primer objetivo era mantener la heterogeneidad de los astrocitos en lo posible, en este experimento, la confluencia de las células gliales cultura astrocitos enriquecido se mezcla la cultura primaria sin ningún tipo de tratamiento químico y la propagación de la digestión, lo cual puede daña…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este estudio fue apoyado por FMMU nueva búsqueda de fundación y en parte la financiación del NIH.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM(high glucose) | Invitrogen | 10313-039 | ||
| L15 medium | Invitrogen | 11415-114 | ||
| FBS | Invitrogen | 10437-077 | ||
| Neurobasal Medium | Invitrogen | 21103-049 | ||
| poly-lysine | Sigma | P4832 | culture grade | |
| NGF(2.5S) | Invitrogen | 13257-019 | ||
| B27 supplyment | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| FUDR | Sigma | F0503 | ||
| neurofilament antibody | Abcam | ab24575 |
References
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