Tissue Caratterizzazione dopo un metodo nuovo disaggregazione per Skin Micro-innesti Generation
Summary
Il protocollo descrive un nuovo metodo per disaggregare tessuti umani e per creare autologhe micro-innesti che, combinato con spugne di collagene, danno origine a umani bio-complessi pronti all'uso nel trattamento delle lesioni cutanee. Inoltre, questo sistema mantiene la vitalità cellulare di micro-innesti in tempi diversi dopo disgregazione meccanica.
Abstract
Diversi nuovi metodi sono stati sviluppati nel campo della biotecnologia per ottenere sospensioni cellulari autologhi durante l'intervento chirurgico, per fornire uno step trattamenti per le lesioni cutanee acute e croniche. Inoltre, la gestione di ferite acute croniche, ma anche derivanti da traumi, diabete, infezioni ed altre cause, rimane difficile. In questo studio si descrive un nuovo metodo per creare autologhe micro-innesti di tessuto cutaneo di un singolo paziente e la sua applicazione clinica. Inoltre, è stata anche effettuata in vitro caratterizzazione biologica dei tessuti cutanei derivati da pelle, derma de-epidermized (DED) e derma della multi-organo e / o donatori multi-tessuto. Tutti i tessuti sono stati disaggregati per questo nuovo protocollo, che consente di ottenere vitali micro-innesti. In particolare, abbiamo riportato che questo protocollo innovativa è in grado di creare bio-complessi composti da autologhi micro-innesti e spugne di collagene pronto per essere applicato su lesioni cutanee. il Cliniè stato anche riferito applicazione cal di autologhe bio-complessi su una lesione gamba, con un miglioramento di entrambi processo di re-epitalization e la morbidezza della lesione. Inoltre, il nostro modello in vitro hanno mostrato che la vitalità cellulare dopo disgregazione meccanica con questo sistema si mantiene nel tempo fino a sette (7) giorni di coltura. Abbiamo anche osservato, mediante citometria a flusso di analisi, che il pool di cellule ottenute da disaggregazione è composto da diversi tipi di cellule, comprese le cellule staminali mesenchimali, che esercitano un ruolo chiave nei processi di rigenerazione e riparazione dei tessuti, per il loro elevato potenziale rigenerativo. Infine, abbiamo dimostrato in vitro che questa procedura mantiene la sterilità dei micro-innesti quando coltivate in piatti Agar. In sintesi, si può concludere che questo nuovo approccio rigenerativo può essere uno strumento promettente per i medici di ottenere in un unico passaggio praticabile, sterile e pronta all'uso micro-innesti che possono essere applicati solo o in combinazione con più Scaffo biologica comuneLDS.
Introduction
Negli ultimi anni, numerosi nuovi metodi sono stati sviluppati nel campo della biotecnologia per ottenere sospensioni cellulari autologhi durante l'intervento chirurgico per fornire trattamenti di uno stadio per le lesioni cutanee acute e croniche. Inoltre, la gestione di ferite acute, ma soprattutto croniche derivanti da traumi, diabete, infezioni, e altre cause, rimane difficile. Ci sono prove di montaggio che le ferite croniche sono diventate un grave problema di salute globale, causando un onere finanziario enorme sui sistemi sanitari in tutto il mondo 1.
Per aumentare il tasso di successo nel trattamento di lesioni cutanee, l'assenza di una vasta manipolazione (comprese enhancement cellulare) e il mantenimento di condizioni di sterilità sono essenziali, per creare una sospensione cellulare che può essere immediatamente applicato sulla zona danneggiata del pazienti, evitando così un trattamento più lungo in camere bianche, come Cell Factories. StArting da piccole biopsie cutanee, molatura, centrifugazione e altri metodi di separazione (ad esempio, enzimatico o meccanico), sono frequentemente utilizzati per ottenere una sospensione cellulare, che possono essere coltivate in un mezzo di crescita. Tutti questi metodi generalmente richiedono un lungo tempo di esecuzione, sottolineando le strutture cellulari, e portando ad una riduzione della vitalità cellulare. Un altro aspetto significativo è quello di ottenere una sospensione cellulare autologo pronto per essere utilizzato dai clinici, per esempio, per riparare le aree danneggiate. Inoltre, è ben noto che gli innesti di tessuti autologhi sopravvivono le procedure di trasferimento di sopravvivere alla fine nel sito ricevente dai principi di induzione e di conduzione 2, 3. L'innesto di tessuto ideale dovrebbe essere prontamente disponibili e hanno una bassa antigenicità e donatore sito morbidità 4.
Sulla base di queste evidenze, il primo obiettivo di questo studio era quello di creare bio-complessi autologhe adattiapplicazione clinica nella riparazione tissutale. A questo scopo, si descrive un nuovo metodo per ottenere autologhe micro-innesti a partire da tessuti cutanei che sono stati disaggregati per questo protocollo. Una presentazione caso è anche qui descritto come una applicazione clinica di autologhi micro-innesti ottenuti con questo protocollo, in combinazione con le spugne di collagene. Questo approccio è già stato segnalato per essere efficace nella disgregazione meccanica di tessuti umani 5 ed è stato usato in clinica per innesti e rigenerazione dei tessuti dermici 6,7 nonché per terapie rigenerative dei tessuti connettivi in chirurgia orale-maxillofacciale 8-10 .
Inoltre, il secondo obiettivo di questo studio era la caratterizzazione biologica dei tessuti cutanei dopo loro suddivisione per questo protocollo. A questo scopo, diversi campioni omologhi di tessuto cutaneo derivate dalla zona tronco di diversa multiorganoe / o donatori multi-tessuto sono stati elaborati seguendo norme nazionali in materia di raccolta, elaborazione e distribuzione dei tessuti per i trapianti (CNT 2013) in pelle Emilia Romagna Regional Bank.
CASE PRESENTAZIONE:
A 35-year-old paziente che mostra un trauma complesso a causa di incidente stradale è stato ammesso al reparto di terapia intensiva di Ancona Hospital. Il paziente ha mostrato un'infezione sulla gamba a causa di una ferita aperta e una frattura scomposta stabilizzato con fissazione esterna. Due debridement radicale sono state effettuate e quando la ferita è diventato pulito dopo la terapia a pressione negativa (terapia VAC) e il periostio è apparso in buona salute, abbiamo applicato il protocollo dopo due mesi dalla ripresa. Dopo disaggregazione con questo sistema, i micro-innesti ottenuti sono stati usati per creare bio-complessi con una spugna di collagene che sono stati successivamente impiantato per investigare l'efficacia sulla riparazione della lesione.
Protocol
Representative Results
Discussion
Questo studio preliminare ha mostrato che micro-innesti ottenuti con tale protocollo possono essere combinate con le spugne di collagene, come già riportato in altre applicazioni cliniche, per ottimizzare l'efficacia delle protesi micro-innesti 9, 10. In particolare, questo studio ha riportato la capacità di bio -complessi, costituito da micro-innesti e spugne di collagene, per adiuvante la cicatrizzazione della lesione gamba dopo 30 giorni dalla applicazione clinica. Inoltre, i risultati in vitro</…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori desiderano grazie Dr. Federica Zanzottera per contribuire allo studio di eseguire analisi di citometria a flusso.
Materials
| Rigenera Machine | Human Brain Wave | 79210R | |
| Rigeneracons | Human Brain Wave | 79450S | |
| MTT | Roche Diagnostic GmbH | 11465007001 | |
| RPMI medium | PBI International | 733-2292 | |
| DMEM medium | PBI International | F 0415 | |
| Antibiotics | Biological Industries PBI | 03-038-1 | |
| Antibodies for FACS Analysis | eBiosciences | code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349 for CD34-APC | |
| Columbia agar | BioMerieux Company | 43041 | |
| Condress® | Abiogen Pharma | collagen sponge used for bio-complexes | |
| DMSO | Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL | ||
| NaCl solution | Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany | ||
| Xylene | Carlo Erba |
References
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