JoVE Journal > Neuroscience
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Neuroscience

Karakterisering af immuncelleafledte ekstracellulære vesikler og undersøgelse af funktionel indvirkning på cellemiljøet

Published: June 02, 2020
doi:
10.3791/60118
, , , ,
1U1192-Laboratoire Protéomique, Réponse Inflammatoire et Spectrométrie de Masse (PRISM),Univ. Lille, INSERM

Summary

Denne rapport fremhæver kronologiske krav til ekstracellulær vesikelisode (EV) fra mikroglia eller blodmakrofager. Mikroglia-afledte elbiler blev evalueret som regulatorer af neurite udvækst, mens blod makrofag-afledte elbiler blev undersøgt i kontrol af C6 gliom celle invasion i in vitro assays. Målet er bedre at forstå disse EV funktioner som immun mæglere i specifikke mikromiljøer.

Abstract

Den neuroinflammatoriske tilstand af centralnervesystemet (CNS) spiller en central rolle i fysiologiske og patologiske tilstand. Microglia, de hjemmehørende immunceller i hjernen, og nogle gange infiltrerende knoglemarv-afledte makrofager (BMDMs), regulere den inflammatoriske profil af deres mikromiljø i CNS. Det er nu accepteret, at den ekstracellulære vesikel (EV) populationer fra immunceller fungerer som immun mæglere. Deres indsamling og isolation er således vigtige for at identificere deres indhold, men også vurdere deres biologiske virkninger på recipientceller. De nuværende data fremhæver kronologiske krav til EV-isolering fra mikrogliaceller eller blodmakrofager, herunder trinnene ultracentrifugering og størrelsesundfadelseskromatografi (SEC). En ikke-målrettet proteomisk analyse gjorde det muligt at validere proteinsignaturer som EV-markører og karakteriserede det biologisk aktive EV-indhold. Mikroglia-afledte eldrevne køretøjer blev også funktionelt brugt på primær kultur af neuroner til at vurdere deres betydning som immun mæglere i neurite udvækst. Resultaterne viste, at mikroglia-afledte elbiler bidrager til at lette neurite udvækst in vitro. Sideløbende, blod makrofag-afledte elbiler blev funktionelt brugt som immun mæglere i sfæroide kulturer af C6 gliom celler, resultaterne viser, at disse eldrevne kontrol gliom celle invasion in vitro. Denne rapport fremhæver muligheden for at evaluere de EV-medieret immuncellefunktioner, men også forstå de molekylære baser for en sådan kommunikation. Denne dechifrering kunne fremme brugen af naturlige vesikler og/ eller in vitro forberedelse af terapeutiske vesikler med henblik på at efterligne immunegenskaber i mikromiljø af CNS patologier.

Introduction

Mange neuropatologier er relateret til neuro-inflammatorisk tilstand, som er en kompleks mekanisme, der i stigende grad betragtes, men stadig dårligt forstået, fordi immunprocesser er forskellige og afhænger af cellemiljøet. CNS-lidelserne involverer ikke systematisk de samme aktiveringssignaler og immuncellepopulationer, og derfor er de pro- eller antiinflammatoriske reaktioner vanskelige at vurdere som årsager eller konsekvenser af patologier. Hjernen hjemmehørende makrofager kaldet “microglia” synes at være på grænsefladen mellem nerve og immunforsvar1. Microglia har en myeloid oprindelse og er afledt af blommesækken under primitive hæmatopoiese at kolonisere hjernen, mens perifere makrofager er afledt af fosterleveren under endelige hæmatopoiese at blive periferemakrofager 2. Mikrogliacellerne kommunikerer med neuroner og neuron-afledte gliaceller såsom astrocytter og oligodendrocytter3. Flere nylige undersøgelser har vist, at mikroglia er involveret i neuronal plasticitet under CNS udvikling og voksne væv homøostase, og også i den inflammatoriske tilstand forbundet med neurodegenerative sygdomme4,5. Ellers, integriteten af blod-hjerne barrieren kan blive kompromitteret i andre CNS patologier. Immunresponset, især i glioblastoma multiforme kræft, understøttes ikke kun af mikroglia celler som blod-hjerne barrieren er reorganiseret gennem angiogene processer og tilstedeværelsen af lymfekar6,7. Derfor, en stor knoglemarvs-afledte makrofager (BMDMs) infiltration forekommer i hjernen tumor hele tumor-afhængige angiogenese mekanismer8. Kræftcellerne udøver en betydelig indflydelse på infiltrerede BMDM’er, der fører til immunsuppressive egenskaber og tumorvækst9. Kommunikationen mellem immuncellerne og deres mikromiljø i hjernen er således vanskelig at forstå , da celleoprindelsen og aktiveringssignalerne er forskellige10,11. Det er derfor interessant at pågribe funktionerne i immuncelle-associerede molekylære signaturer i fysiologiske tilstande. I denne forbindelse kan cellecellekommunikationen mellem immunceller og cellemikromiljø undersøges ved frigivelse af ekstracellulære vesikler.

Eldrevne køretøjer er ved at blive undersøgt mere og mere i reguleringen af immunfunktioner i sunde såvel som patologiske tilstande12,13. Der kan tages hensyn til to populationer, exosomer og mikrobønsikler. De præsenterer forskellige biogenese og størrelse intervaller. Exosomer er vesikler af ~30-150 nm diameter og genereres fra endosomalsystemet og udskilles under fusion af flervesiulære kroppe (MVBs) med plasmamembranen. Mikroblærerne er ca. 100-1.000 nm i diameter og genereres ved en udadgående spirende fra celleplasmamembranen14. Da forskelsbehandlingen af exosom versus mikrovesicle stadig er vanskelig at realisere i henhold til størrelse og molekylære mønstre, vil vi kun bruge udtrykket eldrevne køretøjer i denne rapport. Den EV-associerede kommunikation i CNS er en forfædresmekanisme,da undersøgelser viste, at de er involveret i hvirvelløse arter, herunder nematoder, insekter eller annelids15,16. Desuden viser resultaterne, der viser, at eldrevne køretøjer kan kommunikere med celler fra forskellige arter, at denne mekanisme er et nøglelåsesystem, der først er baseret på genkendelse af overflademolekyler mellem vesikler og recipientceller og derefter gør det muligt at tage mediatorer16,17. Eldrevne køretøjer indeholder mange molekyler som proteiner (f.eks. enzymer, signaltransduktion, biogenesefaktor), lipider (f.eks. ceramid, kolesterol) eller nukleinsyrer (f.eks. DNA, mRNA eller miRNAs), der fungerer som direkte eller indirekte regulatorer af modtagercelleaktiviteterne14. Derfor blev der også udført metodologiske undersøgelser af immunceller for at isolere eldrevne køretøjer og fuldt ud karakterisere deres proteinsignaturer18,19.

De tidligste undersøgelser viste frigivelsen af exosomer fra primær dyrket rottemikroglia som en inducerende mekanisme efter en Wnt3a- eller serotonin-afhængig aktivering20,21. Funktionelt i CNS, microglia-afledte elbiler regulere synaptiske vesikel frigivelse af præsynaptiske terminaler i neuroner bidrager til kontrol af neuronal ophidselse22,23. Mikroglia-afledte eldrevne køretøjer kan også udbrede cytokiner-medieret inflammatorisk respons i store hjerneregioner24,25. Vigtigere er det, de forskellige ligander for vejafgift-lignende receptor familie kan aktivere specifikke produktioner af elbiler i microglia26. For eksempel viser in vitro-undersøgelser, at LPS-aktiverede mikroglia BV2-cellelinjer producerer differentiale ev-indhold, herunder proinflammatoriske cytokiner27. Derfor kan den funktionelle mangfoldighed af immuncelledepopulationer i CNS, mikroglia og infiltrerende BMDM’er evalueres gennem deres egne EV-populationer, herunder ev-indvirkningen på recipientceller og identifikation af ev-indhold.

Vi har tidligere beskrevet metoder til at evaluere de funktionelle egenskaber af mikroglia- og BMDM-afledte elbiler efter deres isolation16,19. I denne rapport foreslår vi uafhængigt at evaluere virkningen af mikroglia-afledte eldrevne energileverandører på neuriteudvækst og virkningen af makrofagebaserede eldrevne på kontrollen af gliomcelleaggregater. Denne undersøgelse foreslår også en bred proteomisk analyse af EV-fraktionerne med henblik på at validere EV-isolationsproceduren samt identificere de biologisk aktive proteinsignaturer. De gavnlige virkninger og den molekylære dechifrering af EV indhold kunne hjælpe deres mulige manipulation og brug som terapeutiske midler i hjernesygdomme.

Protocol

1. Mikroglia/makrofagges primære kultur Mikroglias primære kultur Kultur kommerciel rotte primære mikroglia (2 x 106 celler) (se tabel over materialer) i Dulbecco modificerede Eagle medium (DMEM) suppleret med 10% exosome-fri serum, 100 U / ml penicillin, 100 μg/ml streptomycin, og 9,0 g / l glukose ved 37 C ° C ° og 5% CO2. Saml det konditionerede medium efter en 48 timers kultur og fortsæt til isolering af elbiler. </ol…

Representative Results

En af de største udfordringer ved at henføre biologiske virkninger til ekstracellulære vesikler (EL’er) er evnen til at isolere eldrevne køretøjer fra hele kulturmediet. I denne rapport præsenterer vi en metode, der anvender ultracentrifugering (UC) og størrelsesekluderingskromatografi (SEC), som er koblet til den storstilede analyse af proteinsignaturer for at validere EV-markører og identificere bioaktive forbindelser. De makrofag- eller mikrogliaafledte elbiler blev isoleret fra det konditionerede medium efter…

Discussion

Centralnervesystemet (CNS) er et komplekst væv, hvor celle-til-celle kommunikation regulerer normale neuronale funktioner, der er nødvendige for homøostase30. Eldrevne køretøjer er nu meget undersøgt og beskrevet som vigtige molekylære laster til celle-til-celle kommunikation31. De leverer specifikt en cocktail af mæglere til modtagerceller og påvirker dermed deres funktioner under sunde og patologiske forhold32. Nylige undersøgelser tyder …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Det præsenterede værk blev støttet af Ministère de L’Education Nationale, de L’Enseignement Supérieur et de la Recherche og INSERM. Vi anerkender taknemmeligt BICeL- Campus Scientific City Facility for adgang til instrumenter og teknisk rådgivning. Vi anerkender taknemmeligt Jean-Pascal Gimeno, Soulaimane Aboulouard og Isabelle Fournier for massespektrometri bistand. Vi anerkender tanina arabere, Christelle van Camp, Francoise le Marrec-Croq, Jacopo Vizioli og Pierre-Eric Sautière for deres stærke bidrag til den videnskabelige og tekniske udvikling.

Materials

12% Mini-PROTEAN TGX Precast Protein Gels Bio-rad 4561045EDU  
Acetonitrile Fisher Chemicals A955-1  
Amicon 50 kDa centrifugal filter Merck UFC505024  
Ammonium bicarbonate Sigma-Aldrich 9830  
HSP90 α/β antibody (RRID: AB_675659) Santa-cruz sc-13119  
B27 Plus supplement Gibco A3582801  
BenchMixer V2 Vortex Mixer Benchmark Scientific BV1003  
Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent Concentrate (Bradford) Bio-Rad 5000006  
C18 ZipTips Merck Millipore ZTC18S096  
C6 rat glioma cell ATCC ATCC CCL-107  
Canonical tubes Sarstedt 62.554.002  
Centrifuge Eppendorf 5804000010  
CO2 Incubator ThermoFisher    
Confocal microscope LSM880 Carl Zeiss LSM880  
Cover glass Marienfeld 111580  
Culture Dish (60 mm) Sarstedt 82.1473  
Dithiothreitol Sigma-Aldrich 43819  
DMEM Gibco 41966029  
EASY-nLC 1000 Liquid Chromatograph ThermoFisher    
Electron microscope JEM-2100 JEOL    
Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N′,N′-tetraacetic acid Sigma-Aldrich 03777-10G  
Ethylenediaminetetraacetic acid Sigma-Aldrich ED-100G  
Exo-FBS Ozyme EXO-FBS-50A-1 Exosome depleted FBS
ExoCarta database (top 100 proteins of Evs)     http://www.exocarta.org/
Fetal Bovine Serum Gibco 16140071  
Fetal Horse Serum Biowest S0960-500  
Filtropur S 0.2 Sarstedt 83.1826.001  
Fisherbrand Q500 Sonicator with Probe Fisherbrand 12893543  
FlexAnalysis Brucker    
Fluorescence mounting medium Agilent S3023  
Formic Acid Sigma-Aldrich 695076  
Formvar-carbon coated copper grids Agar scientific Ltd AGS162-3  
Glucose Sigma-Aldrich G8769  
Glutaraldehyde Sigma-Aldrich 340855  
Hoechst 33342 Euromedex 17535-AAT  
Idoacetamide Sigma-Aldrich I1149  
InstantBlue Coomassie Protein Stain Expedeon ISB1L  
Invert light microscope CKX53 Olympus    
L-glutamine Gibco 25030-024  
LabTek II 8 wells  Nunc 154534  
Laemmli 2X Bio-Rad 1610737  
Laminin Corning 354232  
MaxQuant software (proteins identification software)     https://maxquant.net/maxquant/
MBT Polish stell Brucker 8268711  
MEM 10X Gibco 21090-022  
Methylcellulose Sigma-Aldrich M6385-100G  
MiliQ water Merck Millipore    
Milk Regilait REGILAIT300  
Mini PROTEAN Vertical Electrophoresis Cell Bio-Rad 1658000FC  
MonoP FPLC column GE Healthcare   no longer available
Nanosight NS300 Malvern Panalytical NS300  
NanoSight NTA software v3.2 Malvern Panalytical    
NanoSight syringe pump Malvern Panalytical    
Neurobasal Gibco 21103-049  
Nitrocellulose membrane GE Healthcare 10600007  
Nonidet P-40 Fluka 56741  
Nunc multidish 24 wells ThermoFisher 82.1473  
Paraformaldehyde Electro microscopy Science 15713  
PC-12 cell line ATCC ATCC CRL-1721  
Penicillin-Streptomycin Gibco 15140-122  
Peptide calibration mix LaserBio Labs C101  
Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) Jackson ImmunoResearch 115-035-003  
Perseus software (Processing of identified proteins)     https://maxquant.net/perseus/
Phalloidin-tetramethylrhodamine conjugate Santa-cruz sc-362065  
Phenylmethanesulfonyl fluoride Sigma-Aldrich 78830  
Phosphate Buffer Saline Invitrogen 14190094 no calcium, no magnesium
pluriStrainer M/ 60 µm pluriSelect 43-50060  
Poly-D-lysine Sigma-Aldrich P6407  
Polycarbonate centrifuge tubes Beckman Coulter 355651  
Protease Inhibitor Sigma-Aldrich S8830-20TAB  
PureCol Cell Systems 5005  
Q-Exactive mass spectrometer ThermoFisher    
rapifleX mass spectrometer Brucker    
Rat cortical neurons Cell Applications R882N-20 Cell origin : Derived from cerebral cortices of day 18 embryonic Sprague Dawley rat brains
Rat Macrophage & Microglia Culture Medium Cell Applications R620K-100 Cell orgin : Normal healthy Rat bone marrow
Rat primary macrophages Cell Applications R8818-10a  
Rat primary microglia Lonza RG535  
Sepharose CL-2B GE Healthcare 17014001  
Sequencing Grade Modified Trypsin Promega V5111  
Slide Dustsher 100204  
Sodium Chloride Scharlau SO0227  
Sodium Dodecyl Sulfate Sigma-Aldrich L3771  
Sodium Fluoride Sigma-Aldrich S7920-100G  
Sodium hydroxide Scharlab SO0420005P  
Sodium pyrophosphate Sigma-Aldrich S6422-100G  
SpeedVac Vacuum Concentrator ThermoFisher    
String software (functional protein association networks)     https://string-db.org/
SuperSignal West Dura extended Duration Substrate ThermoFisher 34075  
Syringe 1.0 mL Terumo 8SS01H1  
Trans-Blot SD Semi-Dry Transfer cell Bio-Rad 1703940  
Trifluoroacetic acid Sigma-Aldrich T6508  
Tris Interchim UP031657  
Tris-Glycine Euromedex EU0550  
Tween 20 Sigma-Aldrich P2287  
Ultracentrifuge Beckman Coulter A95765  
Ultracentrifuge Rotor 70.1 Ti Beckman Coulter 342184  
Uranyl acetate Agar Scientific Ltd AGR1260A  
Whatman filter paper Sigma-Aldrich WHA10347510  
α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid Sigma-Aldrich C2020-25G  
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Thion, M. S., Ginhoux, F., Garel, S. Microglia and early brain development: An intimate journey. Science. 362 (6411), 185-189 (2018).
  2. Ginhoux, F., et al. Fate mapping analysis reveals that adult microglia derive from primitive macrophages. Science. 330 (6005), 841-845 (2010).
  3. Sankowski, R., Mader, S., Valdes-Ferrer, S. I. Systemic Inflammation and the Brain: Novel Roles of Genetic, Molecular, and Environmental Cues as Drivers of Neurodegeneration. Frontiers in Cellular Neuroscience. 9, (2015).
  4. Chakrabarty, S., Kabekkodu, S. P., Singh, R. P., Thangaraj, K., Singh, K. K., Satyamoorthy, K. Microglia in health and disease. Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 43 (3), 25-29 (2015).
  5. Sankowski, R., Mader, S., Valdés-Ferrer, S. I. Systemic inflammation and the brain: novel roles of genetic, molecular, and environmental cues as drivers of neurodegeneration. Frontiers in cellular neuroscience. 9, 28 (2015).
  6. Engelhardt, B., Vajkoczy, P., Weller, R. O. The movers and shapers in immune privilege of the CNS. Nature Immunology. 18 (2), 123-131 (2017).
  7. Louveau, A., et al. Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels. Nature. 523 (7560), 337-341 (2015).
  8. Domingues, P., et al. Tumor infiltrating immune cells in gliomas and meningiomas. Brain, Behavior, and Immunity. 53, 1-15 (2016).
  9. Hambardzumyan, D., Gutmann, D. H., Kettenmann, H. The role of microglia and macrophages in glioma maintenance and progression. Nature Neuroscience. 19 (1), 20-27 (2016).
  10. Thion, M. S., et al. Microbiome Influences Prenatal and Adult Microglia in a Sex-Specific Manner. Cell. 172 (3), 500-516 (2018).
  11. Hammond, T. R., et al. Single-Cell RNA Sequencing of Microglia throughout the Mouse Lifespan and in the Injured Brain Reveals Complex Cell-State Changes. Immunity. 50 (1), 253-271 (2019).
  12. Rajendran, L., et al. Emerging Roles of Extracellular Vesicles in the Nervous System. The Journal of Neuroscience. 34 (46), 15482-15489 (2014).
  13. Gupta, A., Pulliam, L. Exosomes as mediators of neuroinflammation. Journal of Neuroinflammation. 11 (1), 68 (2014).
  14. van Niel, G., D’Angelo, G., Raposo, G. Shedding light on the cell biology of extracellular vesicles. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 19 (4), 213-228 (2018).
  15. Budnik, V., Ruiz-cañada, C., Wendler, F. Extracellular vesicles round off communication in the nervous system. Nature Reviews Neurosciences. 17, 160-172 (2016).
  16. Raffo-Romero, A., et al. Medicinal Leech CNS as a Model for Exosome Studies in the Crosstalk between Microglia and Neurons. International Journal of Molecular Sciences. 19 (12), 4124 (2018).
  17. Zhou, Y., et al. Exosomes Transfer Among Different Species Cells and Mediating miRNAs Delivery. Journal of Cellular Biochemistry. 118 (12), 4267-4274 (2017).
  18. Arab, T., et al. Proteomic characterisation of leech microglia extracellular vesicles (EVs): comparison between differential ultracentrifugation and OptiprepTM density gradient isolation. Journal of extracellular vesicles. 8 (1), 1603048 (2019).
  19. Murgoci, A. -. N., et al. Brain-Cortex Microglia-Derived Exosomes: Nanoparticles for Glioma Therapy. ChemPhysChem. 19 (10), 1205-1214 (2018).
  20. Glebov, K., et al. Serotonin stimulates secretion of exosomes from microglia cells. Glia. 63 (4), 626-634 (2015).
  21. Hooper, C., et al. Wnt3a induces exosome secretion from primary cultured rat microglia. BMC Neuroscience. 13 (1), 144 (2012).
  22. Gabrielli, M., et al. Active endocannabinoids are secreted on extracellular membrane vesicles. EMBO reports. 16 (2), 213-220 (2015).
  23. Antonucci, F., et al. Microvesicles released from microglia stimulate synaptic activity via enhanced sphingolipid metabolism. The EMBO Journal. 31 (5), 1231-1240 (2012).
  24. Frühbeis, C., Fröhlich, D., Kuo, W. P., Krämer-Albers, E. -. M. Extracellular vesicles as mediators of neuron-glia communication. Frontiers in Cellular Neuroscience. 7, 182 (2013).
  25. Prada, I., et al. Glia-to-neuron transfer of miRNAs via extracellular vesicles: a new mechanism underlying inflammation-induced synaptic alterations. Acta neuropathologica. 135 (4), 529-550 (2018).
  26. Takenouchi, T., et al. Extracellular ATP induces unconventional release of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from microglial cells. Immunology Letters. 167 (2), 116-124 (2015).
  27. Yang, Y., Boza-Serrano, A., Dunning, C. J. R., Clausen, B. H., Lambertsen, K. L., Deierborg, T. Inflammation leads to distinct populations of extracellular vesicles from microglia. Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 168 (2018).
  28. Duhamel, M., et al. Paclitaxel Treatment and Proprotein Convertase 1/3 (PC1/3) Knockdown in Macrophages is a Promising Antiglioma Strategy as Revealed by Proteomics and Cytotoxicity Studies. Molecular & Cellular Proteomics. 17 (6), 1126-1143 (2018).
  29. Pool, M., Thiemann, J., Bar-Or, A., Fournier, A. E. NeuriteTracer: A novel ImageJ plugin for automated quantification of neurite outgrowth. Journal of Neuroscience Methods. 168 (1), 134-139 (2008).
  30. Domingues, H. S., Portugal, C. C., Socodato, R., Relvas, J. B. Oligodendrocyte, Astrocyte, and Microglia Crosstalk in Myelin Development, Damage, and Repair. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 71 (2016).
  31. Rashed, M. H., et al. Exosomes: From Garbage Bins to Promising Therapeutic Targets. Int. J. Mol. Sci. Int. J. Mol. Sci. 18 (18), (2017).
  32. Yuana, Y., Sturk, A., Nieuwland, R. Extracellular vesicles in physiological and pathological conditions. Blood Reviews. 27 (1), 31-39 (2013).
  33. Frohlich, D., et al. Multifaceted effects of oligodendroglial exosomes on neurons: impact on neuronal firing rate, signal transduction and gene regulation. Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 369 (1652), (2014).
  34. Krämer-Albers, E. -. M., et al. Oligodendrocytes secrete exosomes containing major myelin and stress-protective proteins: Trophic support for axons. Proteomics. Clinical applications. 1 (11), 1446-1461 (2007).
  35. Verderio, C., et al. Myeloid microvesicles are a marker and therapeutic target for neuroinflammation. Annals of Neurology. 72 (4), 610-624 (2012).
  36. Prada, I., Furlan, R., Matteoli, M., Verderio, C. Classical and Unconventional Pathways of Vesicular Release in Microglia. GLIA. 61, 1003-1017 (2013).
  37. Prinz, M., Priller, J. The role of peripheral immune cells in the CNS in steady state and disease. Nature Neuroscience. 20 (2), 136-144 (2017).
  38. Li, Q., Barres, B. A. Microglia and macrophages in brain homeostasis and disease. Nature Reviews Immunology. , (2017).
  39. Kennedy, B. C., et al. Tumor-Associated Macrophages in Glioma: Friend or Foe. Journal of Oncology. 2013, 1-11 (2013).
  40. Potolicchio, I., Carven, G. J., Xu, X., Stipp, C., Riese, R. J., Stern, L. J., Santambroggio, L. Proteomic Analysis of Microglia-Derived Exosomes: Metabolic Role of the Aminopeptidase CD13 in Neuropeptide Catabolism1. The Journal of Immunology. 175, 2237-2243 (2005).
  41. Turola, E., Furlan, R., Bianco, F., Matteoli, M., Verderio, C. Microglial microvesicle secretion and intercellular signaling. Frontiers in Physiology. 3, (2012).
  42. Cocucci, E., Meldolesi, J. Ectosomes and exosomes : shedding the confusion between extracellular vesicles. Trends in Cell Biology. 25 (6), 364-372 (2015).
  43. Théry, C., et al. Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines. Journal of Extracellular Vesicles. 7 (1), 1535750 (2018).
  44. de Vrij, J., et al. Glioblastoma-derived extracellular vesicles modify the phenotype of monocytic cells. International Journal of Cancer. 137 (7), 1630-1642 (2015).
  45. van der Vos, K. E., et al. Directly visualized glioblastoma-derived extracellular vesicles transfer RNA to microglia/macrophages in the brain. Neuro-Oncology. 18 (1), 58-69 (2016).

Tags

Keywords: Extracellular VesiclesEV IsolationSize Exclusion ChromatographyNanoparticle Tracking AnalysisMass SpectrometryMicrogliaMacrophageCell CultureCharacterization
check_url/60118?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Lemaire, Q., Duhamel, M., Raffo-Romero, A., Salzet, M., Lefebvre, C. Characterization of Immune Cell-derived Extracellular Vesicles and Studying Functional Impact on Cell Environment. J. Vis. Exp. (160), e60118, doi:10.3791/60118 (2020).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image