माउस मॉडल में अग्नाशय के टाप का Intraportal प्रत्यारोपण
Summary
अग्नाशय टाप ट्रांसप्लांटेशन प्रकार में normoglycemia प्राप्त करने के लिए एक तरीका है 1 मधुमेह. यह लेख मधुमेह चूहों में सामान्य ग्लूकोज का स्तर बनाए रखने के लिए intraportal मार्ग के माध्यम से प्रत्यारोपण तकनीक पर केंद्रित है ।
Abstract
अग्नाशय टाप ट्रांसप्लांटेशन hyperglycemia को कम करने के लिए रासायनिक प्रेरित मधुमेह के साथ कुतर में अत्यधिक सफल है । प्रायोगिक टाप प्रत्यारोपण में सबसे आम प्रत्यारोपण स्थल किडनी कैप्सूल है । हालांकि, के रूप में कम रक्त के घटक के साथ अग्नाशय के टाप की बातचीत के बारे में जाना जाता है, यह भी प्रयोगात्मक टाप ट्रांसप्लांटेशन में पोर्टल नस दृष्टिकोण का उपयोग करने के लिए समझ में आता है ।
यह प्रोटोकॉल NMRI न्यूड चूहों में एक intraportal टाप ट्रांसप्लांटेशन तकनीक को दर्शाता है । Streptozotocin (१८० मिलीग्राम/kg) intraperitoneally इंजेक्शन है प्राप्तकर्ता चूहों में hyperglycemia प्रेरित करने के लिए । वे एक गैर उपवास पर मधुमेह के रूप में माना जाता है रक्त शर्करा के स्तर से अधिक 20 mmol/ एक दिन पहले प्रत्यारोपण करने के लिए, माउस अग्नाशय के टाप collagenase पाचन द्वारा दाता अग्ंयाशय से अलग कर रहे हैं; ३५० के एक ंयूनतम टाप मधुमेह प्राप्तकर्ता प्रति उपयोग किया जाता है । टाप अलगाव उपज पर निर्भर करता है, दो या अधिक दाता चूहों प्राप्तकर्ता प्रति उपयोग किया जाता है । ३७ डिग्री सेल्सियस पर रातोंरात संस्कृति के बाद, टाप पोर्टल नस के माध्यम से प्राप्तकर्ता जिगर में प्रशासित रहे हैं । सर्जरी के बाद, चूहों लाल Makrolon घरों में संरक्षित कर रहे हैं और जाग रहे हैं जब तक मनाया. यह प्रोटोकॉल syngeneic चूहों में १२० दिनों के लिए glycemic नियंत्रण और allogeneic चूहों में 15 दिनों के लिए बनाए रखता है ।
Introduction
टाप ट्रांसप्लांटेशन प्रकार का इलाज करने के लिए एक होनहार दृष्टिकोण है 1 मधुमेह1। एक मधुमेह रोगी में एक भेड़ अग्नाशय टुकड़ा हस्तांतरण करने के लिए पहला प्रयास १८९३ में वाटसन विलियंस द्वारा किया गया था । हालांकि, नैदानिक टाप प्रत्यारोपण में एक बड़ी सफलता एडमोंटन प्रोटोकॉल के साथ प्राप्त किया गया था, और उसके बाद, राष्ट्रीय कार्यक्रमों की एक श्रृंखला में विकसित किया गया था2। अतीत में, इस तरह के अस्थि मज्जा, omental थैली, इंट्रामस्क्युलर क्षेत्र, गैस्ट्रिक श्लैष्मिक सतह, तिल्ली, और गुर्दे कैप्सूल के रूप में कई साइटों, पूर्व नैदानिक मॉडल में पता लगाया गया, लेकिन पोर्टल शिरापरक प्रणाली उपयुक्त और प्रभावी साइट में से एक के रूप में माना जाता है नैदानिक कार्यक्रमों के लिए3,4,5,6.
इंसुलिन के Exogenous प्रशासन के पोर्टल नस में टाप अर्क द्वारा प्रतिस्थापित किया जा सकता है । यह एक पसंदीदा स्थल माना जाता है क्योंकि ऑक्सीजन की आपूर्ति है कि मूल निवासी अग्न्याशय में पोर्टल धमनी और नस के संगम के स्थान बहाव के कारण के बराबर है । इसके अलावा, वहाँ एक बड़ा सतह क्षेत्र है, ताकि टाप के तीन आयामी संरचना संरक्षित किया जा सकता है, और vascularization की सुविधा हो सकती है5. एक प्राप्तकर्ता मधुमेह माउस में, २,००० मानव या सुअर का टाप समकक्ष या ३५० माउस टाप hyperglycemic राज्य 7, 8 रिवर्स करने के लिए पर्याप्त हैं । Euglycemic स्तर xenogeneic टाप के माउस प्राप्तकर्ता मॉडल में 15 दिनों के लिए और allogeneic माउस-से-माउस मॉडल में रिपोर्ट किए गए थे, और syngeneic माउस-से-माउस ट्रांसप्लांटेशन में १२० से अधिक दिनों के लिए ।
पोर्टल नस के माध्यम से टाप ट्रांसप्लांटेशन की प्रभावकारिता के लिए प्रासंगिक कारकों उचित संज्ञाहरण, पंचर की विधि, और रक्तस्तम्भन9रहे हैं । संज्ञाहरण साँस लेना द्वारा प्रेरित किया जा सकता (5% isoflurane) या इंजेक्शन (ketamine, xylazine, या pentobarbital), और पदार्थ अक्सर संयुक्त कर रहे हैं. गहराई और संज्ञाहरण के समय के नियंत्रण के लिए, ध्यान इस तरह के श्लेष्मा झिल्ली, आँख ढक्कन, corneal पलटा, श्वसन दर, और शरीर के तापमान के रंग के रूप में, माउस की स्थिति के लिए भुगतान किया जाना चाहिए । यह सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण है कि पशु संघर्ष नहीं है और यह ऑपरेशन बचता है । तापमान इस तरह हीटिंग पैड, लाल बत्ती बल्ब, आदि के रूप में अलग हीटिंग उपकरणों, द्वारा बनाए रखा जा सकता है । एक गर्म थर्मल प्लेट माउस और आपरेशन टेबल, जो की घटना से बचाता है के बीच 25-30 डिग्री सेल्सियस के तापमान को बनाए रखने के लिए इस्तेमाल किया गया है हाइपोथर्मिया. निश्चेतक की खुराक महत्वपूर्ण हैं, उन सभी के रूप में जिगर से metabolized हैं, और यकृत समारोह क्षणिक टाप सस्पेंशन के अर्क द्वारा परिक्रमा किया जा सकता है. पोर्टल नस के लिए आदर्श पंचर बिंदु पहली और दूसरी उपनदी नस के बीच की स्थिति है ।
एक अत्यधिक मात्रा कतरनी तनाव में वृद्धि हो सकती है के रूप में, टाप की संख्या और इरादा इंजेक्शन की मात्रा भी प्रत्यारोपण के परिणाम को प्रभावित करते हैं । एक ०.२ मिलीलीटर की मात्रा पोर्टल नस में टाप प्रत्यारोपण के लिए उपयुक्त माना जाता है । puncturing घाव (26 गेज सुई) पोर्टल नस, जो एक समय पर और प्रभावी तरीके से बंद कर दिया जाना चाहिए से खून बह रहा लाती है । बाँझ धुंध या एक उंगली रक्तस्राव को रोकने के लिए के बारे में 6 मिनट के लिए पंचर की साइट पर न्यूनतम दबाव के साथ लागू किया जा सकता है । एक साथ लिया, पोर्टल टाप इंजेक्शन प्रभावी है और रासायनिक प्रेरित मधुमेह माउस मॉडल में रक्त शर्करा के स्तर पर विनियमन प्रदान करता है ।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस अध्ययन में टाप ट्रांसप्लांटेशन के intraportal मार्ग की पड़ताल की जाती है । इस प्रोटोकॉल मधुमेह तनाव से राहत में अत्यधिक कुशल है और एक में गहराई से टाप ट्रांसप्लांटेशन अध्ययन का पता लगाने के अवसर प्रदान करत…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम उसे समर्थन के लिए Gundula Hertl को स्वीकार करना चाहते हैं ।
Materials
| C57Bl/6 mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| BALB/c mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| NMRI nude mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| Ketamine | Bela-pharm | ||
| Xylazine | CEVA TIERGESUNDHEIT GmbH | ||
| Syringe, 23G and 26G needle | BD | ||
| Petri Dish | Falcon | 303800 | |
| NaCl | Carl Roth | 351007 | |
| Sterile Gauze | Fuhrmann | 7647-14-5 | |
| Shaking Water bath | Kotterman | 1501 | |
| Scissors | Braun | 1501 | |
| Glucose Meter | One Touch | ||
| Warm Thermal Plate | Thermo Fisher | ||
| Braunol (povidone-iodide solution) | B.Braun Melsungen AG | 3864154 | |
| Liposic Edo – Sprinkled Ointment (eye ointment) | Dr. G Mann Chem.-Pharm. GmbH | ||
| Incubator | Fa. Roth | ||
| Flow Bench | Herdus | ||
| Ficoll | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| 5-0 Silk Suture Vicryl | Braun | (7.5 *1.75mm) | |
| Michel Clamps (clips) | Aesculap | BN507R | |
| P/FCS Solution | Gibco | 21180-021 | |
| TCM-199 (10x) | Gibco | 21180-021 | |
| FCS | Biowest | S1810-500 | |
| Penicillin-streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| HEPES (1 M) | Biochrom | L 1613 | |
| Gentamycin | Ratiopharm | ||
| Ciprofloxacin | Fresenius Kabi | ||
| Hank's Solution | Gibco | 14060-040 | |
| Collagenase | Roche | 11213865001 | |
| Streptozotocin | Calbiochem | 572204 | |
| OPSITE-spray (wound healer) | Smith and nephew | 66004978 | |
| Reugular food | Altromin | ||
| Head light LED 16042 (magnifying glass) | Eschenbach | 16042 | |
| Rat anti-mouse PECAM-1(CD31) monoclonal primary antibody | Millipore, Chemicon | CBL1337 | Dilution (1:100) |
| Donkey anti-rat secondary antibody | Dianova | 712095153 | Dilution (1:400) |
| Polyclonal guinea pig anti-insulin primay antibody | Dako | A0564 | Dilution (1:500) |
| Donkey anti-guinea pig secondary antibody | Dianova | 706-259-148 | Dilution (1:400) |
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