定量PCR是用于检测巨细胞病毒DNA在福尔马林固定，石蜡包埋的活检组织一个灵敏快速的方法
Summary
This protocol describes qPCR detection of cytomegalovirus in formalin-fixed, paraffin-embedded biopsy tissue, which is rapid, sensitive, specific, and useful for interpreting equivocal hematoxylin and eosin or immunohistochemical staining patterns.
Abstract
关键的是要确定在胃肠道（GI）的免疫抑制病人的呼吸道巨细胞病毒（CMV）感染，给出了发展为严重感染的风险更大。已经开发了许多实验室方法为巨细胞病毒感染的检测，包括血清学，病毒培养和分子生物学方法。通常情况下，这些方法反映全身受累的巨细胞病毒，不具体确定局部组织的参与。因此，在胃肠道中检测CMV感染是通过活检组织的传统组织学频繁进行。苏木精伊红（H＆E）染色与免疫组织化学（IHC）结合仍然检查这些切片的支柱。 H＆E和免疫组化有时会导致非典型（模棱两可）染色模式，使解释困难。它表明，定量聚合酶链反应（定量PCR）对CMV可以成功地对福尔马林固定，石蜡包埋（FFPE）的活检组织为非常执行高敏感性和特异性。本协议的目的是演示如何在临床实验室的设置进行定量PCR检测巨细胞病毒在FFPE组织活检的检测。这种方法很可能是为病人大有裨益的胃肠活检模棱两可染色巨细胞病毒的病例。
Introduction
的巨细胞病毒（CMV）感染在临床标本中的解释是非常重要的。巨细胞病毒是疱疹病毒的betaherpesvirinae亚家族的成员。类似于其他疱疹病毒，巨细胞病毒必须建立持续性或隐性感染者的能力特征是缺乏病毒复制活跃1。在压力或其他免疫抑制的时间可能会发生病毒的再活化，导致病毒复制活跃其特征在于，病毒体释放，这可以伴随疾病表现2-4。胃肠道（GI），巨细胞病毒病的症状通常包括腹部疼痛和/或血便1。
巨细胞病毒性肠胃炎的组织学诊断采用苏木精伊红（H＆E），以确定巨细胞病毒包涵体。在临床上怀疑是高还没有明显的包裹体观察病例，免疫组织化学（IHC）经常作为一种辅助的测试方法。然而，IHC也可以通过稀有非经典出现细胞染色模式（模棱两可）的阻碍，使得难以解释（ 图2）5。它试图利用DNA从福尔马林固定，石蜡包埋（FFPE）的GI活检组织和定量聚合酶链反应（定量PCR）来检测CMV胃肠活检萃取。该技术已被证明是有价值的巨细胞病毒在胃肠活检的检测，并且特别有用的模棱两可的IHC染色例5,6。此外，定量PCR也显示出额外的巨细胞病毒临床试验数据以及相关可用时6。在检测巨细胞病毒使用的qPCR可能会导致早期诊断和治疗的情况下，临床怀疑为巨细胞病毒是很高，但H＆E和CMV免疫组化是否定的。
Protocol
Representative Results
Discussion
许多实验室方法可用于巨细胞病毒的诊断病毒（CMV）感染，包括血清学，病毒培养，分子血症测定法，活组织检查材料的组织学，并且，最近表明，分子的福尔马林固定，石蜡包埋（FFPE）的活检测定组织5,6。血清学检查，一旦确诊的中流砥柱，只有可靠地识别风险，并不会与急性CMV感染7很好的相关性。病毒培养，常规和早期抗原壳小瓶中，通过长时间的测定时间的阻碍，在后者<…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们承认艾米托马森为她准备这篇稿子帮助和弗雷德里克Skarstedt和Ryan克里斯蒂他们在数字的准备工作。
Materials
| 1.7 mL microfuge tubes | Costar | 3620 | |
| serrated forceps | Electron Microscopy Services | 62086-1S | Micro Forceps MF-1 |
| Tabletop centrifuges (microfuge) | Eppendorf | 5424 | |
| Xylene | Fisher | Fisher Scientific: X3P | 1 gallon |
| Ethanol | Fisher | Fisher Scientific: ET108 | 96-100% |
| microtome | Leica | RM2255 | |
| QIAamp DNA FFPE Tissue Kit | Qiagen | 56404 | |
| artus CMV LightCycler PCR ASR | Qiagen | 4500025 | |
| CMV LC PCR Supplement Kit | Qiagen | 1031873 | |
| LightCycler centrifuge | Roche | 75005087 | |
| LightCycler Cooling Block | Roche | 10800058001 | |
| LightCycler Capping Tool | Roche | 3357317 | |
| Color Compensation Kit | Roche | 2158850 | |
| LightCycler 20 μL Capillaries | Roche | 1 909 339 | |
| blades | Sakura | Fisher Scientific: 4689 | Accu-Edge low profile |
References
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