תא גלייה לימוד הטרוגניות השפעה על הצמיחה אקסון בשיטה Coculture חדש
Summary
בפרוטוקול זה, אנו תיאר שיטה חדשה ללמוד את השפעת ההטרוגניות תא גליה על צמיחת האקסון עם<em> במבחנה</em> שיתוף התרבות המערכת. קליפת המוח עכברוש ותאי גלייה היו בתרבית כדי מפגש ו cocultured עם מטוהרים מאוד הגבי עכברוש שורש עצב הגרעינים. תאים שונים להשפיע על גליה הידבקות נוירונים וצמיחה האקסון הושווה ישירות באותה תרבות. שיטה זו מספקת דרך חדשה ישירות ללמוד תא גלייה ההטרוגניות השפעה על הידבקות נוירון וצמיחה האקסון.
Abstract
במערכת העצבים המרכזית של כל היונקים, אקסונים ניתק לאחר פציעה אינם מסוגלים להתחדש ליעדים המקוריים שלהם התאוששות תפקודית ירודה מאוד 1. הכישלון של התחדשות האקסון הוא תוצאה משולבת של מספר גורמים, כולל סביבה עוינת תא גלייה, מעכבות מולקולות הקשורות המיאלין וירידה יכולת ההתחדשות הפנימית נוירון 2. האסטרוציטים הם סוג השולט ביותר תא גליה במערכת העצבים המרכזית לשחק תפקיד חשוב בפונקציות האקסון תחת הפיזיולוגיה והפתולוגיה התנאים 3. בניגוד הומולוגיים oligodendrocytes, האסטרוציטים הם אוכלוסייה הטרוגנית תא שהלחין subpopulations astrocyte מורפולוגיות שונות עם מגוון ביטוי גנים 4. משמעות תפקודית של ההטרוגניות הזאת, כמו השפעות על צמיחה האקסון, אינו ידוע ברובו.
כדי לחקור את תא גלייה, בעיקר פונקציה של ההטרוגניות astrocyte בהתנהגות נוירון, הקמנו שיטה חדשה על ידי שיתוף culturing גבוה מטוהרים הגב הגרעינים נוירונים ותאי גלייה עם השורש המתקבל בקליפת חולדה. על ידי טכניקה זו, הצלחנו להשוות ישירות הידבקות נוירון וצמיחה האקסון על subpopulations האסטרוציטים שונים בתנאי אותו.
בדו"ח זה, אנו נותנים את פרוטוקול מפורט של שיטה זו של בידוד האסטרוציטים ותרבות, השורש הגבי הגרעינים נוירונים בידוד וטיהור, ואת שיתוף התרבות של נוירונים עם DRG האסטרוציטים. שיטה זו יכולה גם להיות מורחבת לאזורים אחרים במוח ללמוד אינטראקציה ספציפית הסלולר או אזורית בין נוירונים ותאי גלייה.
Protocol
Discussion
פרוטוקול הניסוי תוכנן להגיע שתי מטרות ללמוד ותאי גלייה, השפעה ההטרוגניות של astrocyte במיוחד על הידבקות נוירון וצמיחה neurite. המטרה הראשונה היתה לשמור על ההטרוגניות astrocyte ככל האפשר, בניסוי הזה, ומחוברות גליה תרבית תאים האסטרוציטים מועשר היה מעורב תרבות ראשוני ללא כל טיפול ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
מחקר זה נתמך על ידי FMMU חדש למציאת הקרן באופן חלקי במימון NIH.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM(high glucose) | Invitrogen | 10313-039 | ||
| L15 medium | Invitrogen | 11415-114 | ||
| FBS | Invitrogen | 10437-077 | ||
| Neurobasal Medium | Invitrogen | 21103-049 | ||
| poly-lysine | Sigma | P4832 | culture grade | |
| NGF(2.5S) | Invitrogen | 13257-019 | ||
| B27 supplyment | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| FUDR | Sigma | F0503 | ||
| neurofilament antibody | Abcam | ab24575 |
References
- Rossignol, S., Schwab, M., Schwartz, M., Fehlings, M. G. Spinal cord injury: time to move?. J Neurosci. 27 (44), 11782-11792 (2007).
- Yiu, G., He, Z. Glial inhibition of CNS axon regeneration. Nat Rev Neurosci. 7 (8), 617-627 (2006).
- Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).
- Matyash, V., Kettenmann, H. Heterogeneity in astrocyte morphology and physiology. Brain Res Rev. , (2009).
- Wanner, I. B., Deik, A., Torres, M., Rosendahl, A., Neary, J. T., Lemmon, V. P., Bixby, J. L. A new in vitro model of the glial scar inhibits axon growth. Glia. 56 (15), 1691-1709 (2008).
- Kuffler, D. P., Sosa, I. J., Reyes, O. Schwann cell chondroitin sulfate proteoglycan inhibits dorsal root ganglion neuron neurite outgrowth and substrate specificity via a soma and not a growth cone mechanism. J Neurosci Res. 87 (13), 2863-2871 (2009).
- Kleitman, N., Wood, P. M., Bunge, R. P. Tissue culture method for the study of myelination. Culturing nerve cells. , P559-P559 (1998).
