Summary

الخلية الحرة البيوكيميائية المقايسة الانزيمية فلوروميتريك لقياس الفائق وبيروكسيد في البروتين الدهني العالي الكثافة

Published: October 12, 2017
doi:

Summary

يصف لنا هنا مقايسة الخلية الحرة بيوكيميائية فلوروميتريك للبت في هدل-وبيروكسيد. هذا الفحص السريع واستنساخه يمكن استخدامها لتحديد دالة الحميد في دراسات واسعة النطاق، ويمكن أن تسهم في فهمنا للدالة الكوليسترول الجيد في الأمراض التي تصيب البشر.

Abstract

مستويات الكوليسترول في الدم (HDL-C) منخفض الكثافة lipoprotein واحدة من تنبؤ السلبية مستقلة أقوى من أمراض القلب والأوعية الدموية تصلب الشرايين (الرسوم التعويضية). هيكل ووظيفة الحميد بدلاً من HDL-C يمكن التنبؤ بدقة أكثر تصلب الشرايين. تحدث عدة الحميد البروتين والدهن التغييرات التركيبية التي تنال من الدالة الحميد في الولايات الملتهبة مثل تصلب الشرايين. الدالة الحميد يتحدد عادة بالخلية على أساس فحوصات مثل الإنزيم افلوكس نسبة الكولسترول في الدم ولكن هذه الاختبارات لها عدة عيوب عدم توحيد. فحوصات مجانية من الخلية قد تعطي تدابير أقوى الحميد وظيفة مقارنة بفحوصات يستند إلى الخلية. ويضعف أكسدة الحميد الحميد الدالة. الحميد دوراً رئيسيا في النقل بيروكسايد المادة الدهنية وهي المتعلقة بكمية عالية من الدهون الأكاسيد الفوقية الشاذ الحميد الدالة. ينبغي النظر في التفاعلات الدهن-التحقيق عند تفسير نتائج الأسفار غير الانزيمية فحوصات لقياس حالة الأكسدة الدهنية. وهذا دافع لنا لتطوير أسلوب الانزيمية الخلية الحرة بيوكيميائية لتقييم الحميد بيروكسايد محتوى الدهون (هدلوكس) أن يسهم في الخلل الوظيفي الحميد. يستند هذا الأسلوب على البيروكسيديز الفجل إنزيم (HRP) و fluorochrome Amplex الأحمر التي يمكن تحديدها كمياً (بدون الكوليسترول أوكسيديز) محتوى الدهن بيروكسايد كل مغ من HDL-C. هنا بروتوكول تحديد ديسكريبيدفور HDL-وبيروكسيد استخدام الكاشف فلوروتشرومي. يمكن الحد من تقلب المقايسة بالتوحيد الصارم للظروف التجريبية. أعلى هدلوكس القيم المرتبطة بانخفاض وظيفة المضادة للأكسدة الكوليسترول الجيد. قراءات من هذا التحليل المقترنة مع قراءات لفحوصات المستندة إلى خلية تم التحقق من صحتها، تدابير بديلة لأمراض القلب والأوعية الدموية والتهاب النظامية والخلل المناعي وتعمل يرتبط بها من مخاطر القلب والأوعية الدموية والايض. وهذا النهج التقني هو وسيلة قوية لتقييم دالة الكوليسترول الجيد في الأمراض البشرية فيها التهاب النظامية والأكسدة والدهون المؤكسدة لها دور رئيسي (مثل تصلب الشرايين).

Introduction

أمراض القلب والأوعية الدموية تصلب الشرايين (الرسوم التعويضية) هو السبب الرئيسي للوفاة في جميع أنحاء العالم1،2. وقد أظهرت الدراسات الوبائية أن انخفاض مستويات البروتين الدهني الكثافة (HDL) الكوليسترول عموما ترتبط عكسيا مع المخاطر لتطوير تصلب الشرايين1،2. على الرغم من اعتماد العديد من الدراسات بدور أثيروبروتيكتيفي الحميد1،2، هو الآلية التي يخفف الحميد بدء وتطور تصلب الشرايين معقدة 3،4. ومن ثم، اقترح أن هيكل معقد ووظيفة الحميد بدلاً من المستوى المطلق قد التنبؤ أكثر دقة بتصلب الشرايين 5،6،،من78. تحدث عدة الحميد البروتين والدهن التغييرات التركيبية التي تنال من الدالة الحميد في الولايات الملتهبة مثل تصلب الشرايين. هذه ط) خفض بنسبة الكولسترول في الدم افلوكس المحتملة 9، ثانيا) إنقاص للالتهابات وزيادة البروتينات برو-الالتهابات المرتبطة بالحميد 6،7، ثالثا) انخفاض مستويات مضادات الأكسدة عامل والنشاط و HDLs القدرة تمنع أكسدة “البروتين الدهني منخفض الكثافة” (لدلوكس)10 والرابع) زيادة الدهن هيدرو فوق أكسيد تركيز المحتوى والأكسدة النشاط (هدلوكس)9،11. فحوصات قوية أن تقييم وظائف بليوتروبيك الحميد (مثل efflux الكولسترول، الدالة المضادة للأكسدة) قد تكمل تصميم الحميد-HDL-C في العيادة.

هو عادة بالأساليب المستندة إلى الخلية مثل الكوليسترول efflux المقايسة8،12،،من1314تقييم الدالة الحميد. هذه الأساليب والقيود الرئيسية بما في ذلك تغايرية مهمة فيما يتعلق بأنواع الخلايا المستخدمة ونوع قراءات أفادت، والافتقار إلى التوحيد وآثار الخلط الثلاثية 7،15. هذه العيوب تثير صعوبات لدراسات سريرية كبيرة16. فحوصات مجانية من الخلية قد تعطي تدابير أقوى الحميد وظيفة مقارنة بفحوصات يستند إلى الخلية. افلوكس نسبة الكولسترول في الدم واحدة من أهم وظائف الحميد ولكن فإنه لا يمكن تحديده إلا بفحوصات يستند إلى الخلية. نهج أخرى لتحديد دالة الحميد مثل البروتيوميات17،،من1819،20،21،،من2223، 24 وفحوصات إنزيمية الوحيدات يستند إلى الخلية الحميد الدالة 17،،من2225 لا تم توحيد ولا يمكن استخدامها في الدراسات الإنسانية الواسعة النطاق.

وقد هدل الهامة المضادة للأكسدة أثيروبروتيكتيفي تأثير5،6،،من78. وقد تحدد وظيفة المضادة للأكسدة الكوليسترول الجيد حضور LDL في السابق الخلية الحرة فحوصات فلوروميتريك 26. هذه الأساليب فلوروميتريك البيوكيميائية الحميد مضادات الأكسدة مهمة وضعت أصلاً نافاب محمد والن فوغلمان و الزملاء على26. على الرغم من أن العديد من الدراسات البشرية قد استخدمت هذه الأساليب لتحديد الحميد الدالة 17،،من1819،،من2021،22،23 ،24، الدهون (الكوليسترول الجيد)-المادة الدهنية (LDL) والتفاعلات fluorochrome الدهن قد تحد من إمكانية تكرار نتائج لهذه الخلية الحرة غير الانزيمية البيوكيميائية فحوصات الحميد الدالة27،28.

الفائدة الأخيرة ركزت على العواقب الوظيفية لأكسدة الكوليسترول الجيد هو نتيجة لأكسدة كل من الدهون والبروتينات داخل الحميد 27،،من2930. وقد أظهرت الدراسات السابقة أن أكسدة الكوليسترول الجيد يضعف الحميد الدالة 27،،من2930. الحميد دوراً رئيسيا في النقل بيروكسايد المادة الدهنية وهي المتعلقة بكمية عالية من الدهون الأكاسيد الفوقية الشاذ الحميد الدالة. وبالتالي يمكن استخدامها لتحديد الحميد الدالة 9،17،،من2031 الحميد محتوى الدهون بيروكسايد ونظرا لمحدودية المعروفة لفحوصات مسبقة الحميد الدالة7، 15،،من2732، قمنا بتطوير أسلوب بديل فلوروميتريك التي يوضحها الحميد دهن محتوى بيروكسايد (هدلوكس) 32. يستند هذا الأسلوب الإنزيم الفجل البيروكسيديز (HRP) و fluorochrome Amplex الأحمر التي يمكن تحديدها كمياً (بدون الكوليسترول أوكسيديز) محتوى الدهن بيروكسايد كل ملغ من الكوليسترول الجيد-ج 32. البيوكيميائية مبدأ المقايسة يرد في الشكل 1. وقد أظهرنا أن هذا النهج القائم على الأسفار ليس لديه قيود مسبقة الحميد الدالة فحوصات27،28. تم زيادة صقل هذا التحليل وموحدة في المختبر حيث أنه يمكن استخدامه موثوق في الدراسات الإنسانية واسعة النطاق حتى مع البلازما cryopreserved 32،،من3334، 35 , 36 , 37 , 38 , 39 , 40 , 41 , 42-قراءات من هذا الإنزيم يرتبط مع قراءات لفحوصات المستندة إلى خلية تم التحقق من صحتها، تدابير بديلة لأمراض القلب والأوعية الدموية والتهاب النظامية والخلل المناعي وتعمل يرتبط بها من مخاطر القلب والأوعية الدموية والايض 32 , 33 , 34 , 35 , 36 , 37 , 38 , 39-هنا، يمكننا وصف هذا الأسلوب بسيطة، لكنها قوية لقياس الدهن الحميد بيروكسايد المحتوى (هدلوكس). يمكن استخدام هذا التحليل كأداة للإجابة على الأسئلة البحثية الهامة فيما يتعلق بالدور وظيفة الكوليسترول الجيد في الأمراض البشرية فيها التهاب النظامية والأكسدة والدهون المؤكسدة لها دور رئيسي (مثل تصلب الشرايين)32.

Protocol

أجريت جميع التجارب باستخدام العينات البيولوجية البشرية بموافقة الأخلاق من الجامعة “كاليفورنيا لوس أنجليس”، ولوس أنجليس ولجنة “الأخلاقيات البشرية مستشفى الفريد”، ملبورن. ملاحظة: هناك العديد من الاختلافات الدالة fluorochrome الحميد المقايسة (انظر المناقشة) 32. أدناه…

Representative Results

يتم إضافة 50 ميليلتر من كل عينة الحميد في كل بئر كما في الخطوة 7، 3. 50 ميليلتر من حل HRP 5 يو/مليلتر (0.25 U) ثم تضاف إلى كل جيدا كما هو الحال في الخطوة 7، 5. هي المحتضنة عينات لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية كما هو الحال في الخطوة 7، 6. ثم تتم إضافة 50 ميليلتر من كاشف فلوروتشرومي في كل بئر ك?…

Discussion

ويوفر البروتوكول الموصوفة هنا أداة قوية للإجابة على الأسئلة البحثية الهامة فيما يتعلق بالدور وظيفة الحميد في تصلب الشرايين، والأمراض التي تصيب البشر. يوضحها المقايسة محتوى الدهن الحميد بيروكسايد كل مغ من HDL-C باستخدام التضخيم الانزيمية (HRP). ويتجنب هذا النهج القيود المعروفة لفحوصات وظيفة …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

الكتاب امتنان الاعتراف بالعمل للدكتور محمد نافاب والن فوغلمان ريدي سرينفاسا لدورها الرئيسي في تنمية تكرارات السابقة من هذا الطراز. T.A.A. معتمد من قبل معهد ملبورن الملكي الجامعة نائب مدير الجامعة “زمالات ما بعد الدكتوراه”. جعفر و AH معتمدة بتمويل المشروع منحة 1108792. معتمد المعارف التقليدية التي تمنح K08AI08272 المعاهد الوطنية للصحة، “منح” المعاهد الوطنية للصحة/نكتس # µL1TR000124 من المعاهد الوطنية للصحة.

Materials

Experimental Reagents
HDL PEG (Polyethylene Glycol) Precipitating Reagent Pointe Scientific H7511
Amplex Red reagent. Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
DMSO. Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
Horse Radish Peroxidase (HRP) Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
Cholesterol Esterase. Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
 Cholesterol Reference standard Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
 Resorufin fluorescense Reference standard Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
5x Reaction Buffer. Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
HDL Cholesterol Automated Reagent ThermoFisher Scientific Co., San Jose, CA, USA. TR39601
Name Company Catalog Number Comments
Plasticware 
96-well plates (polypropylene, flat bottom, clear). Sigma Aldrich M0687
96-well plates (polypropylene, flat bottom, black). Sigma Aldrich M9936
1.5 mL Eppendorf tubes Eppendorf 0030 125.150
ClipTip 200, sterile ThermoFisher Scientific Co., San Jose, CA, USA. 14-488-058
Thermo Scientific Multichannel Pipettes, 8-channel, 125  ThermoFisher Scientific Co., San Jose, CA, USA.  14-387–955
Name Company Catalog Number Comments
Software 
Gen5 2.01 software Biotek, Vermont, USA NA
Name Company Catalog Number Comments
Equipment
Gen5 Plate reader Biotek, Vermont, USA NA

References

  1. Gordon, D. J., Rifkind, B. M. High-density lipoprotein–the clinical implications of recent studies. N Engl J Med. 321, 1311-1316 (1989).
  2. Rubins, H. B., et al. Gemfibrozil for the secondary prevention of coronary heart disease in men with low levels of high-density lipoprotein cholesterol. Veterans Affairs High-Density Lipoprotein Cholesterol Intervention Trial Study Group. N Engl J Med. 341, 410-418 (1999).
  3. Voight, B. F., et al. Plasma HDL cholesterol and risk of myocardial infarction: a mendelian randomisation study. Lancet. 380, 572-580 (2012).
  4. Navab, M., Reddy, S. T., Van Lenten, B. J., Fogelman, A. M. HDL and cardiovascular disease: atherogenic and atheroprotective mechanisms. Nat.Rev Cardiol. 8, 222-232 (2011).
  5. Navab, M., et al. The double jeopardy of HDL. Ann Med. 37, 173-178 (2005).
  6. Navab, M., Reddy, S. T., Van Lenten, B. J., Anantharamaiah, G. M., Fogelman, A. M. The role of dysfunctional HDL in atherosclerosis. J Lipid Res. 50, S145-S149 (2009).
  7. Navab, M., Reddy, S. T., Van Lenten, B. J., Fogelman, A. M. HDL and cardiovascular disease: atherogenic and atheroprotective mechanisms. Nat Rev Cardiol. 8, 222-232 (2011).
  8. Patel, S., et al. Reconstituted high-density lipoprotein increases plasma high-density lipoprotein anti-inflammatory properties and cholesterol efflux capacity in patients with type 2 diabetes. J Am Coll Cardiol. 53, 962-971 (2009).
  9. Navab, M., et al. HDL and the inflammatory response induced by LDL-derived oxidized phospholipids. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 21, 481-488 (2001).
  10. Hayek, T., Oiknine, J., Brook, J. G., Aviram, M. Role of HDL apolipoprotein E in cellular cholesterol efflux: studies in apo E knockout transgenic mice. Biochem Biophys Res Commun. 205, 1072-1078 (1994).
  11. Van Lenten, B. J., et al. Anti-inflammatory HDL becomes pro-inflammatory during the acute phase response. Loss of protective effect of HDL against LDL oxidation in aortic wall cell cocultures. J Clin Invest. 96, 2758-2767 (1995).
  12. Undurti, A., et al. Modification of high density lipoprotein by myeloperoxidase generates a pro-inflammatory particle. J Biol Chem. 284, 30825-30835 (2009).
  13. Van Lenten, B. J., et al. Lipoprotein inflammatory properties and serum amyloid A levels but not cholesterol levels predict lesion area in cholesterol-fed rabbits. J Lipid Res. 48, 2344-2353 (2007).
  14. Watson, C. E., et al. Treatment of patients with cardiovascular disease with L-4F, an apo-A1 mimetic, did not improve select biomarkers of HDL function. J Lipid Res. 52, 361-373 (2011).
  15. Annema, W., et al. Impaired HDL cholesterol efflux in metabolic syndrome is unrelated to glucose tolerance status: the CODAM study. Sci Rep. 6, 27367 (2016).
  16. Movva, R., Rader, D. J. Laboratory assessment of HDL heterogeneity and function. Clin Chem. 54, 788-800 (2008).
  17. Charles-Schoeman, C., et al. Abnormal function of high-density lipoprotein is associated with poor disease control and an altered protein cargo in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 60, 2870-2879 (2009).
  18. Imaizumi, S., et al. L-4F differentially alters plasma levels of oxidized fatty acids resulting in more anti-inflammatory HDL in mice. Drug Metab Lett. 4, 139-148 (2010).
  19. Khera, A. V., et al. Cholesterol efflux capacity, high-density lipoprotein function, and atherosclerosis. N Engl J Med. 364, 127-135 (2011).
  20. Morgantini, C., et al. Anti-inflammatory and antioxidant properties of HDLs are impaired in type 2 diabetes. Diabetes. 60, 2617-2623 (2011).
  21. Patel, P. J., Khera, A. V., Jafri, K., Wilensky, R. L., Rader, D. J. The anti-oxidative capacity of high-density lipoprotein is reduced in acute coronary syndrome but not in stable coronary artery disease. J Am Coll Cardiol. 58, 2068-2075 (2011).
  22. Watanabe, J., et al. Proteomic profiling following immunoaffinity capture of high-density lipoprotein: association of acute-phase proteins and complement factors with proinflammatory high-density lipoprotein in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 64, 1828-1837 (2012).
  23. Watanabe, J., et al. Differential association of hemoglobin with proinflammatory high density lipoproteins in atherogenic/hyperlipidemic mice. A novel biomarker of atherosclerosis. J Biol Chem. 282, 23698-23707 (2007).
  24. Watanabe, J., et al. Hemoglobin and its scavenger protein haptoglobin associate with apoA-1-containing particles and influence the inflammatory properties and function of high density lipoprotein. J Biol Chem. 284, 18292-18301 (2009).
  25. Wang, X. S., et al. A sensitive and specific ELISA detects methionine sulfoxide-containing apolipoprotein A-I in HDL. J Lipid Res. 50, 586-594 (2009).
  26. Navab, M., et al. A cell-free assay for detecting HDL that is dysfunctional in preventing the formation of or inactivating oxidized phospholipids. J Lipid Res. 42, 1308-1317 (2001).
  27. Kelesidis, T., et al. A biochemical fluorometric method for assessing the oxidative properties of HDL. J Lipid Res. 52, 2341-2351 (2011).
  28. Kelesidis, T., et al. Effects of lipid-probe interactions in biochemical fluorometric methods that assess HDL redox activity. Lipids Health Dis. 11, 87 (2012).
  29. Navab, M., et al. Mechanisms of disease: proatherogenic HDL–an evolving field. Nat Clin Pract Endocrinol Metab. 2, 504-511 (2006).
  30. Navab, M., et al. The oxidation hypothesis of atherogenesis: the role of oxidized phospholipids and HDL. J Lipid Res. 45, 993-1007 (2004).
  31. Morgantini, C., et al. HDL lipid composition is profoundly altered in patients with type 2 diabetes and atherosclerotic vascular disease. Nutr Metab Cardiovasc Dis. 24, 594-599 (2014).
  32. Kelesidis, T., et al. A high throughput biochemical fluorometric method for measuring lipid peroxidation in HDL. PLoS One. 9, e111716 (2014).
  33. Kelesidis, T., Yang, O. O., Kendall, M. A., Hodis, H. N., Currier, J. S. Dysfunctional HDL and progression of atherosclerosis in HIV-1-infected and -uninfected adults. Lipids Health Dis. 12, 23 (2013).
  34. Zanni, M. V., et al. HDL redox activity is increased in HIV-infected men in association with macrophage activation and non-calcified coronary atherosclerotic plaque. Antivir Ther. 19, 805-811 (2014).
  35. Roberts, C. K., Katiraie, M., Croymans, D. M., Yang, O. O., Kelesidis, T. Untrained young men have dysfunctional HDL compared with strength-trained men irrespective of body weight status. J Appl Physiol (1985). , 1043-1049 (2013).
  36. Davidson, W. S., et al. Weight loss surgery in adolescents corrects high-density lipoprotein subspecies and their function. Int J Obes (Lond). 41, 83-89 (2017).
  37. Kelesidis, T., et al. Predictors of impaired HDL function in HIV-1 infected compared to uninfected individuals. J Acquir Immune Defic Syndr. , (2017).
  38. Kelesidis, T., et al. Oxidized lipoproteins are associated with markers of inflammation and immune activation in HIV-1 infection. AIDS. 30, 2625-2633 (2016).
  39. Kelesidis, T., et al. Changes in plasma levels of oxidized lipoproteins and lipoprotein subfractions with atazanavir-, raltegravir-, darunavir-based initial antiviral therapy and associations with common carotid artery intima-media thickness: ACTG 5260s. Antivir Ther. , (2016).
  40. Bhattacharyya, D. K., Adak, S., Bandyopadhyay, U., Banerjee, R. K. Mechanism of inhibition of horseradish peroxidase-catalysed iodide oxidation by EDTA. Biochem J. 295 (Pt 2), 281-288 (1994).
  41. Rees, M. D., Pattison, D. I., Davies, M. J. Oxidation of heparan sulphate by hypochlorite: role of N-chloro derivatives and dichloramine-dependent fragmentation. Biochem J. 391, 125-134 (2005).
  42. Mani, K., Cheng, F., Fransson, L. A. Heparan sulfate degradation products can associate with oxidized proteins and proteasomes. J Biol Chem. 282, 21934-21944 (2007).
  43. Finley, P. R., Schifman, R. B., Williams, R. J., Lichti, D. A. Cholesterol in high-density lipoprotein: use of Mg2+/dextran sulfate in its enzymic measurement. Clin Chem. 24, 931-933 (1978).
  44. von Schenck, H., Jacobsson, M. L. Prothrombin assay standardized with an international normalization ratio (INR): goal and reality. Clin Chem. 33, 342 (1987).
  45. de Kok, J. B., et al. Normalization of gene expression measurements in tumor tissues: comparison of 13 endogenous control genes. Lab Invest. 85, 154-159 (2005).
  46. Stocker, R., Keaney, J. F. Role of oxidative modifications in atherosclerosis. Physiol Rev. 84, 1381-1478 (2004).
  47. Holzer, M., et al. Aging affects high-density lipoprotein composition and function. Biochim Biophys Acta. 1831, 1442-1448 (2013).
  48. Amundson, D. M., Zhou, M. Fluorometric method for the enzymatic determination of cholesterol. J Biochem Biophys Methods. 38, 43-52 (1999).
  49. Mishin, V., Gray, J. P., Heck, D. E., Laskin, D. L., Laskin, J. D. Application of the Amplex red/horseradish peroxidase assay to measure hydrogen peroxide generation by recombinant microsomal enzymes. Free Radic Biol Med. 48, 1485-1491 (2010).
  50. Lombardi, A., et al. UCP3 translocates lipid hydroperoxide and mediates lipid hydroperoxide-dependent mitochondrial uncoupling. J Biol Chem. 285, 16599-16605 (2010).
  51. Bhattacharya, A., et al. Denervation induces cytosolic phospholipase A2-mediated fatty acid hydroperoxide generation by muscle mitochondria. J Biol Chem. 284, 46-55 (2009).
  52. Havel, R. J., Eder, H. A., Bragdon, J. H. The distribution and chemical composition of µLtracentrifugally separated lipoproteins in human serum. J Clin Invest. 34, 1345-1353 (1955).
  53. Dyerberg, J. Comments on the quantitation of lipoproteins by agarose-gel electrophoresis. Clin Chim Acta. 61, 103-104 (1975).
  54. Warnick, G. R., Cheung, M. C., Albers, J. J. Comparison of current methods for high-density lipoprotein cholesterol quantitation. Clin Chem. 25, 596-604 (1979).
  55. Demacker, P. N., Hijmans, A. G., Vos-Janssen, H. E., van’t Laar, A., Jansen, A. P. A study of the use of polyethylene glycol in estimating cholesterol in high-density lipoprotein. Clin Chem. 26, 1775-1779 (1980).
  56. Izzo, C., Grillo, F., Murador, E. Improved method for determination of high-density-lipoprotein cholesterol I. Isolation of high-density lipoproteins by use of polyethylene glycol 6000. Clin Chem. 27, 371-374 (1981).
  57. Patel, P. J., Khera, A. V., Wilensky, R. L., Rader, D. J. Anti-oxidative and cholesterol efflux capacities of high-density lipoprotein are reduced in ischaemic cardiomyopathy. Eur J Heart Fail. 15, 1215-1219 (2013).
  58. Roche, M., Rondeau, P., Singh, N. R., Tarnus, E., Bourdon, E. The antioxidant properties of serum albumin. FEBS Lett. 582, 1783-1787 (2008).
  59. Panzenbock, U., Kritharides, L., Raftery, M., Rye, K. A., Stocker, R. Oxidation of methionine residues to methionine sulfoxides does not decrease potential antiatherogenic properties of apolipoprotein A-I. J Biol Chem. 275, 19536-19544 (2000).

Play Video

Cite This Article
Sen Roy, S., Nguyen, H. C. X., Angelovich, T. A., Hearps, A. C., Huynh, D., Jaworowski, A., Kelesidis, T. Cell-free Biochemical Fluorometric Enzymatic Assay for High-throughput Measurement of Lipid Peroxidation in High Density Lipoprotein. J. Vis. Exp. (128), e56325, doi:10.3791/56325 (2017).

View Video