在小鼠中进行结肠镜引导捏活检并评估后续组织变化
Summary
在这里，我们提供了一个详细的程序，诱导小鼠结肠镜引导捏活检和跟踪伤口关闭的实时程序。此外，还提供了组织准备方法，用于对伤口床进行组织学、免疫组织化学和分子分析。
Abstract
在研究胃肠道 （GI） 疾病时，了解急性损伤反应中以及伤口愈合过程中发生的组织和细胞变化至关重要。穆林结肠捏活检模型是定义这些过程的有用工具。此外，还可以研究肠道发光成分（例如微生物）和结肠之间的相互作用。然而，伤口感应和以可靠方式跟踪伤口闭合的能力可能具有挑战性。此外，组织准备和定向必须以标准化的方式进行，以最佳地询问组织学和分子变化。在这里，我们提出了一个详细的方法，描述活检引起的伤害和通过重复结肠镜检查伤口封闭的监测。描述的方法，确保伤口大小的一致和可重复的测量，收集伤口床进行分子分析的能力，以及在组织分割时可视化伤口床。成功实施这些技术的能力允许研究结肠内的急性损伤反应、伤口愈合和发光宿主相互作用。
Introduction
胃肠道 （GI） 是一个复杂的器官系统，具有多种功能、宿主细胞类型（如上皮、免疫、频闪等）以及数万亿种微生物。鉴于这种复杂性，胃肠道疾病往往涉及所有这些因素的相互作用。例如，炎症性肠道疾病 （IBD） 与 GI 肠道的炎症和缓解周期有关，涉及炎症细胞的激活、消化不良和上皮修复 1、2、3、4、5、6、7。拥有适当的模型系统来研究IBD和胃肠道的其他炎症状况对于阐明疾病的发病机制至关重要。有几个模型存在研究IBD发病机制，包括基因工程小鼠和使用化学品，如硫酸钠（DSS）在啮齿动物8，9，10。这些模型的局限性包括无法精确控制炎症的诱导以及评估伤口愈合的困难。模仿IBD发病机制的替代方法可能证明对开发疗法有用。
小鼠的结肠镜引导捏活检提供了一个有用的模型系统，用于研究炎症反应的发病机制、伤口愈合以及结肠中的宿主-微生物相互作用。这种方法在2009年首次被用作实验工具，它证明了它对研究肠道11中急性炎症反应和伤口愈合的功用。随后的研究利用这项技术来评估不同的信号通路以及肠道微生物群的作用，在结肠伤口愈合11，12，13，14，15，16，17，18。最近，我们小组利用这个模型来研究辛诺辛-1-磷酸盐信号和细菌在对结肠损伤的急性反应中的重要性。虽然有用，在小鼠身上进行结肠镜引导捏活检和评估随后的组织变化在技术上可能具有挑战性。例如，肠穿孔在诱发损伤时可能发生，通过连续结肠镜检查确保伤口床的一致测量可能很困难。此外，正确定位结肠组织以可视化伤口床进行组织学或免疫组织化学分析可能具有挑战性。虽然确实存在一些有关这些方法的信息18，20，但这些技术的精确步骤描述将视觉辅助承诺提高这种模型的可靠性和更广泛的效用。在这里，我们提出了一个详细的方法，在小鼠进行结肠镜引导捏活检，跟踪伤口闭合随着时间的推移，并准备组织，使组织，使组织和分子分析的伤口床。创建执行这些技术的标准方法可以扩展此模型的使用范围，以研究以前未经调查的调解人，这些调解员对 GI 炎症和伤口修复具有潜在的重要性。
Protocol
Representative Results
Discussion
在尝试有效评估此模型中的伤口闭合率时，确保一致和准确的活检以及伤口大小的测量至关重要。因此，应采取若干措施，确保程序得到正确执行。首先，活检的深度不能太浅或太深。如果太浅，将没有足够的窗口来评估伤口关闭。 图 2 显示第 0 天的最佳活检深度和大小。注意伤口床周围的粘膜和伤口床下残留的组织之间的明显区别（图2）。如果活?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作得到了克罗恩和结肠炎基金会（D.C.M）和纽约克罗恩基金会（D.C.M和A.J.D.）的资助。作者感谢卡门·费拉拉女士为本文制作视频伴奏的帮助。
Materials
| Biopsy forceps, 3 Fr | Karl Storz | 61071ZJ | |
| Coloview Tower system | Karl Storz | contact company | |
| Examination sheath, 9 Fr, Kit | Karl Storz | 61029DK | |
| Hopkins telescope, 0', 1.9 mm x 10 cm | Karl Storz | 64301AA | |
| isofluorane | Covetrus | 2905 | |
| methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| micro iris scissors | Integra | 18-1619 | |
| NIH ImageJ | NIH | N/A | software available for free download from: https://imagej.nih.gov/ij/ |
| Pawfly MA-60 aquarium pump | Amazon | N/A | |
| scalpal with #10 blade | Hill-Rom | 372610 |
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