脂质囊泡介导的亲和层析法，使用磁性细胞分选（LIMACS）：一种新的方法来分析蛋白质 - 脂质相互作用
Summary
为了测试我们使用Macs和Annexin V的共轭磁珠和目标脂质和Annexin V的具有约束力的磷脂酰丝氨酸合成脂质囊泡与目标脂质的一种蛋白质的相互作用。绑定到目标脂质蛋白质纯化和分析后，从珠洗脱。
Abstract
脂蛋白质相互作用的分析是困难的，因为嵌在细胞膜的脂质，因此，无法以最净化程序。血脂作为一种替代方法，可以在平坦的表面涂层，为脂质ELISA法和等离子体共振光谱。然而，表面涂层血脂不形成微区结构，这可能是重要的脂质绑定属性。此外，这些方法不容许较大数额的蛋白结合他们的目标血脂净化。
为了克服这些限制测试脂蛋白质相互作用和净化脂质结合蛋白，我们开发了一种新的方法称为脂质囊泡介导的亲和层析法，使用磁激活细胞分选（LIMACS）。在此方法中，脂质囊泡锚脂质膜联蛋白V的Mac与目标脂质和磷脂酰准备。磷脂是一个无处不在的细胞膜磷脂，高亲和力的蛋白膜联蛋白V。使用Annexin V的共轭含有的磷脂脂质囊泡结合磁珠磁珠。当脂质囊泡与细胞培养裂解的蛋白结合的目标脂质也将受到约束珠，可以共同使用Mac纯化。这种方法也可以用来测试一个目标脂质蛋白复合物结合，如果重组蛋白重组。
我们已经用这种方法，以显示与鞘脂酰胺和合作净化前列腺凋亡反应4（4杆），蛋白结合酰胺相关aPKC非典型蛋白激酶C（aPKC）的相互作用。我们也使用这种方法，重组的重组aPKC神经酰胺与细胞极性相关的蛋白质Par6和Cdc42复杂。由于脂质囊泡可以与各种sphingo或磷脂准备，LIMACS脂质 – 蛋白相互作用密切类似于细胞膜的脂质环境提供了通用的测试。其他脂质蛋白复合物可以识别使用的脂质结合蛋白与脂质囊泡的合作纯化的蛋白质组学分析。
Protocol
Discussion
要测试的脂质和蛋白之间的相互作用，是阻碍嵌入细胞膜的脂质。细胞膜由一些脂类和蛋白质的混合物，它是在组织脂质微区或木筏。因此，微区和蛋白质的合作，净化不能明确区分，如果一种蛋白质直接结合到脂质，或仅仅是在微区结构丰富。使用涂层表面上，如脂质酶联免疫吸附或等离子体共振光谱的定义血脂的其他方法可以检测其结合蛋白的一个特定的脂质相互作用..然而，在一个有?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由美国国立卫生研究院拨款R01NS046835和R01AG034389，三月优生优育基金会授予6FY08 – 322的支持。特别感谢你致力于夫人埃莉诺布朗（美天旎生物技术，赤褐色，CA），极大地帮助她的洞察力到MACS科技。美天旎慷慨地提供实验示范使用，不需任何费用的材料。我也很感谢博士王广沪（医学院格鲁吉亚/格鲁吉亚卫生科学大学，奥古斯塔，佐治亚州）表达细胞株产生的PKCζ。也承认在格鲁吉亚/佐治亚州健康科学大学（下林美博士的董事）医学院分子医学研究所的支持。
Materials
Annexin V-conjugated magnetic beads and MACS micro and minicolumns were provided by Miltenyi Biotec, Inc. (Auburn, CA). All lipids were of highest purity and obtained from Avanti Polar Lipids (Alabaster, AL).
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