אפיון של תא החיסון-מסחטות נגזרות ושלפוחיות ולימוד השפעה פונקציונלית על סביבת התא
Summary
הדו ח הנוכחי מדגיש את הדרישות כרונולוגי לחילוץ שלפוחית לפוחית (EV) בידוד מ מיקרוגלייה או דם מקרופאגים. Microglia-EVs נגזר הוערכו כרגולטורים של neurite מוצלח בעוד דם מקרופאג-נגזר EVs נחקרו בשליטה של הפלישה C6 glioma תא ב מבחנה. המטרה היא להבין טוב יותר אלה פונקציות EV כמו מגשרים החיסונית במיקרו סביבות מסוימות.
Abstract
מצב הנוירודלקתי של מערכת העצבים המרכזית (CN) ממלא תפקיד מרכזי בתנאים פיזיולוגיים ופתולוגיים. Microglia, התאים החיסוניים תושב במוח, ולפעמים את מח עצם החדירה מקרופאגים (BMDMs), לווסת את הפרופיל הדלקתי של המיקרוסביבה שלהם ב-CN. עכשיו זה מקובל כי החילוץ שלפוחית הזרע (EV) אוכלוסיות מתאי החיסון לפעול כמגשרים החיסונית. לפיכך, האיסוף והבידוד שלהם חשובים לזיהוי תוכנם, אך גם להערכת ההשפעות הביולוגיות שלהם על תאי הנמען. הנתונים הנוכחיים להדגיש דרישות כרונולוגי עבור EV בידוד מתאי מיקרוגלייה או דם מקרופאגים כולל ביטול הקוד הכולל ואת גודל ההדרה כרומטוגרפיה (SEC) צעדים. ניתוח פרוטמית לא ממוקד התיר את האימות של חתימות חלבון כמו סמנים EV והתאפיין את תוכן EV פעיל ביולוגית. Microglia-EVs נגזר היו גם בשימוש פונקציונלי על התרבות העיקרית של נוירונים כדי להעריך את החשיבות שלהם כמגשרים החיסונית neurite outgrowth. התוצאות הראו כי מיקרוגליה נגזר EVs לתרום כדי להקל על neurite מוצלח בתוך מבחנה. במקביל, דם מקרופאג נגזר EVs היו בשימוש פונקציונלי כמגשרים החיסונית בתרבויות ספרואיד של התאים C6 glioma, התוצאות מראה כי אלה EVs שלוט הפלישה התאים glioma בתוך מבחנה. דו ח זה מדגיש את האפשרות להעריך את הפונקציות של תא החיסון EV-בתיווך, אך גם להבין את הבסיסים המולקולריים של תקשורת כזו. פענוח זה יכול לקדם את השימוש בשלפוחיות טבעיות ו/או בהכנת הפריה חוץ גופית של שלפוחיות טיפוליות כדי לחקות את התכונות החסינות של המיקרו-סביבה של הפתווגיות של ה-CN.
Introduction
נוירופתוגיות רבות קשורות למצב הנוירו-דלקתי שהוא מנגנון מורכב שנחשב יותר ויותר, אך עדיין מובן בצורה גרועה משום שהתהליכים החיסוניים מגוונים ותלויים בסביבת התא. אכן, הפרעות ה-CN לא מערבת בשיטתיות את אותם אותות הפעלה ואוכלוסיות תאים החיסונית ולכן התגובות pro-או אנטי דלקתיות קשה להעריך כסיבות או השלכות של הפתווגיות. מקרופאגים תושב המוח בשם “microglia” נראה להיות בממשק בין מערכת העצבים והחיסונית1. Microglia יש מוצא מיאלואידית ונגזר שק החלמון במהלך המטפיאה פרימיטיבי ליישב את המוח, ואילו מקרופאגים היקפיים נגזרות הכבד עובר במהלך המטפיאה הסופית להפוך מקרופאגים היקפיים2. התאים מיקרוגלייה לתקשר עם נוירונים ותאי העצב-הנגזרים הנגזרות גליה כגון אסטרוציטים ו oligodendrocytes הפוך3. מספר מחקרים שנעשו לאחרונה הוכיחו כי מיקרוגלייה מעורבים בפלסטיות העצבית במהלך פיתוח המוח והומאוסטזיס רקמות למבוגרים, וגם במצב דלקתי הקשורים עם מחלות ניווניות4,5. אחרת, את היושרה של מכשול המוח בדם ניתן להתפשר על הפתווגיות אחרות. התגובות החיסונית, במיוחד בסרטן gliנובלסטומה מרובה, אינם נתמכים רק על ידי תאים מיקרוגלייה כמו מכשול המוח בדם הוא מאורגן מראש דרך תהליכים אנגיוגנטית ונוכחות של כלי הלימפה6,7. לכן, מח עצם גדול הנגזר מקרופאגים (BMDMs) הסתננות מתרחשת בגידול במוח ברחבי הגידול תלויי מנגנוני אנגיוגנזה8. התאים הסרטניים להפעיל השפעה משמעותית על מסכת BMDMs המובילה לתכונות מדכאים חיסוני וצמיחה גידול9. לפיכך, התקשורת בין התאים החיסוניים לבין מיקרואקולוגיה המוחית קשה להבנה כאשר מקור התאים ואותות ההפעלה מגוונים ב-10,11. ולכן מעניין לעצור את התפקודים של חתימות מולקולריות הקשורות לתאי החיסון בתנאים פיסיולוגיים. בהקשר זה, התקשורת תא התא בין תאים חיסוניים לבין מיקרוסביבה התא ניתן ללמוד באמצעות שחרור של שלפוחיות ושלפוחית (EVs).
הEVs מתוחקר יותר ויותר בוויסות התפקודים החיסוניים בריאים ובתנאים פתולוגיים12,13. ניתן לקחת בחשבון שתי אוכלוסיות, אקזומים ומיקרוטיבים. הם מציגים טווחי ביוגנזה וגדלים שונים. האקסוזומים הם שלפוחיות של ~ 30 – 150 בקוטר nm והם מופקים ממערכת אנדוזוממית מופרש במהלך המיזוג של גופים multivesicular (MVBs) עם קרום פלזמה. המיקרושלפוחיות הם כ-100 – 1000 ננומטר בקוטר והם מופקים על ידי החוצה מתוך ממברנה פלזמה תא14. מכיוון שהאקסוחלק לעומת האפליה המיקרובעית עדיין קשה להבין לפי הגודל והדפוסים המולקולריים, נשתמש רק במונח EVs בדו ח הנוכחי. התקשורת המשויכת EV המייצגת את מנגנון האבות הקדמון מאז המחקרים הראו את מעורבותם במינים חסרי חוליות, כולל נמטודס, חרקים או annelids15,16. יתר על כן, התוצאות מראות כי EVs יכול לתקשר עם תאים ממינים שונים להפגין מנגנון זה להיות מערכת נעילת מפתח, מבוסס על הראשון על פני השטח מולקולה זיהוי בין שלפוחיות ותאי הנמען ולאחר מכן מאפשר את ספיגת המגשרים16,17. אכן, EVs מכילים מולקולות רבות כמו חלבונים (למשל, אנזימים, התמרה אותות, ביוגנזה פקטור), שומנים (g., ceramide, כולסטרול) או חומצות גרעין (g., DNA, mRNA או miRNAs) מתנהג כמו הרגולטורים ישיר או עקיף של פעילויות תא הנמען14. זו הסיבה מחקרים מתודולוגיים נערכו גם על תאים חיסוניים כדי לבודד EVs ולאפיין במלואו את חתימות החלבון שלהם18,19.
המחקרים המוקדמים ביותר הפגינו שחרורו של אקסוזומים מיקרוגליה הראשי של חולדה תרבותית כמנגנון inducible בעקבות הפעלה התלויה Wnt3a או סרוטונין20,21. מבחינה פונקציונלית בתוך המוח, microglia-נגזר EVs להסדיר את השחרור שלפוחית סינפטית על ידי מסופים טרום סינפטיות בנוירונים תורמים לשליטה של היכולת העצבית הנוירולית22,23. Microglia-נגזר EVs יכול גם להפיץ את התגובה הדלקתית ציטוקינים בתיווך באזורים גדולים במוח24,25. חשוב מכך, ליגניות מגוונות עבור משפחת הקולטן כמו אגרה עשוי להפעיל הפקות ספציפיות של EVs ב מיקרוגלייה26. לדוגמה, במחקרים חוץ גופית מראים כי lps-הופעל מיקרוגלייה BV2 תאים קווי לייצר תוכן EV דיפרנציאלי כולל הפרו-דלקתיות ציטוקינים27. לכן, המגוון הפונקציונלי של אוכלוסיות משנה של תאים חיסוניים ב-cn, מיקרוגלייה והחדירה bmdms, עשוי להיות מוערך דרך אוכלוסיות ev שלהם כולל ההשפעה EV על תאי הנמען וזיהוי של תוכן EV.
בעבר תיארנו שיטות כדי להעריך את המאפיינים הפונקציונליים של microglia-ו-bmdm נגזר EVs לאחר בידוהם16,19. בדוח הנוכחי, אנו מציעים להעריך באופן עצמאי את ההשפעה של microglia-נגזר EVs על neurite outgrowth, ואת ההשפעה של מקרופאג-נגזר EVs על השליטה של אגרגטים תא glioma. מחקר זה מציע גם ניתוח הפרוטאומית רחב של שברים EV כדי לאמת את ההליך בידוד EV, כמו גם לזהות את חתימות החלבון הפעיל ביולוגית. ההשפעות מועילות הפענוח המולקולרי של תוכן EV יכול לעזור מניפולציה אפשרי שלהם להשתמש כמו סוכנים טיפוליים בהפרעות במוח.
Protocol
Representative Results
Discussion
מערכת העצבים המרכזית (CN) היא רקמה מורכבת שבה תקשורת תא לתא מסדיר פונקציות נוירואליות נורמליות הדרושות לומאוסטזיס30. EVs הם כיום נחקרו נרחב ותיאר מטענים מולקולרי חשוב עבור תקשורת תא אל התא31. הם מעבירים במפורש קוקטייל של מגשרים לתאי המקבל ומשפיעים על התפקודים שלהם בת…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
העבודה המוצגת הייתה נתמכת על ידי המיניסטייר דה ל’חינוך הלאלה, דה L’Enseignement, et la Recherche ו-INSERM. אנו מכירים בהכרת העיר במרכז המדעי בקמפוס לגישה למכשירים ועצות טכניות. אנו מכירים בהכרת ז’אן-פסקל גיסימנו, Soulaimane Aboulouard ואיזבל פורנייר לסיוע בספקטרומטר המסה. אנו מכירים בהכרת הערב את טאננה הערבי, כריסטול ואן קאמפ, פרנסואז le Marrec-Croq, יאקופו ויזייולי ופייר-אריק סוטיץ ‘ על תרומתו החזקה להתפתחויות המדעיות והטכניות.
Materials
| 12% Mini-PROTEAN TGX Precast Protein Gels | Bio-rad | 4561045EDU | |
| Acetonitrile | Fisher Chemicals | A955-1 | |
| Amicon 50 kDa centrifugal filter | Merck | UFC505024 | |
| Ammonium bicarbonate | Sigma-Aldrich | 9830 | |
| HSP90 α/β antibody (RRID: AB_675659) | Santa-cruz | sc-13119 | |
| B27 Plus supplement | Gibco | A3582801 | |
| BenchMixer V2 Vortex Mixer | Benchmark Scientific | BV1003 | |
| Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent Concentrate (Bradford) | Bio-Rad | 5000006 | |
| C18 ZipTips | Merck Millipore | ZTC18S096 | |
| C6 rat glioma cell | ATCC | ATCC CCL-107 | |
| Canonical tubes | Sarstedt | 62.554.002 | |
| Centrifuge | Eppendorf | 5804000010 | |
| CO2 Incubator | ThermoFisher | ||
| Confocal microscope LSM880 | Carl Zeiss | LSM880 | |
| Cover glass | Marienfeld | 111580 | |
| Culture Dish (60 mm) | Sarstedt | 82.1473 | |
| Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | 43819 | |
| DMEM | Gibco | 41966029 | |
| EASY-nLC 1000 Liquid Chromatograph | ThermoFisher | ||
| Electron microscope JEM-2100 | JEOL | ||
| Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N′,N′-tetraacetic acid | Sigma-Aldrich | 03777-10G | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid | Sigma-Aldrich | ED-100G | |
| Exo-FBS | Ozyme | EXO-FBS-50A-1 | Exosome depleted FBS |
| ExoCarta database (top 100 proteins of Evs) | http://www.exocarta.org/ | ||
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 16140071 | |
| Fetal Horse Serum | Biowest | S0960-500 | |
| Filtropur S 0.2 | Sarstedt | 83.1826.001 | |
| Fisherbrand Q500 Sonicator with Probe | Fisherbrand | 12893543 | |
| FlexAnalysis | Brucker | ||
| Fluorescence mounting medium | Agilent | S3023 | |
| Formic Acid | Sigma-Aldrich | 695076 | |
| Formvar-carbon coated copper grids | Agar scientific Ltd | AGS162-3 | |
| Glucose | Sigma-Aldrich | G8769 | |
| Glutaraldehyde | Sigma-Aldrich | 340855 | |
| Hoechst 33342 | Euromedex | 17535-AAT | |
| Idoacetamide | Sigma-Aldrich | I1149 | |
| InstantBlue Coomassie Protein Stain | Expedeon | ISB1L | |
| Invert light microscope CKX53 | Olympus | ||
| L-glutamine | Gibco | 25030-024 | |
| LabTek II 8 wells | Nunc | 154534 | |
| Laemmli 2X | Bio-Rad | 1610737 | |
| Laminin | Corning | 354232 | |
| MaxQuant software (proteins identification software) | https://maxquant.net/maxquant/ | ||
| MBT Polish stell | Brucker | 8268711 | |
| MEM 10X | Gibco | 21090-022 | |
| Methylcellulose | Sigma-Aldrich | M6385-100G | |
| MiliQ water | Merck Millipore | ||
| Milk | Regilait | REGILAIT300 | |
| Mini PROTEAN Vertical Electrophoresis Cell | Bio-Rad | 1658000FC | |
| MonoP FPLC column | GE Healthcare | no longer available | |
| Nanosight NS300 | Malvern Panalytical | NS300 | |
| NanoSight NTA software v3.2 | Malvern Panalytical | ||
| NanoSight syringe pump | Malvern Panalytical | ||
| Neurobasal | Gibco | 21103-049 | |
| Nitrocellulose membrane | GE Healthcare | 10600007 | |
| Nonidet P-40 | Fluka | 56741 | |
| Nunc multidish 24 wells | ThermoFisher | 82.1473 | |
| Paraformaldehyde | Electro microscopy Science | 15713 | |
| PC-12 cell line | ATCC | ATCC CRL-1721 | |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| Peptide calibration mix | LaserBio Labs | C101 | |
| Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | Jackson ImmunoResearch | 115-035-003 | |
| Perseus software (Processing of identified proteins) | https://maxquant.net/perseus/ | ||
| Phalloidin-tetramethylrhodamine conjugate | Santa-cruz | sc-362065 | |
| Phenylmethanesulfonyl fluoride | Sigma-Aldrich | 78830 | |
| Phosphate Buffer Saline | Invitrogen | 14190094 | no calcium, no magnesium |
| pluriStrainer M/ 60 µm | pluriSelect | 43-50060 | |
| Poly-D-lysine | Sigma-Aldrich | P6407 | |
| Polycarbonate centrifuge tubes | Beckman Coulter | 355651 | |
| Protease Inhibitor | Sigma-Aldrich | S8830-20TAB | |
| PureCol | Cell Systems | 5005 | |
| Q-Exactive mass spectrometer | ThermoFisher | ||
| rapifleX mass spectrometer | Brucker | ||
| Rat cortical neurons | Cell Applications | R882N-20 | Cell origin : Derived from cerebral cortices of day 18 embryonic Sprague Dawley rat brains |
| Rat Macrophage & Microglia Culture Medium | Cell Applications | R620K-100 | Cell orgin : Normal healthy Rat bone marrow |
| Rat primary macrophages | Cell Applications | R8818-10a | |
| Rat primary microglia | Lonza | RG535 | |
| Sepharose CL-2B | GE Healthcare | 17014001 | |
| Sequencing Grade Modified Trypsin | Promega | V5111 | |
| Slide | Dustsher | 100204 | |
| Sodium Chloride | Scharlau | SO0227 | |
| Sodium Dodecyl Sulfate | Sigma-Aldrich | L3771 | |
| Sodium Fluoride | Sigma-Aldrich | S7920-100G | |
| Sodium hydroxide | Scharlab | SO0420005P | |
| Sodium pyrophosphate | Sigma-Aldrich | S6422-100G | |
| SpeedVac Vacuum Concentrator | ThermoFisher | ||
| String software (functional protein association networks) | https://string-db.org/ | ||
| SuperSignal West Dura extended Duration Substrate | ThermoFisher | 34075 | |
| Syringe 1.0 mL | Terumo | 8SS01H1 | |
| Trans-Blot SD Semi-Dry Transfer cell | Bio-Rad | 1703940 | |
| Trifluoroacetic acid | Sigma-Aldrich | T6508 | |
| Tris | Interchim | UP031657 | |
| Tris-Glycine | Euromedex | EU0550 | |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P2287 | |
| Ultracentrifuge | Beckman Coulter | A95765 | |
| Ultracentrifuge Rotor 70.1 Ti | Beckman Coulter | 342184 | |
| Uranyl acetate | Agar Scientific Ltd | AGR1260A | |
| Whatman filter paper | Sigma-Aldrich | WHA10347510 | |
| α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid | Sigma-Aldrich | C2020-25G |
References
- Thion, M. S., Ginhoux, F., Garel, S. Microglia and early brain development: An intimate journey. Science. 362 (6411), 185-189 (2018).
- Ginhoux, F., et al. Fate mapping analysis reveals that adult microglia derive from primitive macrophages. Science. 330 (6005), 841-845 (2010).
- Sankowski, R., Mader, S., Valdes-Ferrer, S. I. Systemic Inflammation and the Brain: Novel Roles of Genetic, Molecular, and Environmental Cues as Drivers of Neurodegeneration. Frontiers in Cellular Neuroscience. 9, (2015).
- Chakrabarty, S., Kabekkodu, S. P., Singh, R. P., Thangaraj, K., Singh, K. K., Satyamoorthy, K. Microglia in health and disease. Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 43 (3), 25-29 (2015).
- Sankowski, R., Mader, S., Valdés-Ferrer, S. I. Systemic inflammation and the brain: novel roles of genetic, molecular, and environmental cues as drivers of neurodegeneration. Frontiers in cellular neuroscience. 9, 28 (2015).
- Engelhardt, B., Vajkoczy, P., Weller, R. O. The movers and shapers in immune privilege of the CNS. Nature Immunology. 18 (2), 123-131 (2017).
- Louveau, A., et al. Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels. Nature. 523 (7560), 337-341 (2015).
- Domingues, P., et al. Tumor infiltrating immune cells in gliomas and meningiomas. Brain, Behavior, and Immunity. 53, 1-15 (2016).
- Hambardzumyan, D., Gutmann, D. H., Kettenmann, H. The role of microglia and macrophages in glioma maintenance and progression. Nature Neuroscience. 19 (1), 20-27 (2016).
- Thion, M. S., et al. Microbiome Influences Prenatal and Adult Microglia in a Sex-Specific Manner. Cell. 172 (3), 500-516 (2018).
- Hammond, T. R., et al. Single-Cell RNA Sequencing of Microglia throughout the Mouse Lifespan and in the Injured Brain Reveals Complex Cell-State Changes. Immunity. 50 (1), 253-271 (2019).
- Rajendran, L., et al. Emerging Roles of Extracellular Vesicles in the Nervous System. The Journal of Neuroscience. 34 (46), 15482-15489 (2014).
- Gupta, A., Pulliam, L. Exosomes as mediators of neuroinflammation. Journal of Neuroinflammation. 11 (1), 68 (2014).
- van Niel, G., D’Angelo, G., Raposo, G. Shedding light on the cell biology of extracellular vesicles. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 19 (4), 213-228 (2018).
- Budnik, V., Ruiz-cañada, C., Wendler, F. Extracellular vesicles round off communication in the nervous system. Nature Reviews Neurosciences. 17, 160-172 (2016).
- Raffo-Romero, A., et al. Medicinal Leech CNS as a Model for Exosome Studies in the Crosstalk between Microglia and Neurons. International Journal of Molecular Sciences. 19 (12), 4124 (2018).
- Zhou, Y., et al. Exosomes Transfer Among Different Species Cells and Mediating miRNAs Delivery. Journal of Cellular Biochemistry. 118 (12), 4267-4274 (2017).
- Arab, T., et al. Proteomic characterisation of leech microglia extracellular vesicles (EVs): comparison between differential ultracentrifugation and OptiprepTM density gradient isolation. Journal of extracellular vesicles. 8 (1), 1603048 (2019).
- Murgoci, A. -. N., et al. Brain-Cortex Microglia-Derived Exosomes: Nanoparticles for Glioma Therapy. ChemPhysChem. 19 (10), 1205-1214 (2018).
- Glebov, K., et al. Serotonin stimulates secretion of exosomes from microglia cells. Glia. 63 (4), 626-634 (2015).
- Hooper, C., et al. Wnt3a induces exosome secretion from primary cultured rat microglia. BMC Neuroscience. 13 (1), 144 (2012).
- Gabrielli, M., et al. Active endocannabinoids are secreted on extracellular membrane vesicles. EMBO reports. 16 (2), 213-220 (2015).
- Antonucci, F., et al. Microvesicles released from microglia stimulate synaptic activity via enhanced sphingolipid metabolism. The EMBO Journal. 31 (5), 1231-1240 (2012).
- Frühbeis, C., Fröhlich, D., Kuo, W. P., Krämer-Albers, E. -. M. Extracellular vesicles as mediators of neuron-glia communication. Frontiers in Cellular Neuroscience. 7, 182 (2013).
- Prada, I., et al. Glia-to-neuron transfer of miRNAs via extracellular vesicles: a new mechanism underlying inflammation-induced synaptic alterations. Acta neuropathologica. 135 (4), 529-550 (2018).
- Takenouchi, T., et al. Extracellular ATP induces unconventional release of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from microglial cells. Immunology Letters. 167 (2), 116-124 (2015).
- Yang, Y., Boza-Serrano, A., Dunning, C. J. R., Clausen, B. H., Lambertsen, K. L., Deierborg, T. Inflammation leads to distinct populations of extracellular vesicles from microglia. Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 168 (2018).
- Duhamel, M., et al. Paclitaxel Treatment and Proprotein Convertase 1/3 (PC1/3) Knockdown in Macrophages is a Promising Antiglioma Strategy as Revealed by Proteomics and Cytotoxicity Studies. Molecular & Cellular Proteomics. 17 (6), 1126-1143 (2018).
- Pool, M., Thiemann, J., Bar-Or, A., Fournier, A. E. NeuriteTracer: A novel ImageJ plugin for automated quantification of neurite outgrowth. Journal of Neuroscience Methods. 168 (1), 134-139 (2008).
- Domingues, H. S., Portugal, C. C., Socodato, R., Relvas, J. B. Oligodendrocyte, Astrocyte, and Microglia Crosstalk in Myelin Development, Damage, and Repair. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 71 (2016).
- Rashed, M. H., et al. Exosomes: From Garbage Bins to Promising Therapeutic Targets. Int. J. Mol. Sci. Int. J. Mol. Sci. 18 (18), (2017).
- Yuana, Y., Sturk, A., Nieuwland, R. Extracellular vesicles in physiological and pathological conditions. Blood Reviews. 27 (1), 31-39 (2013).
- Frohlich, D., et al. Multifaceted effects of oligodendroglial exosomes on neurons: impact on neuronal firing rate, signal transduction and gene regulation. Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 369 (1652), (2014).
- Krämer-Albers, E. -. M., et al. Oligodendrocytes secrete exosomes containing major myelin and stress-protective proteins: Trophic support for axons. Proteomics. Clinical applications. 1 (11), 1446-1461 (2007).
- Verderio, C., et al. Myeloid microvesicles are a marker and therapeutic target for neuroinflammation. Annals of Neurology. 72 (4), 610-624 (2012).
- Prada, I., Furlan, R., Matteoli, M., Verderio, C. Classical and Unconventional Pathways of Vesicular Release in Microglia. GLIA. 61, 1003-1017 (2013).
- Prinz, M., Priller, J. The role of peripheral immune cells in the CNS in steady state and disease. Nature Neuroscience. 20 (2), 136-144 (2017).
- Li, Q., Barres, B. A. Microglia and macrophages in brain homeostasis and disease. Nature Reviews Immunology. , (2017).
- Kennedy, B. C., et al. Tumor-Associated Macrophages in Glioma: Friend or Foe. Journal of Oncology. 2013, 1-11 (2013).
- Potolicchio, I., Carven, G. J., Xu, X., Stipp, C., Riese, R. J., Stern, L. J., Santambroggio, L. Proteomic Analysis of Microglia-Derived Exosomes: Metabolic Role of the Aminopeptidase CD13 in Neuropeptide Catabolism1. The Journal of Immunology. 175, 2237-2243 (2005).
- Turola, E., Furlan, R., Bianco, F., Matteoli, M., Verderio, C. Microglial microvesicle secretion and intercellular signaling. Frontiers in Physiology. 3, (2012).
- Cocucci, E., Meldolesi, J. Ectosomes and exosomes : shedding the confusion between extracellular vesicles. Trends in Cell Biology. 25 (6), 364-372 (2015).
- Théry, C., et al. Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines. Journal of Extracellular Vesicles. 7 (1), 1535750 (2018).
- de Vrij, J., et al. Glioblastoma-derived extracellular vesicles modify the phenotype of monocytic cells. International Journal of Cancer. 137 (7), 1630-1642 (2015).
- van der Vos, K. E., et al. Directly visualized glioblastoma-derived extracellular vesicles transfer RNA to microglia/macrophages in the brain. Neuro-Oncology. 18 (1), 58-69 (2016).
