Section des pansements mammaires complets pour l'identification des lésions
Summary
Nous avons développé une méthode pour éliminer, traiter, sectionner et tacher avec succès, pour l'évaluation histopathologique, des tissus mammaires qui avaient initialement été fixés sur des diapositives en tant que supports complets. Cette méthode peut favoriser la collecte et l'évaluation des montants entiers de la glande mammaire dans les études de référence sur les tests reproductifs et de développement.
Abstract
Le développement normal de la glande mammaire peut être modifié par l'exposition à des substances toxiques pour l'environnement et à des produits pharmaceutiques, une exposition excessive aux hormones et des modifications génétiques. Les supports complets de la glande mammaire sont une méthode peu coûteuse pour capturer la progression des changements morphologiques qui peuvent survenir après l'exposition. Cependant, dans la vie plus tard, lorsque les anomalies sont plus enclines à se développer, la seule dépendance à cette méthode peut ne pas toujours fournir suffisamment d'informations pour faire un diagnostic approprié de l'anomalie. Historiquement, dans les études de référence sur les tests chimiques, une seule glande mammaire est enlevée à la nécropsie et préparée comme une section conservée à l'hématoxyline et à l'éosine (H & E). L'incorporation de la collecte et de l'analyse de la totalité de la mammographie contralatérale diminue la probabilité d'une évaluation faussement négative. L'évaluation de l'ensemble de la monture est limitée par la présence d'une ou deux glandes mammaires entières sur une glissière et, dans certains cas, les anomalies observées dans l'ensemble de la monture ne sont pasT uniformément représenté dans la section H & E. L'objectif de cette étude était d'élaborer un protocole pour convertir des supports complets mammaires coulés en sections teintées H & E afin que les lésions qui auraient autrement été manquées ou difficiles à diagnostiquer puissent être identifiées. Ici, nous détaillons une méthode pour produire une section H & E intégrée à la paraffine de haute qualité à partir d'une glande mammaire initialement préparée en tant que monture complète. Par rapport à un tissu qui a été préparé intentionnellement pour la sectionnement H & E, toute la monture nécessite une préparation supplémentaire pour l'élimination et le traitement des tissus. Cependant, cette méthode est considérée comme peu coûteuse, car elle nécessite des réactifs de laboratoire communs et peu de temps supplémentaire. En conséquence, cette méthode peut fournir des informations précieuses sur la façon dont les expositions chimiques et environnementales altèrent le développement mammaire normal, ainsi que les changements d'affichage qui se produisent à cause des modifications génétiques.
Introduction
L'ensemble complet mammaire est une méthode utile et peu coûteuse mise en œuvre dans de nombreuses études de rat et de souris pour comprendre à la fois un développement anormal normal et chimiquement induit et anormal. En général, une glande mammaire recueillie à différents stades pendant le développement des rongeurs ( c'est-à-dire l' adolescence, la puberté, la gestation moyenne et tardive et la phase d'involution) montrera des changements morphologiques dans l'architecture tissulaire et cellulaire influencée par les facteurs paracrins, endocriniens et autocrins 1 . Dans le rat vieillissant, les portions épithéliales et stromales de la glande deviennent de plus en plus denses, ce qui rend difficile la mesure des paramètres morphologiques dans une monture complète. Ainsi, il est courant de collecter une glande pour une évaluation histologique afin d'identifier les changements au niveau microscopique. Les deux processus sont particulièrement utiles dans les études portant sur l' exposition chimique (c. -à- environnement ou pharmaceutique) ou d'examiner les changements morphologiques accompagnée de génétique alterTions.
Les techniques et les capacités d'utilisation de la glande mammaire dans l'évaluation des risques continuent d'évoluer. Bien que la préparation complète soit routinière et standardisée, les modifications apportées à la section continuent 2 , 3 . Beaucoup de groupes de recherche issus de divers horizons ( c.-à-d. Le milieu universitaire, le gouvernement et l'industrie) ont adapté les sections coronales / longitudinales du tissu mammaire comme méthode préférée, alors que certains laboratoires utilisent encore des coupes transversales à travers la peau 4 . Cette dernière méthode entraîne une représentation excessive de l'épiderme (peau), plutôt que le tissu d'intérêt: l'épithélium 2 de la glande mammaire. Les sections coronales ou longitudinales sont plus utiles pour caractériser le tissu normal 5 et améliorent considérablement la détection d'anomalies et de lésions en raison de la surface accrue et du nombre de structures présentes. Dans l'ensemble, cela rend tout le mondeUne méthode appropriée pour l'évaluation histopathologique comparative de la glande mammaire 1 , 2 . Que ce soit à l' aide d' une souris ou un rat, la récupération et la conservation de la 4 e et 5 e ganglions inguinaux est fortement recommandé pour la comparaison de l'ensemble de montage à une section controlatéral H & E.
Lorsqu'ils sont utilisés en combinaison, la section H & E et le support complet fournissent un compte rendu précis des changements cellulaires et morphologiques induits par l'exposition environnementale. Ceci est particulièrement vrai dans certaines souches de rongeurs dans lesquelles le modèle possède une faible susceptibilité à la formation de la tumeur ou une tumeur n'est pas très visible. Dans certaines circonstances, l'obtention du tissu requis peut ne pas toujours être possible en utilisant les deux techniques ( c.-à-d . Une quantité suffisante de tissus, des ressources ou des résultats expérimentaux inattendus). Dans notre cas, des anomalies ont été observées dans la monture totale mammaire, alors que l'histopathoLes découvertes logiques dans la glande de H & E contralatérale étaient généralement normales. L'écart écrasant entre les glandes contralatérales nous a amené à développer une procédure économique et efficace pour identifier les anomalies dans l'ensemble des montures. À l'aide d'une procédure de traitement et d'encastrement modifiée, des sections colorées H & E de haute qualité ont été préparées à partir de supports entiers intégrés à la paraffine. Nous envisageons que ce protocole devient un puissant outil de détection pour les effets d'exposition chimique, améliorant les comparaisons entre laboratoires.
Protocol
Representative Results
Discussion
L'ensemble complet de la glande mammaire est un outil puissant qui peut être utilisé pour illustrer le développement mammaire normal et les altérations morphologiques qui peuvent survenir et persister après l'exposition aux produits chimiques, y compris les perturbateurs endocriniens. Lorsqu'une partie intégrale et la section H & E du même animal sont évaluées ensemble, elles peuvent fournir un aperçu visuel précis des altérations précoces, qui peuvent progresser dans un état plus malade. <…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs souhaitent remercier Pam Ovwigho, Tenette Jones et Natasha Clayton, NIEHS, pour leur expertise technique et leur soutien avec ce projet.
Materials
| Xylene | Sigma-Aldrich | 214736 | |
| Permount | Thermo Fisher Scientific | SP15-100 | mounting media for coverslipping whole mounts and H&E sections |
| Leica automated processor | Leica Biosystems | Model # ST5020 | |
| HM 355S Automatic Microtome | Thermo Fisher Scientific | 905200 | |
| Paraffin | Leica Biosystems | EM-400 | |
| Superfrost plus microscope slides | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS-001 | electrostatically charged |
| Fisher Finest 24x60x1 | Thermo Fisher Scientific | 12-548-5P | coverslips |
| Varistain Gemini ES Automatic slide stainer | Thermo Fisher Scientific | A78000014 | |
| Sta-On | Leica Biosystems | 3803107 | liquid adhesive; used in water bath at sectioning |
| Modified Harris Hematoxylin 72711 | Richard-Allan Scientific (Part of Thermo Scientific) | 72711 | |
| Eosin | Leica Biosystems | 3801600 | |
| Lithium Carbonate | SkyTech Laboratories | LCQ500 | |
| Glacial Acetic Acid | Thermo Fisher Scientific | A38-500 | needed in Carnoy's fixative |
| Chloroform | Macron Fine Chemicals | 4440-04 | needed in Carnoy's fixative |
| 100% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505001050000 | needed in Carnoy's fixative and washing slides |
| 95% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505011137320190 | |
| Carmine Alum | Sigma-Aldrich | C1022-25G | |
| Aluminum potassium sulfate dodecahydrate, Sigma Ultra | Sigma-Aldrich | A7210-500G | |
| Automation wash buffer, 20X | Biocare Medical | TWB945 |
References
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