त्वचा माइक्रो Grafts पीढ़ी के लिए एक नई विधि disaggregation के बाद ऊतक विशेषता
Summary
प्रोटोकॉल एक नई विधि मानव ऊतकों disaggregate और ऑटोलॉगस सूक्ष्म ग्राफ्ट कि, कोलेजन स्पंज के साथ संयुक्त, त्वचा के घावों के उपचार में उपयोग के लिए तैयार मानव जैव परिसरों को जन्म दे बनाने के लिए वर्णन करता है। इसके अलावा, इस प्रणाली यांत्रिक disaggregation के बाद अलग अलग समय पर सूक्ष्म grafts के सेल व्यवहार्यता को बरकरार रखता है।
Abstract
कई नए तरीकों, सर्जरी के दौरान ऑटोलॉगस सेलुलर निलंबन प्राप्त करने के लिए जैव प्रौद्योगिकी के क्षेत्र में विकसित किया गया है क्रम में तीव्र और जीर्ण त्वचा के घावों के लिए एक कदम और उपचार प्रदान करने के लिए। इसके अलावा, पुरानी लेकिन यह भी तीव्र आघात, मधुमेह, संक्रमण और अन्य कारणों से उत्पन्न घावों के प्रबंधन, चुनौती बनी हुई है। इस अध्ययन में हम एक भी रोगी की त्वचा के ऊतक और उनके नैदानिक आवेदन से ऑटोलॉगस सूक्ष्म ग्राफ्ट बनाने के लिए एक नई विधि का वर्णन है। इसके अलावा, इन विट्रो त्वचा, डे-epidermized डर्मिस (डेड) और बहु अंग और / या बहु ऊतक दाताओं के डर्मिस से निकाली गई त्वचीय ऊतक के जैविक लक्षण वर्णन भी किया गया था। सभी ऊतकों इस नए प्रोटोकॉल द्वारा disaggregated रहे थे, हमें व्यवहार्य सूक्ष्म ग्राफ्ट प्राप्त करने के लिए अनुमति देता है। विशेष रूप से, हम रिपोर्ट है कि इस अभिनव प्रोटोकॉल ऑटोलॉगस सूक्ष्म ग्राफ्ट और कोलेजन स्पंज त्वचा के घावों पर लागू किया जा करने के लिए तैयार द्वारा रचित जैव परिसरों बनाने में सक्षम है। Cliniएक पैर पर घाव ऑटोलॉगस जैव परिसरों की कैलोरी आवेदन भी सूचना मिली थी, दोनों फिर से epitalization प्रक्रिया और घाव की कोमलता का सुधार दिखा। इसके अतिरिक्त, हमारे लिए इन विट्रो मॉडल से पता चला है कि इस प्रणाली के साथ यांत्रिक disaggregation के बाद सेल व्यवहार्यता अप करने के लिए सात (7) संस्कृति के दिनों के लिए समय के साथ बनाए रखा है। हम यह भी विश्लेषण प्रवाह cytometry द्वारा मनाया, कि disaggregation से प्राप्त कोशिकाओं के पूल mesenchymal स्टेम सेल सहित कई प्रकार की कोशिकाओं, कि ऊतक उत्थान और मरम्मत की प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण भूमिका डालती है, उनके उच्च पुनर्योजी क्षमता के लिए बना है। अंत में, हम इन विट्रो में प्रदर्शन किया है कि इस प्रक्रिया के सूक्ष्म ग्राफ्ट के बाँझपन जब अग्रवाल बर्तन में सुसंस्कृत बनाए रखता है। सारांश में, हम निष्कर्ष है कि इस नए दृष्टिकोण पुनर्जन्म का एक आशाजनक उपकरण चिकित्सकों के एक कदम है, व्यवहार्य बाँझ और सूक्ष्म ग्राफ्ट कि अकेले या संयोजन में सबसे आम जैविक scaffo के साथ लागू किया जा सकता का उपयोग करने के लिए तैयार में प्राप्त करने के लिए हो सकता हैएलडीएस।
Introduction
पिछले वर्षों में, कई नए तरीकों आदेश तीव्र और जीर्ण त्वचा के घावों के लिए एक कदम उपचार प्रदान करने के लिए सर्जरी के दौरान ऑटोलॉगस सेलुलर निलंबन प्राप्त करने के लिए जैव प्रौद्योगिकी के क्षेत्र में विकसित किया गया है। इसके अलावा, आघात, मधुमेह, संक्रमण, और अन्य कारणों से उत्पन्न तीव्र लेकिन मुख्य रूप से पुराने घावों के प्रबंधन, चुनौती बनी हुई है। बढ़ते सबूत है कि पुराने घावों एक गंभीर वैश्विक स्वास्थ्य के मुद्दे बन गए हैं, हेल्थकेयर सिस्टम दुनिया भर में 1 पर एक भारी वित्तीय बोझ के कारण नहीं है।
त्वचा के घावों के उपचार में सफलता की दर में वृद्धि करने के लिए, (सेलुलर वृद्धि सहित) व्यापक गड़बड़ी की अनुपस्थिति और बाँझ शर्तों के रखरखाव के लिए एक सेलुलर निलंबन की है कि तुरंत क्षतिग्रस्त क्षेत्र पर लागू किया जा सकता बनाने के लिए, आवश्यक हैं रोगियों, जिससे इस तरह के सेल कारखानों के रूप में cleanrooms में एक लंबे समय तक प्रसंस्करण से परहेज। सेंटछोटे त्वचा बायोप्सी, पीस, centrifugation और अन्य जुदाई तरीकों (जैसे, enzymatic या यांत्रिक) से arting, अक्सर एक सेलुलर निलंबन, जो एक मध्यम विकास में संवर्धित किया जा सकता प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं। इन तरीकों के सभी आम तौर पर निष्पादन के एक लंबे समय की आवश्यकता है, सेल संरचनाओं पर जोर दिया, और सेल व्यवहार्यता की कमी करने के लिए अग्रणी। एक अन्य महत्वपूर्ण पहलू एक ऑटोलॉगस सेलुलर निलंबन के लिए तैयार चिकित्सकों द्वारा इस्तेमाल किया जा रहा प्राप्त करने के लिए, उदाहरण के लिए, क्षतिग्रस्त क्षेत्रों की मरम्मत करने के लिए है। इसके अलावा, यह अच्छी तरह से स्थापित है कि ऑटोलॉगस ऊतक ग्राफ्ट हस्तांतरण प्रक्रियाओं जीवित रहने के अंत में प्रेरण और चालन 2, 3 के सिद्धांतों से प्राप्तकर्ता साइट में जीवित रहने के लिए। आदर्श भ्रष्टाचार ऊतक आसानी से उपलब्ध हो सकता है और कम प्रतिजनकता और दाता साइट रुग्णता 4 होनी चाहिए।
इन सबूतों के आधार पर, इस अध्ययन के पहले उद्देश्य के लिए उपयुक्त ऑटोलॉगस जैव परिसरों बना रहा थाऊतकों की मरम्मत में नैदानिक आवेदन। इस प्रयोजन के लिए, हम त्वचीय ऊतकों जो इस प्रोटोकॉल के द्वारा disaggregated रहे थे से शुरू ऑटोलॉगस सूक्ष्म ग्राफ्ट प्राप्त करने के लिए एक नई विधि का वर्णन है। इस मामले में भी प्रस्तुति के साथ साथ ऑटोलॉगस सूक्ष्म ग्राफ्ट कोलेजन स्पंज के साथ संयोजन में इस प्रोटोकॉल के द्वारा प्राप्त की एक नैदानिक आवेदन के रूप में वर्णन किया गया है। यह दृष्टिकोण पहले से ही मानव ऊतकों 5 के यांत्रिक disaggregation में कुशल होने की सूचना दी गई है और यह ग्राफ्ट और चमड़े के ऊतकों के उत्थान के लिए 6.7 के साथ ही मौखिक-मैक्सिलोफेशियल सर्जरी 8-10 में संयोजी ऊतक के पुनर्योजी उपचार के लिए चिकित्सकीय इस्तेमाल किया गया है ।
इसके अलावा, इस अध्ययन के दूसरे उद्देश्य के लिए इस प्रोटोकॉल के द्वारा अपने disaggregation के बाद त्वचीय ऊतकों की जैविक लक्षण वर्णन किया गया था। इस उद्देश्य के लिए, त्वचीय ऊतक के नमूने अलग अलग मुताबिक़ कई अंगों के ट्रंक क्षेत्र से निकाली गईऔर / या बहु ऊतक दाताओं कटाई, प्रसंस्करण पर राष्ट्रीय नियमों का पालन और एमिलिया रोमाग्ना क्षेत्रीय त्वचा बैंक में प्रत्यारोपण के लिए ऊतकों (CNT 2013) वितरण प्रोसेस किया गया।
केस प्रस्तुतिकरण:
एक 35 वर्षीय महिला कार दुर्घटना के कारण एक जटिल आघात दिखा रोगी एंकोना अस्पताल के गहन चिकित्सा कक्ष में भर्ती कराया गया था। मरीज को एक खुला घाव और एक यौगिक फ्रैक्चर बाहरी नियतन के साथ स्थिर होने के कारण पैर पर एक संक्रमण दिखाया। दो कट्टरपंथी क्षतशोधन प्रदर्शन किया गया और जब घाव नकारात्मक दबाव थेरेपी (VAC चिकित्सा) के बाद साफ हो गया और periosteum स्वस्थ दिखाई दिया, हम वसूली से दो महीने के बाद प्रोटोकॉल लागू होता है। इस प्रणाली के साथ disaggregation के बाद, सूक्ष्म ग्राफ्ट प्राप्त एक कोलेजन स्पंज जो बाद में क्रम में प्रत्यारोपित किया गया घाव की मरम्मत पर उनकी प्रभावकारिता की जांच करने के साथ जैव परिसरों को बनाने के लिए इस्तेमाल किया गया।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस प्रारंभिक अध्ययन से पता चला है कि सूक्ष्म ग्राफ्ट इस प्रोटोकॉल के द्वारा प्राप्त की, के रूप में पहले से ही अन्य नैदानिक अनुप्रयोगों में सूचना दी, सूक्ष्म ग्राफ्ट प्रत्यारोपण 9 की प्रभावकार?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों प्रवाह cytometry विश्लेषण प्रदर्शन अध्ययन करने के लिए योगदान के लिए धन्यवाद डॉ Federica Zanzottera करना चाहते हैं।
Materials
| Rigenera Machine | Human Brain Wave | 79210R | |
| Rigeneracons | Human Brain Wave | 79450S | |
| MTT | Roche Diagnostic GmbH | 11465007001 | |
| RPMI medium | PBI International | 733-2292 | |
| DMEM medium | PBI International | F 0415 | |
| Antibiotics | Biological Industries PBI | 03-038-1 | |
| Antibodies for FACS Analysis | eBiosciences | code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349 for CD34-APC | |
| Columbia agar | BioMerieux Company | 43041 | |
| Condress® | Abiogen Pharma | collagen sponge used for bio-complexes | |
| DMSO | Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL | ||
| NaCl solution | Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany | ||
| Xylene | Carlo Erba |
References
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