Transfección de células individuales en embriones de pollo
Summary
Usando la punta fina micropipetas se inyecta el plásmido de ADN en subdominios de somitas pollo o tubos neurales. La concentración del plásmido se ajusta a generar solo las células transfectadas. A continuación, permitir que las células se desarrollan en poblaciones clonales.
Abstract
Un tema central en la biología del desarrollo es la diversificación de los linajes y la elucidación de los mecanismos subyacentes molecular. Esto implica un análisis exhaustivo de los destinos de las células individuales, en condiciones normales y experimentales. Con este fin, los métodos de transfección que se dirigen a los progenitores solo son un requisito previo. Se describe aquí un método técnicamente sencillo para la transfección de células individuales en los tejidos de pollo in ovo, lo que permite el rastreo fiable linaje, así como la manipulación genética. Dominios específicos de tejido son orientadas dentro de los somitas o del tubo neural, y el ADN se inyecta directamente en el epitelio de interés, lo que resulta en la transfección de células individuales esporádicos. Utilizando a los periodistas, poblaciones clonales en consecuencia, puede ser rastreado hasta por tres días, y el comportamiento de manipulados genéticamente poblaciones clonales se puede comparar con la de los controles. Este método tiene la ventaja de la accesibilidad del embrión de pollo, junto con nuevas herramientas para la manipulación genética. Comparar y discutir sus ventajas sobre el método de electroporación utilizadas, y las posibles aplicaciones y su uso en otros modelos in vivo también se proponen. Abogamos por el uso de este método como un complemento importante y se complementan para el linaje actual trazado y herramientas genéticas interferencia.
Protocol
Discussion
El método descrito anteriormente es una modificación de una técnica descrita anteriormente para la entrega de colorantes lipofílicos a los subconjuntos de células pequeñas o progenitores solo 3. Tiene tres ventajas principales sobre la técnica de electroporación estándar. En primer lugar, proporciona un medio para el etiquetado de los sitios de confianza discreto en los tejidos, lo que permite una resolución mucho mayor espacio que la electroporación (véase, por ejemplo, la figura 1B, C). En segun…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Damos las gracias a Shlomi Krispin para la imagen del tubo neural. En particular, reconocemos Yuval Canela para iniciar la técnica de transfección de GFP. Este trabajo fue apoyado por becas de la Fundación Ciencias de Israel, Association Française contre les Miopatías, y Forschungsgemeinshaft Deutche, Centro de Investigación Cooperativa 488 a CK
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Pipette tubes | Sutter Instrument | B100-75-10 | ||
| Capillaries | Drummond Scientific | 2-000-100 | ||
| Insect needles | Watkins & Doncaster | E6871 | ||
| Pen-Strep solution | Biological Industries | 03-031-1B |
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