Weefsel karakterisering na een New Uitsplitsing Methode voor de huid Micro-Enten Generation
Summary
Het protocol beschrijft een nieuwe methode om menselijke weefsels te splitsen en micro-autologe transplantaten die in combinatie met collageen sponzen, tot menselijk biologisch complexen klaar voor gebruik in de behandeling van huidletsels te maken. Verder dit systeem bewaart cellevensvatbaarheid van micro-grafts op verschillende tijdstippen na mechanische disaggregatie.
Abstract
Verschillende nieuwe werkwijzen ontwikkeld op het gebied van biotechnologie autologe cellulaire suspensies tijdens de operatie te verkrijgen, teneinde een stap behandelingen voor acute en chronische huidletsels. Bovendien is de behandeling van chronische maar ook acute wonden gevolg van trauma, diabetes, infecties en andere oorzaken, blijft een uitdaging. In deze studie beschrijven we een nieuwe methode om autologe micro-transplantaten van huidweefsel van een enkele patiënt en hun klinische toepassing. Bovendien werd in vitro biologische karakterisering van cutane weefsel afkomstig van de huid-de epidermized dermis (Ded) en de dermis van meerdere organen en / of multi-weefsel donoren ook uitgevoerd. Alle weefsels werden uitgesplitst naar dit nieuwe protocol, waardoor we levensvatbare micro-implantaten te verkrijgen. In het bijzonder hebben we gemeld dat deze innovatieve protocol kan bio-complexen bestaande uit autologe micro-transplantaten en collageensponzen klaar om te worden aangebracht op de huid laesies. de clinischappelijke toepassing autologe bio-complexen op een been laesie werd gemeld, dat een verbetering van zowel opnieuw epitalization proces en zachtheid van de laesie. Bovendien, onze in vitro model bleek dat de levensvatbaarheid van de cel na mechanische uitsplitsing met dit systeem voor maximaal zeven (7) dagen van de cultuur in stand wordt gehouden in de tijd. We hebben ook opgemerkt door middel van flowcytometrie-analyse, dat de verzameling van cellen verkregen uit uitsplitsing bestaat uit verschillende celtypen, waaronder mesenchymale stamcellen, dat een sleutelrol speelt bij de processen van weefselregeneratie en herstel uitoefenen, voor hun hoge regeneratieve mogelijkheden. Tenslotte hebben we aangetoond dat in vitro procedure handhaaft de steriliteit van micro-implantaten wanneer gekweekt in Agar gerechten. Samengevat concluderen wij dat deze nieuwe regeneratieve benadering veelbelovend hulpmiddel kan zijn voor clinici te verkrijgen in één stap levensvatbare, steriel en klaar voor micro-grafts die alleen of in combinatie kunnen worden toegepast met de meest voorkomende biologische scaffo gebruikenlds.
Introduction
In de afgelopen jaren zijn verscheidene methoden ontwikkeld in de biotechnologie autologe cellulaire suspensies tijdens chirurgie verkrijgen om éénfasige behandelingen voor acute en chronische huidletsels. Bovendien is de behandeling van acute maar vooral chronische wonden gevolg van trauma, diabetes, infecties, en andere oorzaken, blijft een uitdaging. Er is steeds meer bewijs dat chronische wonden een ernstige wereldwijde gezondheidsprobleem geworden, waardoor een enorme financiële last voor de gezondheidszorg systemen wereldwijd 1.
Om de mate van succes bij de behandeling van huidletsels verhogen, gebrek aan uitgebreide manipulatie (inclusief cellulaire versterking) en het handhaven van steriele omstandigheden essentieel, om een celsuspensie die direct kunnen worden aangebracht op het beschadigde gebied van het creëren patiënten, waardoor een langere verwerking in cleanrooms vermijden, zoals Cell Factories. StArting van kleine huidbiopten, slijpen, centrifugeren en andere scheidingsmethoden (bijvoorbeeld enzymatisch of mechanisch), worden vaak gebruikt om een celsuspensie, die kunnen worden gekweekt in een groeimedium verkrijgen. Al deze werkwijzen vereisen in het algemeen een lange tijd van uitvoering, benadrukt de celstructuren, en leidt tot een vermindering van cellevensvatbaarheid. Een ander belangrijk aspect is een autologe cellulaire suspensie gereed voor gebruik door artsen te verkrijgen, bijvoorbeeld om beschadigingen bij. Bovendien is het bekend dat autoloog weefsel enten overleven de procedures overdracht uiteindelijk overleven in de receptorplaats die de beginselen van inductie en geleiding 2, 3. Moet de ideale implantaat weefsel beschikbaar zijn en lage antigeniteit en donorplaats morbiditeit 4.
Op basis van deze bewijzen, was de eerste doelstelling van dit onderzoek om lichaamseigen bio-complexen geschikt voor creërenklinische toepassing in het weefselherstel. Hiervoor beschrijven we een nieuwe werkwijze voor autologe micro-grafts vanaf cutane weefsels die zijn opgesplitst dit protocol verkregen. Een case-presentatie wordt hierin ook beschreven als een klinische toepassing van autologe micro-transplantaten verkregen door dit protocol in combinatie met collageen sponzen. Deze aanpak is reeds gemeld efficiënte mechanische disaggregatie van menselijk weefsel 5 te zijn en het is klinisch gebruikt voor het enten en regeneratie van huidweefsels 6,7 en regeneratieve therapieën bindweefsel in orale kaakchirurgie 8-10 .
Daarnaast is het tweede doel van deze studie was de biologische karakterisering van de cutane weefsels na de opsplitsing van dit protocol. Hiertoe verschillende homologe monsters van huidweefsel afgeleid van de bagageruimte van verschillende meerdere organenen / of multi-weefsel donoren werden verwerkt na de nationale regels inzake de oogst, verwerking en distributie van weefsels voor transplantatie (CNT 2013) in Emilia Romagna Regional Skin Bank.
CASE PRESENTATIE:
Een 35-jarige vrouwelijke patiënt met een complex trauma als gevolg van auto-ongeluk werd toegelaten tot de Intensive Care Unit van Ancona Hospital. De patiënt toonde een besmetting van het been door een open wond en een gecompliceerde breuk gestabiliseerd met externe fixatie. Twee radicale debridement werden uitgevoerd en wanneer de wond werd schoon te maken na de negatieve druk therapie (VAC therapie) en het periost verscheen gezond, we passen het protocol na twee maanden van herstel. Na disaggregatie met dit systeem werden de micro-transplantaten verkregen wordt gebruikt voor bio-complexen met een collageenspons die vervolgens om geïmplanteerd hun doeltreffendheid op de laesie reparatie onderzoeken maken.
Protocol
Representative Results
Discussion
Deze preliminaire studie toonde aan dat micro-transplantaten verkregen door dit protocol kan worden gecombineerd met collageen sponzen, zoals reeds gemeld in andere klinische toepassingen, om de werkzaamheid van micro-grafts implantaten 9, 10 optimaliseren. Vooral dit onderzoek meldde de capaciteit van bio -complexen, gevormd door micro-implantaten en collageensponzen, de wondgenezing van een been letsel adjuvans na 30 dagen klinische toepassing. Verder in vitro resultaten tonen de effectiviteit van …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De auteurs willen bedanken Dr. Federica Zanzottera om bij te dragen aan de studie uitvoeren van flowcytometrie-analyse.
Materials
| Rigenera Machine | Human Brain Wave | 79210R | |
| Rigeneracons | Human Brain Wave | 79450S | |
| MTT | Roche Diagnostic GmbH | 11465007001 | |
| RPMI medium | PBI International | 733-2292 | |
| DMEM medium | PBI International | F 0415 | |
| Antibiotics | Biological Industries PBI | 03-038-1 | |
| Antibodies for FACS Analysis | eBiosciences | code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349 for CD34-APC | |
| Columbia agar | BioMerieux Company | 43041 | |
| Condress® | Abiogen Pharma | collagen sponge used for bio-complexes | |
| DMSO | Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL | ||
| NaCl solution | Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany | ||
| Xylene | Carlo Erba |
References
- Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair Regen. 17, 763-771 (2009).
- Ellis, E., Sinn, D. Use of homologous bone grafts in maxillofacial surgery. J Oral Maxillofac Surg. 51, 1181-1193 (1993).
- Nguyen, A., Pasyk, K. A., Bouvier, T. N., Hassett, C. A., Argenta, L. C. Comparative study of survival of autologous adipose tissue taken and transplanted by different techniques. Plast Reconstr Sur. 85, 378-389 (1990).
- Abuzeni, P. Z., Alexander, R. W. Enhancement of Autologous Fat Transplantation With Platelet Rich Plasma. AJCS. 18 (2), 59-70 (2001).
- Trovato, L., et al. A New Medical Device Rigeneracons Allows to Obtain Viable Micro-Grafts from Mechanical Disaggregation of Human Tissues. J Cell Physiol. , (2015).
- Zanzottera, F., Lavezzari, E., Trovato, L., Icardi, A., Graziano, A. Adipose Derived Stem Cells and Growth Factors Applied on Hair Transplantation Follow-Up of Clinical Outcome. JCDSA. 4 (4), 268-274 (2014).
- Giaccone, M., Brunetti, M., Camandona, M., Trovato, L., Graziano, A. A New Medical Device, Based on Rigenera Protocol in the Management of Complex Wounds. J Stem Cells Res, Rev & Rep. 1 (3), 3 (2014).
- Aimetti, M., Ferrarotti, F., Cricenti, L., Mariani, G. M., Romano, F. Autologous dental pulp stem cells in periodontal regeneration: a case report. Int J Periodontics Restorative Dent. 34 (3), s27-s33 (2014).
- Graziano, A., Carinci, F., Scolaro, S., D’Aquino, R. Periodontal tissue generation using autologous dental ligament micro-grafts: case report with 6 months follow-up. AOMS. 1 (2), 20 (2013).
- Brunelli, G., Motroni, A., Graziano, A., D’Aquino, R., et al. Sinus lift tissue engineering using autologous pulp micro-grafts: A case report of bone density evaluation. J Indian Soc Periodontol. 17 (5), 644-647 (2013).
- Ellner, P. D., Stoessel, C. J., Drakeford, E., Vasi, F. A new culture medium for medical bacteriology. Am J Clin Pathol. 45, 502-504 (1966).
