Tissue Karakterisering etter en ny Disaggregering metode for Skin Micro-Grafts Generation
Summary
Den protokollen beskriver en ny metode for å disaggregert menneskelig vev, og for å skape autologe mikro-grafts som i kombinasjon med kollagen svamper, gir opphav til humane bio-komplekser er klare for bruk i behandling av hudlesjoner. Videre bevarer dette system cellenes levedyktighet av mikro grafts på forskjellige tidspunkter etter mekanisk dekomponering.
Abstract
Flere nye fremgangsmåter er blitt utviklet innen feltet bioteknologi for å oppnå autologe cellesuspensjoner under operasjonen, for å tilveiebringe en trinn behandlinger for akutte og kroniske hudlesjoner. Videre behandling av kronisk, men også akutte sår som følge av traumer, diabetes, infeksjoner og andre årsaker, er fortsatt utfordrende. I denne studien beskriver vi en ny metode for å lage autologe mikro grafts fra kutan vev av en enkelt pasient og deres klinisk anvendelse. Videre in vitro biologisk karakterisering av hud vev avledet fra hud, de-epidermized dermis (DED) og dermis av multi-organ og / eller multi-vev givere ble også utført. Alle vev ble inndelt etter denne nye protokollen, som tillater oss å få levedyktige mikro grafts. Spesielt rapporterte vi at dette innovative protokollen er i stand til å lage bio-komplekser komponert av autologe mikro grafts og kollagen svamper klar til å bli brukt på hudlesjoner. den klinical anvendelse av autologe bio-komplekser på et ben lesjon ble også rapportert, og viser en forbedring av både re-epitalization prosess og mykhet av lesjonen. I tillegg vår in vitro modell viste at celleviabilitet etter mekanisk disaggregation med dette systemet opprettholdes over tid for opptil syv (7) dager kultur. Vi har også observert, ved strømningscytometri-analyse, at utvalget av celler oppnådd fra dekomponering er sammensatt av flere celletyper, inkludert stamceller, som utøver en nøkkelrolle i prosesser av vev regenerering og reparasjon, for sin høye regenerative potensial. Til slutt har vi vist in vitro at denne fremgangsmåten opprettholder steriliteten av mikro grafts når dyrket på agarskåler. I sammendrag, konkluderer vi med at denne nye regenerativ fremgangsmåten kan være et lovende verktøy for klinikere å oppnå i ett trinn levedyktig, sterilt og klart til bruk mikro-grafts som kan anvendes alene eller i kombinasjon med de vanligste biologisk scaffoLDS.
Introduction
I de siste årene har flere nye metoder blitt utviklet innen bioteknologi for å oppnå autologe cellesuspensjoner under operasjonen for å gi ett-trinns behandling for akutte og kroniske hudskader. Videre behandling av akutte men hovedsakelig kroniske sår som følge av traumer, diabetes, infeksjoner, og andre årsaker, er fortsatt utfordrende. Det er montering bevis for at kroniske sår har blitt et alvorlig globalt helseproblem, forårsaker en enorm økonomisk byrde på helsesystemer verden over ett.
For å øke graden av suksess i behandling av hudlesjoner, fravær av utstrakt manipulering (inkludert cellulært forbedring) og opprettholdelse av sterile betingelser er viktig, for å skape en cellulær suspensjon som umiddelbart kan anvendes på den skadede delen av pasienter, og dermed unngå en lengre behandling i renrom slik som cellefabrikker. Starting fra små huden biopsier, sliping, sentrifugering og andre separasjonsmetoder (for eksempel enzymatisk eller mekanisk), blir ofte benyttet for å oppnå en cellesuspensjon, som kan dyrkes i et vekstmedium. Alle disse metodene generelt krever en lang tid for utførelse, understreker cellestrukturer, og som fører til en reduksjon av cellelevedyktighet. Et annet vesentlig aspekt er å oppnå en autolog cellulær suspensjon klar til å bli brukt av klinikere, for eksempel for å reparere skadede områder. Videre er det vel etablert at autologe vev grafts overleve overføringsfremgangsmåter for til slutt å overleve i mottaker området av prinsippene for induksjon og ledning 2, 3. Den ideelle pode vevet bør være lett tilgjengelig og har lav antigenisitet og donorsete sykelighet 4.
På grunnlag av disse bevisene, den første Hensikten med denne studien var å skape autologe bio-komplekser egnet forklinisk anvendelse i vevsreparasjon. For dette formål beskriver vi en ny metode for å oppnå autologe mikro grafts fra og kutane vev som ble inndelt ved denne protokollen. En sak presentasjon er også her beskrevet som et klinisk anvendelse av autologe mikro grafts oppnådd med denne protokollen i kombinasjon med kollagen svamper. Denne tilnærmingen har allerede blitt rapportert å være effektive i den mekaniske disaggregation av menneskelig vev 5 og det har vært brukt klinisk for grafts og regenerering av dermal vev 6,7 samt for regenerativ behandling av bindevev i oral-maxillofacial kirurgi 8-10 .
I tillegg er den andre Hensikten med denne studien var den biologiske karakterisering av de kutane vev etter deres dekomponering av denne protokollen. For dette formål, forskjellige homologe prøver av kutane vev avledet fra stammen området av forskjellig multi-organog / eller multi-vev givere ble behandlet etter nasjonale regler for fangst, foredling og distribusjon av vev for transplantasjon (CNT 2013) på Emilia Romagna Regional Skin Bank.
CASE PRESENTASJON:
En 35 år gammel kvinnelig pasient som viser en komplekse traumer på grunn av bilulykke ble innlagt på intensivavdelingen på Ancona Hospital. Pasienten viste en infeksjon på benet på grunn av et åpent sår og en forbindelse brudd stabilisert med ekstern fiksering. To radikale debridement ble utført, og når såret ble rent etter undertrykksbehandling (VAC terapi) og periosteum dukket sunt, vi påføres protokollen etter to måneder fra utvinning. Etter dekomponering med dette systemet, ble mikro grafts erholdt som brukes til å lage bio-komplekser med en kollagen svamp som deretter ble implantert for å undersøke deres effekt på lesjonen reparasjon.
Protocol
Representative Results
Discussion
Denne innledende undersøkelsen viste at mikro grafts som oppnås ved denne protokollen kan kombineres med kollagen svamper, som allerede er rapportert i andre kliniske anvendelser, for å optimalisere effekten av mikro-grafts implantater 9, 10. Spesielt denne studien rapportert kapasiteten av bio -complexes, bestående av mikro-grafts og kollagen svamper på adjuvant såret helbredelse av en etappe lesjon etter 30 dager fra klinisk anvendelse. Videre in vitro resultatene gir bevis om effektiviteten …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forfatterne ønsker å Takk Dr. Federica Zanzottera for å bidra til studiet utfører flowcytometri analyse.
Materials
| Rigenera Machine | Human Brain Wave | 79210R | |
| Rigeneracons | Human Brain Wave | 79450S | |
| MTT | Roche Diagnostic GmbH | 11465007001 | |
| RPMI medium | PBI International | 733-2292 | |
| DMEM medium | PBI International | F 0415 | |
| Antibiotics | Biological Industries PBI | 03-038-1 | |
| Antibodies for FACS Analysis | eBiosciences | code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349 for CD34-APC | |
| Columbia agar | BioMerieux Company | 43041 | |
| Condress® | Abiogen Pharma | collagen sponge used for bio-complexes | |
| DMSO | Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL | ||
| NaCl solution | Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany | ||
| Xylene | Carlo Erba |
References
- Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair Regen. 17, 763-771 (2009).
- Ellis, E., Sinn, D. Use of homologous bone grafts in maxillofacial surgery. J Oral Maxillofac Surg. 51, 1181-1193 (1993).
- Nguyen, A., Pasyk, K. A., Bouvier, T. N., Hassett, C. A., Argenta, L. C. Comparative study of survival of autologous adipose tissue taken and transplanted by different techniques. Plast Reconstr Sur. 85, 378-389 (1990).
- Abuzeni, P. Z., Alexander, R. W. Enhancement of Autologous Fat Transplantation With Platelet Rich Plasma. AJCS. 18 (2), 59-70 (2001).
- Trovato, L., et al. A New Medical Device Rigeneracons Allows to Obtain Viable Micro-Grafts from Mechanical Disaggregation of Human Tissues. J Cell Physiol. , (2015).
- Zanzottera, F., Lavezzari, E., Trovato, L., Icardi, A., Graziano, A. Adipose Derived Stem Cells and Growth Factors Applied on Hair Transplantation Follow-Up of Clinical Outcome. JCDSA. 4 (4), 268-274 (2014).
- Giaccone, M., Brunetti, M., Camandona, M., Trovato, L., Graziano, A. A New Medical Device, Based on Rigenera Protocol in the Management of Complex Wounds. J Stem Cells Res, Rev & Rep. 1 (3), 3 (2014).
- Aimetti, M., Ferrarotti, F., Cricenti, L., Mariani, G. M., Romano, F. Autologous dental pulp stem cells in periodontal regeneration: a case report. Int J Periodontics Restorative Dent. 34 (3), s27-s33 (2014).
- Graziano, A., Carinci, F., Scolaro, S., D’Aquino, R. Periodontal tissue generation using autologous dental ligament micro-grafts: case report with 6 months follow-up. AOMS. 1 (2), 20 (2013).
- Brunelli, G., Motroni, A., Graziano, A., D’Aquino, R., et al. Sinus lift tissue engineering using autologous pulp micro-grafts: A case report of bone density evaluation. J Indian Soc Periodontol. 17 (5), 644-647 (2013).
- Ellner, P. D., Stoessel, C. J., Drakeford, E., Vasi, F. A new culture medium for medical bacteriology. Am J Clin Pathol. 45, 502-504 (1966).
