胰岛门静脉移植小鼠模型的研究
Summary
胰岛移植是实现1型糖尿病血糖浓度的一种途径。本文主要研究了通过门静脉途径维持糖尿病小鼠正常血糖水平的移植技术。
Abstract
胰岛移植降低高血糖是非常成功的啮齿动物与化学性糖尿病。实验性胰岛移植最常见的移植部位为肾囊。然而, 由于对胰岛与血液成分的相互作用知之较少, 因此在实验性胰岛移植中利用门静脉途径也有意义。
该协议表明了门静脉胰岛移植技术在 NMRI 裸鼠。腹腔注射佐菌素 (180 毫克/千克) 诱导受体小鼠高血糖。他们被认为是糖尿病在非空腹血糖水平大于20毫摩尔/升。在移植前的某一天, 用胶原酶消化法从供体胰腺中分离出小鼠胰岛;每位糖尿病患者至少使用350个胰岛。根据胰岛的分离率, 每个受体使用两个或更多的捐献小鼠。在隔夜文化在37°c 以后, 胰岛通过门静脉被管理入接受者肝脏。手术后, 小鼠被保护在红色 Makrolon 的房子和观察, 直到是清醒的。该协议维持血糖控制120天的自体小鼠和15天的同种异体小鼠。
Introduction
胰岛移植是治疗1型糖尿病的一种很有前景的方法1。第一次尝试转移绵羊胰腺碎片到糖尿病患者是由沃森威廉斯在1893年进行。然而, 通过埃德蒙顿协议实现了临床胰岛移植的一个重大突破, 此后又制定了一系列国家计划2。过去, 在临床前模型中探讨了骨髓、网膜囊、肌内区、胃粘膜表面、脾、肾胶囊等几个部位, 但门静脉系统被认为是适宜有效的部位之一。对于临床程序3,4,5,6。
胰岛素的外源性管理可以用胰岛输液代替门静脉。这被认为是一个首选的网站, 因为氧气供应是可比的, 在当地的胰腺由于在下游的位置的汇合的门动脉和静脉。此外, 还有一个很大的表面积, 这样可以保留胰岛的三维结构, 并且可以方便地进行血管化5。在接受糖尿病的老鼠中, 2000 人或猪胰岛当量或350小鼠胰岛足以逆转高血糖状态7,8。钳水平被报告了15天在小鼠接受者模型的异种胰岛和在同种异体鼠-鼠模型, 并在120天的自体鼠对鼠移植。
与通过门静脉胰岛移植的疗效相关的因素是适当的麻醉、穿刺方法和止血9。麻醉可以诱导吸入 (5% 异氟烷) 或注射 (氯胺酮, 甲苯噻嗪, 或戊巴比妥), 这些物质往往结合。为了控制麻醉的深度和时间, 应注意鼠标的状态, 如粘膜的颜色、眼盖、角膜反射、呼吸速率和体温。重要的是要确保动物不挣扎, 它生存的行动。温度可由不同的加热装置维护, 如加热垫、红光灯泡、等.热热板已用于保持25-30 摄氏度之间的温度, 在鼠标和操作表之间, 防止发生低温。麻醉药的剂量是重要的, 因为所有这些药物都是由肝脏代谢的, 肝功能可能短暂紊乱的胰岛悬浮液注入.门静脉的理想穿刺点是第一和第二支流静脉的位置。
胰岛的数量和预期的注射量也会影响移植的结果, 因为过量的体积可能会增加剪切应力。0.2 毫升体积被认为适合胰岛移植入门静脉。穿刺伤口 (26 口径针) 诱导门静脉出血, 需要及时有效地停止。无菌纱布或手指可在穿刺部位施加最小压力, 以止血6分钟左右。结合, 门胰岛注射液是有效的, 并提供调节血糖水平的化学诱导糖尿病小鼠模型。
Protocol
Representative Results
Discussion
本文对胰岛移植的门静脉路线进行了探讨。该协议在缓解糖尿病应激方面具有高效性, 为探索胰岛移植研究提供了深入的机会。该协议证实, 大约350只小岛能够逆转高血糖状态。此外, 所有的老鼠在手术过程中都没有死亡, 所有接受者的血糖控制都达到了。定期记录体重和血糖水平, 以反映移植胰岛逆转高血糖的能力、标准和功能。在 syngeneically 移植的小鼠中, 血糖水平每天在第一周和一周内测量一?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们想感谢 Gundula Hertl 的支持。
Materials
| C57Bl/6 mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| BALB/c mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| NMRI nude mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| Ketamine | Bela-pharm | ||
| Xylazine | CEVA TIERGESUNDHEIT GmbH | ||
| Syringe, 23G and 26G needle | BD | ||
| Petri Dish | Falcon | 303800 | |
| NaCl | Carl Roth | 351007 | |
| Sterile Gauze | Fuhrmann | 7647-14-5 | |
| Shaking Water bath | Kotterman | 1501 | |
| Scissors | Braun | 1501 | |
| Glucose Meter | One Touch | ||
| Warm Thermal Plate | Thermo Fisher | ||
| Braunol (povidone-iodide solution) | B.Braun Melsungen AG | 3864154 | |
| Liposic Edo – Sprinkled Ointment (eye ointment) | Dr. G Mann Chem.-Pharm. GmbH | ||
| Incubator | Fa. Roth | ||
| Flow Bench | Herdus | ||
| Ficoll | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| 5-0 Silk Suture Vicryl | Braun | (7.5 *1.75mm) | |
| Michel Clamps (clips) | Aesculap | BN507R | |
| P/FCS Solution | Gibco | 21180-021 | |
| TCM-199 (10x) | Gibco | 21180-021 | |
| FCS | Biowest | S1810-500 | |
| Penicillin-streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| HEPES (1 M) | Biochrom | L 1613 | |
| Gentamycin | Ratiopharm | ||
| Ciprofloxacin | Fresenius Kabi | ||
| Hank's Solution | Gibco | 14060-040 | |
| Collagenase | Roche | 11213865001 | |
| Streptozotocin | Calbiochem | 572204 | |
| OPSITE-spray (wound healer) | Smith and nephew | 66004978 | |
| Reugular food | Altromin | ||
| Head light LED 16042 (magnifying glass) | Eschenbach | 16042 | |
| Rat anti-mouse PECAM-1(CD31) monoclonal primary antibody | Millipore, Chemicon | CBL1337 | Dilution (1:100) |
| Donkey anti-rat secondary antibody | Dianova | 712095153 | Dilution (1:400) |
| Polyclonal guinea pig anti-insulin primay antibody | Dako | A0564 | Dilution (1:500) |
| Donkey anti-guinea pig secondary antibody | Dianova | 706-259-148 | Dilution (1:400) |
References
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