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Neuroscience

Caracterização de vesículas extracelulares derivadas de células imunes e estudo do impacto funcional no ambiente celular

Published: June 02, 2020
doi:
10.3791/60118
, , , ,
1U1192-Laboratoire Protéomique, Réponse Inflammatoire et Spectrométrie de Masse (PRISM),Univ. Lille, INSERM

Summary

O presente relatório destaca os requisitos cronológicos para o isolamento da vesícula extracelular (EV) de microglia ou macrófagos sanguíneos. Os EVs derivados de microglia foram avaliados como reguladores do crescimento do neurite, enquanto os EVs derivados do macrófago sanguíneo foram estudados no controle da invasão celular C6 glioma em ensaios in vitro. O objetivo é entender melhor essas funções de EV como mediadores imunológicos em microambientes específicos.

Abstract

O estado neuroinflamatório do sistema nervoso central (SNC) desempenha um papel fundamental nas condições fisiológicas e patológicas. Microglia, as células imunes residentes no cérebro, e às vezes os macrófagos derivados da medula óssea (BMDMs), regulam o perfil inflamatório de seu microambiente no CNS. Aceita-se agora que as populações de vesícula extracelular (EV) de células imunes agem como mediadores imunológicos. Assim, sua coleta e isolamento são importantes para identificar seus conteúdos, mas também avaliar seus efeitos biológicos sobre as células receptoras. Os dados atuais destacam os requisitos cronológicos para o isolamento de EV de células microglia ou macrófagos sanguíneos, incluindo as etapas de ultracentrugação e exclusão de tamanho (SEC). Uma análise proteômica não direcionada permitiu a validação de assinaturas proteicas como marcadores EV e caracterizou o conteúdo de EV biologicamente ativo. Os EVs derivados de microglia também foram usados funcionalmente na cultura primária dos neurônios para avaliar sua importância como mediadores imunológicos no crescimento de neurite. Os resultados mostraram que os EVs derivados de microglia contribuem para facilitar o crescimento do neurite in vitro. Em paralelo, os EVs derivados do macrófago sanguíneo foram usados funcionalmente como mediadores imunológicos em culturas eferóides de células glioma C6, os resultados mostrando que esses EVs controlam a invasão celular glioma in vitro. Este relatório destaca a possibilidade de avaliar as funções de células imunes mediadas pelo EV, mas também entender as bases moleculares de tal comunicação. Essa decifração poderia promover o uso de vesículas naturais e/ou a preparação in vitro de vesículas terapêuticas, a fim de imitar propriedades imunes no microambiente das patologias do SNC.

Introduction

Muitas neuropatologias estão relacionadas ao estado neuro-inflamatório, que é um mecanismo complexo que é cada vez mais considerado, mas ainda mal compreendido porque os processos imunológicos são diversos e dependem do ambiente celular. De fato, os transtornos do SNC não envolvem sistematicamente os mesmos sinais de ativação e populações de células imunes e, portanto, as respostas pró ou anti-inflamatórias são difíceis de avaliar como causas ou consequências das patologias. Os macrófagos residentes no cérebro chamados “microglia” parecem estar na interface entre o sistema nervoso e imunológico1. A microglia tem origem mielóide e é derivada do saco de gema durante hematopeiese primitiva para colonizar o cérebro, enquanto macrófagos periféricos são derivados do fígado fetal durante hematopoiese definitiva para se tornarem macrófagos periféricos2. As células microglia se comunicam com neurônios e células gliais derivadas de neurônios, como astrócitos e oligodendrócitos3. Vários estudos recentes demonstraram que a microglia está envolvida na plasticidade neuronal durante o desenvolvimento do CNS e na homeostase do tecido adulto, e também no estado inflamatório associado às doenças neurodegenerativas4,,5. Caso contrário, a integridade da barreira cerebral sanguínea pode ser comprometida em outras patologias do CNS. As respostas imunes, especialmente no câncer multiforme glioblastoma, não são suportadas apenas por células microglia, pois a barreira cerebral sanguínea é reorganizada através de processos angiogênicos e a presença de vasos linfáticos6,,7. Portanto, uma grande infiltração de macrófagos derivados da medula óssea (BMDMs) ocorre no tumor cerebral ao longo de mecanismos de angiogênese dependentes do tumor8. As células cancerígenas exercem uma influência significativa sobre os BMDMs infiltrados que levam a propriedades imunossupressores e crescimento do tumor9. Assim, a comunicação entre as células imunes e seu microambiente cerebral é difícil de entender, pois a origem celular e os sinais de ativação são diversos10,11. É, portanto, interessante apreender as funções de assinaturas moleculares associadas às células imunes em condições fisiológicas. Nesse sentido, a comunicação celular-celular entre células imunes e microambiente celular pode ser estudada através da liberação de vesículas extracelulares (EVs).

Os EVs estão sendo estudados cada vez mais na regulação das funções imunológicas em condições saudáveis e patológicas12,13. Duas populações, exosóis e microvesículos, podem ser levadas em conta. Eles apresentam diferentes biogêneses e faixas de tamanho. Os exossomos são vesículas de ~30-150 nm de diâmetro e são gerados a partir do sistema endosomal e secretados durante a fusão de corpos multivesiculares (MVBs) com a membrana plasmática. Os microvesículos têm cerca de 100-1.000 nm de diâmetro e são gerados por um brotamento externo da membrana plasmáticacelular 14. Como a discriminação exósia versus microvesícula ainda é difícil de perceber de acordo com o tamanho e os padrões moleculares, usaremos apenas o termo EVs no presente relatório. A comunicação associada ao EV no CNS representa um mecanismo ancestral, uma vez que estudos mostraram seu envolvimento em espécies invertebradas, incluindo nematoides, insetos ou annelids15,16. Além disso, os resultados que mostram que os EVs podem se comunicar com células de diferentes espécies demonstram que esse mecanismo é um sistema de bloqueio de chaves, baseado primeiro no reconhecimento de moléculas superficiais entre vesículas e células receptoras e, em seguida, permitindo a absorção de mediadores16,,17. De fato, os EVs contêm muitas moléculas como proteínas (por exemplo, enzimas, transdução de sinais, fator biogênese), lipídios (por exemplo, ceramida, colesterol) ou ácidos nucleicos (por exemplo, DNA, mRNA ou miRNAs) agindo como reguladores diretos ou indiretos das atividades celulares receptoras14. É por isso que estudos metodológicos também foram realizados em células imunes para isolar EVs e caracterizar plenamente suas assinaturas proteicas18,19.

Os primeiros estudos demonstraram a liberação de exosóis da microglia primária cultivada como um mecanismo indutor após uma ativação Wnt3a ou dependente de serotonina20,21. Funcionalmente no CNS, os EVs derivados de microglia regulam a liberação de vesícula sináptica por terminais pré-sinápticos em neurônios que contribuem para o controle da excitabilidade neuronal22,23. EVs derivados de microglia também poderiam propagar a resposta inflamatória mediada por citocinas em grandes regiões cerebrais24,25. É importante ressaltar que os diversos ligantes para a família receptora de pedágio podem ativar produções específicas de EVs na microglia26. Por exemplo, estudos in vitro mostram que as linhas celulares Microglia BV2 ativadas pelo LPS produzem conteúdoes diferenciados de EV, incluindo citocinas pró-inflamatórias27. Portanto, a diversidade funcional de subpopulações de células imunes no CNS, microglia e BMDMs infiltrados, pode ser avaliada através de suas próprias populações de EV, incluindo o impacto do EV nas células receptoras e a identificação de conteúdos de EV.

Descrevemos anteriormente métodos para avaliar as propriedades funcionais dos EVs derivados de microglia e BMDM após seu isolamento16,19. No presente relatório, propomos avaliar independentemente o efeito dos EVs derivados de microglia no crescimento do neurite e o efeito dos EVs derivados do macrófago no controle de agregados celulares glioma. Este estudo também propõe uma ampla análise proteômica das frações de EV, a fim de validar o procedimento de isolamento do EV, bem como identificar as assinaturas proteicas biologicamente ativas. Os efeitos benéficos e a decifração molecular do conteúdo de EV poderiam ajudar sua possível manipulação e uso como agentes terapêuticos em distúrbios cerebrais.

Protocol

1. Cultura Primária de Microglia/Macrófagos Cultura primária da microglia Microglia primária de rato comercial de cultura (2 x 106 células) (ver a Tabela de Materiais) no meio de Águia modificada (DMEM) modificado de Dulbecco, complementado com soro 10% livre de exosome, 100 U/mL de penicilina, 100 μg/mL streptomicina e 9,0 g/L de glicose a 37 °C e 5% DE CO2. Colete o meio condicionado após uma cultura de 48h e prossiga para …

Representative Results

Um dos principais desafios para atribuir efeitos biológicos a vesículas extracelulares (EVs) é a capacidade de isolar os EVs de todo o meio da cultura. Neste relatório, apresentamos um método utilizando a ultrassom (UC) e a cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) que está acoplado à análise em larga escala de assinaturas proteicas para validar marcadores EV e identificar compostos bioativos. Os EVs derivados de macrófago ou microglia foram isolados do meio condicionado após uma cultura de 24 h ou 48h, respe…

Discussion

O sistema nervoso central (SNC) é um tecido complexo no qual a comunicação célula-celular regula as funções neuronais normais necessárias para a homeostase30. Os EVs são agora amplamente estudados e descritos como importantes cargas moleculares para a comunicação célula-celular31. Eles fornecem especificamente um coquetel de mediadores para células receptoras, afetando assim suas funções em condições saudáveis e patológicas32. Estud…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

O trabalho apresentado contou com o apoio da Ministère de L’Education Nationale, de L’Enseignement Supérieur et de la Recherche e INSERM. Agradecemos o BICeL- Campus Scientific City Facility pelo acesso a instrumentos e conselhos técnicos. Agradecemos a Jean-Pascal Gimeno, Soulaimane Aboulouard e Isabelle Fournier pela assistência de espectrometria de massa. Agradecemos tanina árabe, Christelle van Camp, Françoise le Marrec-Croq, Jacopo Vizioli e Pierre-Eric Sautière por sua forte contribuição para os desenvolvimentos científicos e técnicos.

Materials

12% Mini-PROTEAN TGX Precast Protein Gels Bio-rad 4561045EDU  
Acetonitrile Fisher Chemicals A955-1  
Amicon 50 kDa centrifugal filter Merck UFC505024  
Ammonium bicarbonate Sigma-Aldrich 9830  
HSP90 α/β antibody (RRID: AB_675659) Santa-cruz sc-13119  
B27 Plus supplement Gibco A3582801  
BenchMixer V2 Vortex Mixer Benchmark Scientific BV1003  
Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent Concentrate (Bradford) Bio-Rad 5000006  
C18 ZipTips Merck Millipore ZTC18S096  
C6 rat glioma cell ATCC ATCC CCL-107  
Canonical tubes Sarstedt 62.554.002  
Centrifuge Eppendorf 5804000010  
CO2 Incubator ThermoFisher    
Confocal microscope LSM880 Carl Zeiss LSM880  
Cover glass Marienfeld 111580  
Culture Dish (60 mm) Sarstedt 82.1473  
Dithiothreitol Sigma-Aldrich 43819  
DMEM Gibco 41966029  
EASY-nLC 1000 Liquid Chromatograph ThermoFisher    
Electron microscope JEM-2100 JEOL    
Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N′,N′-tetraacetic acid Sigma-Aldrich 03777-10G  
Ethylenediaminetetraacetic acid Sigma-Aldrich ED-100G  
Exo-FBS Ozyme EXO-FBS-50A-1 Exosome depleted FBS
ExoCarta database (top 100 proteins of Evs)     http://www.exocarta.org/
Fetal Bovine Serum Gibco 16140071  
Fetal Horse Serum Biowest S0960-500  
Filtropur S 0.2 Sarstedt 83.1826.001  
Fisherbrand Q500 Sonicator with Probe Fisherbrand 12893543  
FlexAnalysis Brucker    
Fluorescence mounting medium Agilent S3023  
Formic Acid Sigma-Aldrich 695076  
Formvar-carbon coated copper grids Agar scientific Ltd AGS162-3  
Glucose Sigma-Aldrich G8769  
Glutaraldehyde Sigma-Aldrich 340855  
Hoechst 33342 Euromedex 17535-AAT  
Idoacetamide Sigma-Aldrich I1149  
InstantBlue Coomassie Protein Stain Expedeon ISB1L  
Invert light microscope CKX53 Olympus    
L-glutamine Gibco 25030-024  
LabTek II 8 wells  Nunc 154534  
Laemmli 2X Bio-Rad 1610737  
Laminin Corning 354232  
MaxQuant software (proteins identification software)     https://maxquant.net/maxquant/
MBT Polish stell Brucker 8268711  
MEM 10X Gibco 21090-022  
Methylcellulose Sigma-Aldrich M6385-100G  
MiliQ water Merck Millipore    
Milk Regilait REGILAIT300  
Mini PROTEAN Vertical Electrophoresis Cell Bio-Rad 1658000FC  
MonoP FPLC column GE Healthcare   no longer available
Nanosight NS300 Malvern Panalytical NS300  
NanoSight NTA software v3.2 Malvern Panalytical    
NanoSight syringe pump Malvern Panalytical    
Neurobasal Gibco 21103-049  
Nitrocellulose membrane GE Healthcare 10600007  
Nonidet P-40 Fluka 56741  
Nunc multidish 24 wells ThermoFisher 82.1473  
Paraformaldehyde Electro microscopy Science 15713  
PC-12 cell line ATCC ATCC CRL-1721  
Penicillin-Streptomycin Gibco 15140-122  
Peptide calibration mix LaserBio Labs C101  
Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) Jackson ImmunoResearch 115-035-003  
Perseus software (Processing of identified proteins)     https://maxquant.net/perseus/
Phalloidin-tetramethylrhodamine conjugate Santa-cruz sc-362065  
Phenylmethanesulfonyl fluoride Sigma-Aldrich 78830  
Phosphate Buffer Saline Invitrogen 14190094 no calcium, no magnesium
pluriStrainer M/ 60 µm pluriSelect 43-50060  
Poly-D-lysine Sigma-Aldrich P6407  
Polycarbonate centrifuge tubes Beckman Coulter 355651  
Protease Inhibitor Sigma-Aldrich S8830-20TAB  
PureCol Cell Systems 5005  
Q-Exactive mass spectrometer ThermoFisher    
rapifleX mass spectrometer Brucker    
Rat cortical neurons Cell Applications R882N-20 Cell origin : Derived from cerebral cortices of day 18 embryonic Sprague Dawley rat brains
Rat Macrophage & Microglia Culture Medium Cell Applications R620K-100 Cell orgin : Normal healthy Rat bone marrow
Rat primary macrophages Cell Applications R8818-10a  
Rat primary microglia Lonza RG535  
Sepharose CL-2B GE Healthcare 17014001  
Sequencing Grade Modified Trypsin Promega V5111  
Slide Dustsher 100204  
Sodium Chloride Scharlau SO0227  
Sodium Dodecyl Sulfate Sigma-Aldrich L3771  
Sodium Fluoride Sigma-Aldrich S7920-100G  
Sodium hydroxide Scharlab SO0420005P  
Sodium pyrophosphate Sigma-Aldrich S6422-100G  
SpeedVac Vacuum Concentrator ThermoFisher    
String software (functional protein association networks)     https://string-db.org/
SuperSignal West Dura extended Duration Substrate ThermoFisher 34075  
Syringe 1.0 mL Terumo 8SS01H1  
Trans-Blot SD Semi-Dry Transfer cell Bio-Rad 1703940  
Trifluoroacetic acid Sigma-Aldrich T6508  
Tris Interchim UP031657  
Tris-Glycine Euromedex EU0550  
Tween 20 Sigma-Aldrich P2287  
Ultracentrifuge Beckman Coulter A95765  
Ultracentrifuge Rotor 70.1 Ti Beckman Coulter 342184  
Uranyl acetate Agar Scientific Ltd AGR1260A  
Whatman filter paper Sigma-Aldrich WHA10347510  
α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid Sigma-Aldrich C2020-25G  
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References

  1. Thion, M. S., Ginhoux, F., Garel, S. Microglia and early brain development: An intimate journey. Science. 362 (6411), 185-189 (2018).
  2. Ginhoux, F., et al. Fate mapping analysis reveals that adult microglia derive from primitive macrophages. Science. 330 (6005), 841-845 (2010).
  3. Sankowski, R., Mader, S., Valdes-Ferrer, S. I. Systemic Inflammation and the Brain: Novel Roles of Genetic, Molecular, and Environmental Cues as Drivers of Neurodegeneration. Frontiers in Cellular Neuroscience. 9, (2015).
  4. Chakrabarty, S., Kabekkodu, S. P., Singh, R. P., Thangaraj, K., Singh, K. K., Satyamoorthy, K. Microglia in health and disease. Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 43 (3), 25-29 (2015).
  5. Sankowski, R., Mader, S., Valdés-Ferrer, S. I. Systemic inflammation and the brain: novel roles of genetic, molecular, and environmental cues as drivers of neurodegeneration. Frontiers in cellular neuroscience. 9, 28 (2015).
  6. Engelhardt, B., Vajkoczy, P., Weller, R. O. The movers and shapers in immune privilege of the CNS. Nature Immunology. 18 (2), 123-131 (2017).
  7. Louveau, A., et al. Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels. Nature. 523 (7560), 337-341 (2015).
  8. Domingues, P., et al. Tumor infiltrating immune cells in gliomas and meningiomas. Brain, Behavior, and Immunity. 53, 1-15 (2016).
  9. Hambardzumyan, D., Gutmann, D. H., Kettenmann, H. The role of microglia and macrophages in glioma maintenance and progression. Nature Neuroscience. 19 (1), 20-27 (2016).
  10. Thion, M. S., et al. Microbiome Influences Prenatal and Adult Microglia in a Sex-Specific Manner. Cell. 172 (3), 500-516 (2018).
  11. Hammond, T. R., et al. Single-Cell RNA Sequencing of Microglia throughout the Mouse Lifespan and in the Injured Brain Reveals Complex Cell-State Changes. Immunity. 50 (1), 253-271 (2019).
  12. Rajendran, L., et al. Emerging Roles of Extracellular Vesicles in the Nervous System. The Journal of Neuroscience. 34 (46), 15482-15489 (2014).
  13. Gupta, A., Pulliam, L. Exosomes as mediators of neuroinflammation. Journal of Neuroinflammation. 11 (1), 68 (2014).
  14. van Niel, G., D’Angelo, G., Raposo, G. Shedding light on the cell biology of extracellular vesicles. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 19 (4), 213-228 (2018).
  15. Budnik, V., Ruiz-cañada, C., Wendler, F. Extracellular vesicles round off communication in the nervous system. Nature Reviews Neurosciences. 17, 160-172 (2016).
  16. Raffo-Romero, A., et al. Medicinal Leech CNS as a Model for Exosome Studies in the Crosstalk between Microglia and Neurons. International Journal of Molecular Sciences. 19 (12), 4124 (2018).
  17. Zhou, Y., et al. Exosomes Transfer Among Different Species Cells and Mediating miRNAs Delivery. Journal of Cellular Biochemistry. 118 (12), 4267-4274 (2017).
  18. Arab, T., et al. Proteomic characterisation of leech microglia extracellular vesicles (EVs): comparison between differential ultracentrifugation and OptiprepTM density gradient isolation. Journal of extracellular vesicles. 8 (1), 1603048 (2019).
  19. Murgoci, A. -. N., et al. Brain-Cortex Microglia-Derived Exosomes: Nanoparticles for Glioma Therapy. ChemPhysChem. 19 (10), 1205-1214 (2018).
  20. Glebov, K., et al. Serotonin stimulates secretion of exosomes from microglia cells. Glia. 63 (4), 626-634 (2015).
  21. Hooper, C., et al. Wnt3a induces exosome secretion from primary cultured rat microglia. BMC Neuroscience. 13 (1), 144 (2012).
  22. Gabrielli, M., et al. Active endocannabinoids are secreted on extracellular membrane vesicles. EMBO reports. 16 (2), 213-220 (2015).
  23. Antonucci, F., et al. Microvesicles released from microglia stimulate synaptic activity via enhanced sphingolipid metabolism. The EMBO Journal. 31 (5), 1231-1240 (2012).
  24. Frühbeis, C., Fröhlich, D., Kuo, W. P., Krämer-Albers, E. -. M. Extracellular vesicles as mediators of neuron-glia communication. Frontiers in Cellular Neuroscience. 7, 182 (2013).
  25. Prada, I., et al. Glia-to-neuron transfer of miRNAs via extracellular vesicles: a new mechanism underlying inflammation-induced synaptic alterations. Acta neuropathologica. 135 (4), 529-550 (2018).
  26. Takenouchi, T., et al. Extracellular ATP induces unconventional release of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from microglial cells. Immunology Letters. 167 (2), 116-124 (2015).
  27. Yang, Y., Boza-Serrano, A., Dunning, C. J. R., Clausen, B. H., Lambertsen, K. L., Deierborg, T. Inflammation leads to distinct populations of extracellular vesicles from microglia. Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 168 (2018).
  28. Duhamel, M., et al. Paclitaxel Treatment and Proprotein Convertase 1/3 (PC1/3) Knockdown in Macrophages is a Promising Antiglioma Strategy as Revealed by Proteomics and Cytotoxicity Studies. Molecular & Cellular Proteomics. 17 (6), 1126-1143 (2018).
  29. Pool, M., Thiemann, J., Bar-Or, A., Fournier, A. E. NeuriteTracer: A novel ImageJ plugin for automated quantification of neurite outgrowth. Journal of Neuroscience Methods. 168 (1), 134-139 (2008).
  30. Domingues, H. S., Portugal, C. C., Socodato, R., Relvas, J. B. Oligodendrocyte, Astrocyte, and Microglia Crosstalk in Myelin Development, Damage, and Repair. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 71 (2016).
  31. Rashed, M. H., et al. Exosomes: From Garbage Bins to Promising Therapeutic Targets. Int. J. Mol. Sci. Int. J. Mol. Sci. 18 (18), (2017).
  32. Yuana, Y., Sturk, A., Nieuwland, R. Extracellular vesicles in physiological and pathological conditions. Blood Reviews. 27 (1), 31-39 (2013).
  33. Frohlich, D., et al. Multifaceted effects of oligodendroglial exosomes on neurons: impact on neuronal firing rate, signal transduction and gene regulation. Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 369 (1652), (2014).
  34. Krämer-Albers, E. -. M., et al. Oligodendrocytes secrete exosomes containing major myelin and stress-protective proteins: Trophic support for axons. Proteomics. Clinical applications. 1 (11), 1446-1461 (2007).
  35. Verderio, C., et al. Myeloid microvesicles are a marker and therapeutic target for neuroinflammation. Annals of Neurology. 72 (4), 610-624 (2012).
  36. Prada, I., Furlan, R., Matteoli, M., Verderio, C. Classical and Unconventional Pathways of Vesicular Release in Microglia. GLIA. 61, 1003-1017 (2013).
  37. Prinz, M., Priller, J. The role of peripheral immune cells in the CNS in steady state and disease. Nature Neuroscience. 20 (2), 136-144 (2017).
  38. Li, Q., Barres, B. A. Microglia and macrophages in brain homeostasis and disease. Nature Reviews Immunology. , (2017).
  39. Kennedy, B. C., et al. Tumor-Associated Macrophages in Glioma: Friend or Foe. Journal of Oncology. 2013, 1-11 (2013).
  40. Potolicchio, I., Carven, G. J., Xu, X., Stipp, C., Riese, R. J., Stern, L. J., Santambroggio, L. Proteomic Analysis of Microglia-Derived Exosomes: Metabolic Role of the Aminopeptidase CD13 in Neuropeptide Catabolism1. The Journal of Immunology. 175, 2237-2243 (2005).
  41. Turola, E., Furlan, R., Bianco, F., Matteoli, M., Verderio, C. Microglial microvesicle secretion and intercellular signaling. Frontiers in Physiology. 3, (2012).
  42. Cocucci, E., Meldolesi, J. Ectosomes and exosomes : shedding the confusion between extracellular vesicles. Trends in Cell Biology. 25 (6), 364-372 (2015).
  43. Théry, C., et al. Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines. Journal of Extracellular Vesicles. 7 (1), 1535750 (2018).
  44. de Vrij, J., et al. Glioblastoma-derived extracellular vesicles modify the phenotype of monocytic cells. International Journal of Cancer. 137 (7), 1630-1642 (2015).
  45. van der Vos, K. E., et al. Directly visualized glioblastoma-derived extracellular vesicles transfer RNA to microglia/macrophages in the brain. Neuro-Oncology. 18 (1), 58-69 (2016).

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Lemaire, Q., Duhamel, M., Raffo-Romero, A., Salzet, M., Lefebvre, C. Characterization of Immune Cell-derived Extracellular Vesicles and Studying Functional Impact on Cell Environment. J. Vis. Exp. (160), e60118, doi:10.3791/60118 (2020).
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