चूहों में कोलोनोस्कोपिक-गाइडेड पिंच बायोप्सी का प्रदर्शन करना और बाद में ऊतक परिवर्तन का मूल्यांकन करना
Summary
यहां, हम चूहों में कोलोनोस्कोपिक-निर्देशित चुटकी बायोप्सी को प्रेरित करने और वास्तविक समय में घाव बंद करने को ट्रैक करने के लिए प्रक्रिया का विस्तृत विवरण प्रदान करते हैं। इसके अतिरिक्त, घाव बिस्तर के हिस्टोलॉजिकल, इम्यूनोहिस्टोकेमिकल और आणविक विश्लेषण के लिए ऊतकों की तैयारी के तरीके प्रदान किए जाते हैं।
Abstract
तीव्र चोट प्रतिक्रिया के साथ-साथ घाव भरने की प्रक्रिया के दौरान होने वाले ऊतक और सेलुलर परिवर्तनों को समझना गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल (जीआई) पथ के रोगों का अध्ययन करते समय सर्वोपरि महत्व का है। मुरीन कोलोनिक पिंच बायोप्सी मॉडल इन प्रक्रियाओं को परिभाषित करने के लिए एक उपयोगी उपकरण है। इसके अतिरिक्त, आंत चमकदार सामग्री (जैसे, रोगाणुओं) और पेट के बीच परस्पर क्रिया का अध्ययन किया जा सकता है। हालांकि, घाव प्रेरण और विश्वसनीय तरीके से समय के साथ घाव बंद करने को ट्रैक करने की क्षमता चुनौतीपूर्ण हो सकती है। इसके अलावा, ऊतक की तैयारी और अभिविन्यास को एक मानकीकृत तरीके से किया जाना चाहिए ताकि हिस्टोलॉजिक और आणविक परिवर्तनों से बेहतर ढंग से पूछताछ की जा सके। यहां, हम बायोप्सी-प्रेरित चोट और दोहराने कोलोनोस्कोपी के माध्यम से घाव बंद करने की निगरानी का वर्णन करने वाली एक विस्तृत विधि प्रस्तुत करते हैं। एक दृष्टिकोण वर्णित है कि घाव के आकार के सुसंगत और प्रजनन माप सुनिश्चित करता है, आणविक विश्लेषण के लिए घाव बिस्तर इकट्ठा करने की क्षमता के रूप में के रूप में अच्छी तरह से ऊतकों की धारा पर घाव बिस्तर कल्पना । इन तकनीकों को सफलतापूर्वक पूरा करने की क्षमता कोलन के भीतर तीव्र चोट प्रतिक्रिया, घाव भरने और चमकदार-मेजबान बातचीत के अध्ययन के लिए अनुमति देती है।
Introduction
गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल (जीआई) पथ एक जटिल अंग प्रणाली है जो इसके कई कार्यों, मेजबान सेल प्रकार (जैसे एपिथेलियल, प्रतिरक्षा, स्ट्रोमल, आदि) के साथ-साथ खरबों रोगाणुओं को देखते हुए है। इस जटिलता के प्रकाश में, जीआई पथ की बीमारियों में अक्सर इन सभी कारकों का परस्पर क्रिया शामिल होता है। उदाहरण के लिए, भड़काऊ आंत्र रोग (आईबीडी) जीआई पथ में सूजन और छूट के चक्रों से जुड़े होते हैं, जिसमें भड़काऊ कोशिकाओं, डिस्बायोसिस और एपिथेलियल रिपेयर1,2,3,4,5,6, 7की सक्रियता शामिल होती है। रोग के रोगजनकों को स्पष्ट करने के लिए आईबीडी और जीआई पथ की अन्य भड़काऊ स्थितियों का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त मॉडल सिस्टम होना महत्वपूर्ण है। आनुवंशिक रूप से इंजीनियर चूहों और कृंतक8,9,10में डेक्सट्रान सोडियम सल्फेट (डीएसएस) जैसे रसायनों के उपयोग सहित आईबीडी रोगजनकों का अध्ययन करनेकेलिए कई मॉडल मौजूद हैं। इन मॉडलों की सीमाओं में सूजन के प्रेरण को ठीक से नियंत्रित करने के साथ-साथ घाव भरने के मूल्यांकन में कठिनाइयों को ठीक से नियंत्रित करने में असमर्थता शामिल है। आईबीडी रोगजनकों के पहलुओं की नकल करने के लिए वैकल्पिक तरीके चिकित्सा के विकास के लिए उपयोगी साबित हो सकते हैं।
चूहों में कोलोनोस्कोपिक-निर्देशित चुटकी बायोप्सी भड़काऊ प्रतिक्रिया, घाव भरने, साथ ही पेट में मेजबान-माइक्रोब इंटरैक्शन के रोगजनन का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी मॉडल प्रणाली प्रदान करती है। इस दृष्टिकोण को पहली बार 2009 में एक प्रयोगात्मक उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया गया था, जिसने आंत11में तीव्र भड़काऊ प्रतिक्रिया और घाव भरने का अध्ययन करने के लिए अपनी उपयोगिता का प्रदर्शन किया था। बाद के अध्ययनों में इस तकनीक का उपयोग उपनिवेशीय घाव उपचार 11 ,12 , 13 , 14,15,16 , 17,18में विभिन्न सिग्नलिंग रास्तों के साथ -साथ आंत माइक्रोबायोटा की भूमिकाओं का मूल्यांकन करनेकेलिए किया गया । हाल ही में, हमारे समूह ने इस मॉडल का उपयोग उपनिवेश चोट19के तीव्र प्रतिक्रिया में स्पिफिंगोसाइन-1-फॉस्फेट सिग्नलिंग और बैक्टीरिया के महत्व की जांच करने के लिए किया। हालांकि उपयोगी, चूहों में कोलोनोस्कोपिक-निर्देशित चुटकी बायोप्सी बाहर ले जाने और बाद में ऊतक परिवर्तन का मूल्यांकन तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण हो सकता है। उदाहरण के लिए, चोट के शामिल होने पर आंत्र का छिद्र हो सकता है और सीरियल कोलोनोस्कोपी के माध्यम से घाव बिस्तर के लगातार माप सुनिश्चित करना मुश्किल हो सकता है। इसके अतिरिक्त, हिस्टोलॉजिकल या इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण के लिए घाव बिस्तर की कल्पना करने के लिए कोलोनिक ऊतक को ठीक से उन्मुख करना चुनौतीपूर्ण हो सकता है। यद्यपि इन तरीकों18,20के बारे में कुछ जानकारी मौजूद है, इन तकनीकों का एक सटीक चरण-वार विवरण दृश्य एड्स इस मॉडल की विश्वसनीयता और व्यापक उपयोगिता को बढ़ाने का वादा करता है। यहां, हम चूहों में कोलोनोस्कोपिक-निर्देशित चुटकी बायोप्सी करने के लिए एक विस्तृत विधि प्रस्तुत करते हैं, समय के साथ घाव बंद करने को ट्रैक करते हैं और घाव बिस्तर के हिस्टोलॉजिक और आणविक विश्लेषण को सक्षम करने के लिए ऊतक तैयार करते हैं। इन तकनीकों को पूरा करने के लिए एक मानक विधि बनाना इस मॉडल के उपयोग का विस्तार कर सकता है जो पहले से जांच किए गए मध्यस्थों का अध्ययन कर सकते हैं जो जीआई सूजन और घाव की मरम्मत के लिए संभावित रूप से महत्वपूर्ण हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस मॉडल में घाव बंद करने की दर का प्रभावी ढंग से मूल्यांकन करने का प्रयास करते समय लगातार और सटीक बायोप्सी के साथ-साथ घाव के आकार के माप को सुनिश्चित करना सर्वोपरि महत्व का है। इसलिए, इस बात को लेकर कई उप?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को क्रोन और कोलाइटिस फाउंडेशन (डी.C.M) और न्यूयॉर्क क्रोन के फाउंडेशन (डी.C.M और ए.जे.डी. के अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था।) लेखक इस लेख के लिए वीडियो संगत बनाने के साथ सहायता के लिए सुश्री कारमेन फेरारा का शुक्रिया अदा करते हैं ।
Materials
| Biopsy forceps, 3 Fr | Karl Storz | 61071ZJ | |
| Coloview Tower system | Karl Storz | contact company | |
| Examination sheath, 9 Fr, Kit | Karl Storz | 61029DK | |
| Hopkins telescope, 0', 1.9 mm x 10 cm | Karl Storz | 64301AA | |
| isofluorane | Covetrus | 2905 | |
| methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| micro iris scissors | Integra | 18-1619 | |
| NIH ImageJ | NIH | N/A | software available for free download from: https://imagej.nih.gov/ij/ |
| Pawfly MA-60 aquarium pump | Amazon | N/A | |
| scalpal with #10 blade | Hill-Rom | 372610 |
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