スキンマイクログラフト世代の新しい脱凝集法後の組織性状
Summary
プロトコルは、ヒト組織を脱凝集し、コラーゲンスポンジと合わせ、自家マイクログラフトを作成するには、皮膚病変の治療に使用する準備ができて、人間の生体複合体を生じさせる新しい方法を説明します。さらに、このシステムは、機械的解離後の異なる時点で、マイクロ移植片の細胞生存率を維持します。
Abstract
いくつかの新しい方法は、急性および慢性の皮膚病変のための1つのステップの処理を提供するために、手術中に自己の細胞懸濁液を得るために、バイオテクノロジーの分野で開発されてきました。また、外傷、糖尿病、感染症や他の原因から生じる慢性だけでなく、急性創傷の管理は、依然として厳しいです。本研究では、単一の患者とその臨床応用の皮膚組織から自家マイクロ移植片を作成するための新しい方法を説明します。また、皮膚、脱epidermized真皮（デッド）および多臓器及び/又は多組織ドナーの真皮に由来する皮膚組織のインビトロでの生物学的特性評価も実施しました。全ての組織は、私たちは実行可能なマイクログラフトを得ることができるように、この新しいプロトコルによって解離させました。特に、我々は、この革新的なプロトコルは、自己ミクロ移植片および皮膚病変に適用する準備ができたコラーゲンスポンジで構成バイオ複合体を作成することができることを報告しました。 clini足の病変に対する自家バイオ複合体のcalの適用はまた、両方の再epitalizationプロセスの改善と病変の柔らかさを示し、報告されました。さらに、我々のインビトロモデルは、このシステムの機械的解離後の細胞生存率は、培養物の最大7日間の時間にわたって維持されることを示しました。我々はまた、解離から得られた細胞のプールが高い再生能のために、組織再生および修復のプロセスにおいて重要な役割を発揮する間葉系幹細胞を含むいくつかの細胞型で構成されていることを、フローサイトメトリー分析によって、観察しました。最後に、我々は寒天皿で培養したときに、この手順は、マイクロ移植片の無菌性を維持することをin vitroで実証されました。要約すると、我々は、臨床医は、実行可能な無菌かつ最も一般的な生物学的scaffoで単独または組み合わせて適用することができるマイクログラフトを使用する準備ができて1ステップで取得するために、この新しい回生アプローチが有望なツールとなり得ると結論しますLDS。
Introduction
近年では、いくつかの新しい方法は、急性および慢性の皮膚病変のための一段階の治療を提供するために、手術中に自家細胞懸濁液を得るために、バイオテクノロジーの分野で開発されてきました。また、外傷、糖尿病、感染症、および他の原因から生じる急性が、主に慢性創傷の管理は、依然として厳しいです。慢性創傷は、世界中の医療システム1に莫大な財政負担を引き起こし、深刻な世界的な健康問題となっていることを証拠があります。
皮膚病変の治療の成功率を高めるために、（セルラ強化を含む）広範囲操作の有無および無菌状態の維持は、直ちにの損傷領域に塗布することができる細胞懸濁液を作成するために、不可欠です患者は、それによって、このようなセルファクトリーとしてクリーンルームでの長い処理を回避することができます。セント小さ な皮膚生検、粉砕、遠心分離および他の分離法（ 例えば、酵素的または機械的な）からarting、しばしば増殖培地で培養することができる細胞懸濁液を得るために使用されます。これらの方法の全ては、一般に、細胞構造を強調し、細胞生存率の低下につながる、実行に長い時間を必要とします。別の重要な態様は、損傷領域を修復するために、例えば、臨床医によって使用される準備ができた自己細胞懸濁液を得ることです。さらに、十分に自家組織移植片は、最終的に誘導および伝導2、3の原則によって、受信者サイトで生き残るために転送手順を生き残ることが確立されています。理想的な移植片組織は、容易に入手でき、低抗原性およびドナー部位の罹患率4を持つ必要があります 。
これらの証拠に基づき、本研究の最初の目的は、適した自家バイオ複合体を作成することでした組織修復における臨床応用。この目的のために、我々はこのプロトコルによって脱凝集された皮膚組織から始まる自家マイクログラフトを得るための新しい方法を説明します。ケースの提示はまた、本明細書中にコラーゲンスポンジと組み合わせて、このプロトコルによって得られた自己ミクロ移植の臨床応用として記載されています。このアプローチは、既にヒト組織5の機械的分解に効率的であることが報告されていて、それが移植片および皮膚組織6,7の再生のためだけでなく、口腔顎顔面外科手術8-10における結合組織の再生治療のために臨床的に使用されています。
また、本研究の第二の目的は、このプロトコルによるそれらの分解後の皮膚組織の生物学的特徴づけました。この目的のために、皮膚組織の異なる相同サンプルは、異なる多臓器の胴体領域に由来しますおよび/またはマルチ組織のドナーは、エミリア・ロマーニャ地方スキンバンクでの移植のための組織（CNT 2013）を収穫、加工に関する国家規則に従い、配布処理しました。
症例提示：
車の事故に起因する複雑な外傷を示す35歳の女性患者は、アンコーナ病院の集中治療室に入院しました。患者は、オープン傷や外部固定で安定化化合物の破壊に起因する脚に感染を示しました。二つのラジカルデブリドマンを行い、傷が負圧治療（VAC療法）の後にクリーンになったと骨膜が健康に見えたとき、我々は回復から2ヶ月後のプロトコルを適用しました。このシステムで分解した後、得られた微小移植片は、その後、病変の修復に対するそれらの効果を調べるために移植されたコラーゲンスポンジを用いてバイオ複合体を作成するために使用されました。
Protocol
Representative Results
Discussion
この予備的研究では、既に他の臨床用途において報告されているように、このプロトコルによって得られる微小移植片は微小移植片インプラント9、10の有効性を最適化するために、コラーゲンスポンジと組み合わせることができることを示した。特に、この研究は、生体の能力を報告し-complexes、臨床応用から30日後の足病変の創傷治癒をアジュバント、微小移植片およびコラーゲン?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、フローサイトメトリー分析を行う研究に貢献するためのおかげで博士フェデリカZanzotteraしたいです。
Materials
| Rigenera Machine | Human Brain Wave | 79210R | |
| Rigeneracons | Human Brain Wave | 79450S | |
| MTT | Roche Diagnostic GmbH | 11465007001 | |
| RPMI medium | PBI International | 733-2292 | |
| DMEM medium | PBI International | F 0415 | |
| Antibiotics | Biological Industries PBI | 03-038-1 | |
| Antibodies for FACS Analysis | eBiosciences | code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349 for CD34-APC | |
| Columbia agar | BioMerieux Company | 43041 | |
| Condress® | Abiogen Pharma | collagen sponge used for bio-complexes | |
| DMSO | Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL | ||
| NaCl solution | Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany | ||
| Xylene | Carlo Erba |
References
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