病変同定のための乳腺全体マウントの分割
Summary
当初、スライド上に固定されていた乳腺組織を、全体のマウントとして、組織病理学的評価のために首尾よく除去、加工、切片化および染色する方法を開発した。この方法は、生殖および発育試験ガイドライン研究における乳腺全体マウントの採取および評価を促進し得る。
Abstract
正常な乳腺発達は、環境毒素および医薬品への暴露、ホルモンへの過剰な暴露、および遺伝子改変によって変更される可能性がある。乳腺マウント全体は、暴露後に起こる形態変化の進行を捕捉するための安価な方法である。しかし、後の人生では、異常がより発生しやすい場合、この1つの方法に依存するだけでは、異常の適切な診断を行うのに十分な情報を提供できない場合があります。歴史的に、化学的試験ガイドライン研究では、単一の乳腺が剖検時に除去され、ヘマトキシリンおよびエオシン（H＆E）染色セクションとして調製される。反対側の乳房全身収集および分析の導入は、偽陰性評価の可能性を減少させる。マウント全体の評価は、スライド上の1つまたは2つの乳腺全体の存在によって制限され、ある場合には、マウント全体で観察される異常は、H＆Eセクションで一様に表現されています。この研究の目的は、カバーされていない乳腺全体マウントをH＆E染色された切片に変換するためのプロトコールを開発し、そうしなければ欠落していたかまたは診断困難な病変を同定できるようにすることであった。ここでは、最初に全体のマウントとして準備された乳腺から、高品質でパラフィン包埋されたH＆Eセクションを生成する方法を詳述します。 H＆E切片化のために意図的に調製された組織と比較して、全体のマウントは、組織の除去および処理のためのさらなる準備を必要とする。しかしながら、この方法は、一般的なラボ試薬および追加の時間をほとんど必要としないので、安価であると考えられている。結果として、この方法は、化学的および環境的曝露がどのようにして正常な哺乳類の発達を変化させるか、ならびに遺伝子改変のために生じる変化の表示に関する貴重な情報を提供することができる。
Introduction
乳房全体のマウントは、正常および化学的に誘発された異常な発達の両方を理解するために、多くのラットおよびマウスの研究で実施される有用で安価な方法である。一般に、げっ歯類発達中の様々な段階（ すなわち、青年期、思春期、中期〜後期妊娠期、および退縮段階）で収集された乳腺は、パラクリン、内分泌およびオートクリン因子によって影響される組織および細胞構造の形態変化を示す1 。老化ラットでは、腺の上皮および間質部分がますます稠密になり、全体的に形態学的パラメーターを測定することが困難になる。したがって、顕微鏡レベルでの変化を同定するために組織学的評価のために腺を採取することが一般的なプラクティスである。両方のプロセスは、化学暴露（ すなわち、環境または薬学的）を伴う研究、または遺伝子改変を伴う形態学的変化を調べる研究において特に有用であるations。
リスク評価において乳腺を使用するための技術および能力は進化し続けている。全マウント準備ルーチンと標準化されながら、切片の変更は2、3を続けます。いくつかの研究室が依然として皮膚4を介してクロスカット部を使用しながら、様々なバックグラウンド（ すなわち、学界、政府、産業界）から多くの研究グループが、好ましい方法として、乳房組織の縦/冠状切片を適応しています。後者の方法は、興味のある組織ではなく、表皮（皮膚）の過度の表現をもたらす：乳腺上皮2 。冠状部または縦断面は、正常組織5の特徴付けに有用であり、存在する表面積および構造の数の増加による異常および病変の検出を大幅に改善する。全体的にみると、乳腺1,2の比較組織病理学的評価のためUNT適した方法。マウスまたはラットを使用するかどうかにかかわらず、 第 4および第 5鼠径部の腺の回収および保存は、対側H＆Eセクション全体との比較に強く推奨されます。
H＆Eセクションとマウント全体を組み合わせて使用すると、環境暴露によって引き起こされる細胞と形態変化を正確に説明することができます。これは、モデルが腫瘍形成に対する低い感受性を有するか、または腫瘍が肉眼で見えない特定のげっ歯類株において特に当てはまる。状況によっては、両方の技術（ すなわち、不十分な組織量、リソース、または予期しない実験結果）を使用して、必要な組織を得ることが常に可能であるとは限らない場合もある。本発明者らの場合、乳房全体の異常が観察されたが、組織病反対側のH＆E腺における論理的所見はほとんど正常であった。反対側の腺間の圧倒的な不一致は、我々がマウント全体の異常を特定するための経済的で効率的な手順を開発するように導いた。改良された処理および包埋手順を用いて、パラフィン包埋された全マウントから高品質のH＆E染色切片を調製した。我々は、このプロトコルが化学物質曝露効果の強力な検出ツールとなり、実験室間比較を強化することを想像している。
Protocol
Representative Results
Discussion
乳腺全体マウントは、内分泌かく乱物質を含む化学物質への暴露後に生じる可能性のある正常な乳腺発達および形態変化を説明するのに使用できる強力なツールである。同じ動物の全体のマウントとH＆Eセクションが一緒に評価されると、早期の変化の正確な視覚的スナップショットを提供することができ、より病的な状態に進化することができる。
この有用な情報を得…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は、このプロジェクトの技術的な専門知識とサポートのために、Pam Ovwigho、Tenette Jones、NIEHSのNatasha Claytonに感謝します。
Materials
| Xylene | Sigma-Aldrich | 214736 | |
| Permount | Thermo Fisher Scientific | SP15-100 | mounting media for coverslipping whole mounts and H&E sections |
| Leica automated processor | Leica Biosystems | Model # ST5020 | |
| HM 355S Automatic Microtome | Thermo Fisher Scientific | 905200 | |
| Paraffin | Leica Biosystems | EM-400 | |
| Superfrost plus microscope slides | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS-001 | electrostatically charged |
| Fisher Finest 24x60x1 | Thermo Fisher Scientific | 12-548-5P | coverslips |
| Varistain Gemini ES Automatic slide stainer | Thermo Fisher Scientific | A78000014 | |
| Sta-On | Leica Biosystems | 3803107 | liquid adhesive; used in water bath at sectioning |
| Modified Harris Hematoxylin 72711 | Richard-Allan Scientific (Part of Thermo Scientific) | 72711 | |
| Eosin | Leica Biosystems | 3801600 | |
| Lithium Carbonate | SkyTech Laboratories | LCQ500 | |
| Glacial Acetic Acid | Thermo Fisher Scientific | A38-500 | needed in Carnoy's fixative |
| Chloroform | Macron Fine Chemicals | 4440-04 | needed in Carnoy's fixative |
| 100% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505001050000 | needed in Carnoy's fixative and washing slides |
| 95% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505011137320190 | |
| Carmine Alum | Sigma-Aldrich | C1022-25G | |
| Aluminum potassium sulfate dodecahydrate, Sigma Ultra | Sigma-Aldrich | A7210-500G | |
| Automation wash buffer, 20X | Biocare Medical | TWB945 |
References
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