La transfection seule cellule dans des embryons de poulet
Summary
Utiliser pointe fine micropipettes nous injectons ADN plasmidique dans les sous-domaines de somites de poulet ou de tubes neuraux. La concentration du plasmide est ajustée pour produire seule des cellules transfectées. Nous avons ensuite permettre aux cellules de se développer en des populations clonales.
Abstract
Un thème central en biologie du développement est la diversification des lignées et l'élucidation des mécanismes sous-jacents moléculaire. Ceci implique une analyse approfondie des destins des cellules individuelles dans des conditions normales et expérimentales. À cette fin, les méthodes de transfection qui ciblent des progéniteurs simples sont une condition préalable. Nous décrivons ici une méthode techniquement simple pour la transfection des cellules individuelles dans les tissus de poulet in ovo, permettant la lignée fiables traçage ainsi que la manipulation génétique. Domaines spécifiques de tissus sont ciblés dans le somite ou du tube neural, et l'ADN est injecté directement dans l'épithélium de l'intérêt, résultant de la transfection de cellules sporadiques unique. L'utilisation des journalistes, des populations clonales peuvent par conséquent être tracée pour un maximum de trois jours, et le comportement des organismes génétiquement manipulés populations clonales peuvent être comparées à celles des contrôles. Cette méthode tire avantage de l'accessibilité de l'embryon de poulet ainsi que des outils émergents pour la manipulation génétique. Nous comparons et discutons de ses avantages sur la méthode d'électroporation largement utilisé, et les applications possibles et l'utilisation dans d'autres modèles in-vivo sont également suggérées. Nous préconisons l'utilisation de cette méthode comme un ajout important et se complètent pour la lignée actuelle des outils de traçage et d'interférence génétique.
Protocol
Discussion
La méthode décrite ci-dessus est une modification d'une technique décrite précédemment pour livrer les colorants lipophiles sous-ensembles à petites cellules ou des progéniteurs unique 3. Il a trois avantages principaux sur la technique d'électroporation standard. Premièrement, elle fournit un moyen pour le marquage avec des sites de confiance discrète dans les tissus cibles, ce qui permet beaucoup plus grande résolution spatiale que l'électroporation (voir par exemple la figure 1B, C)…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous remercions Shlomi Krispin pour l'image du tube neural. En particulier, nous reconnaissons Yuval Cannelle pour l'ouverture de la technique de transfection GFP. Ce travail a été soutenu par des subventions de la Fondation d'Israël Science, Association Française contre les Myopathies ERP, et Forschungsgemeinshaft Deutche, Collaborative Research Centre 488 à CK
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Pipette tubes | Sutter Instrument | B100-75-10 | ||
| Capillaries | Drummond Scientific | 2-000-100 | ||
| Insect needles | Watkins & Doncaster | E6871 | ||
| Pen-Strep solution | Biological Industries | 03-031-1B |
References
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