مراقبة النمو الديناميكي لأوعية الشبكية في نموذج فأر اعتلال الشبكية الناجم عن الأكسجين
Summary
يصف هذا البروتوكول طريقة مفصلة لإعداد وتلطيخ التألق المناعي للحوامل المسطحة لشبكية العين لدى الفئران وتحليلها. يتم وصف استخدام تصوير الأوعية الدموية قاع العين بالفلوريسين (FFA) لجراء الفئران ومعالجة الصور بالتفصيل أيضا.
Abstract
يستخدم اعتلال الشبكية الناجم عن الأكسجين (OIR) على نطاق واسع لدراسة نمو الأوعية غير الطبيعي في أمراض الشبكية الإقفارية، بما في ذلك اعتلال الشبكية الخداجي (ROP)، واعتلال الشبكية السكري التكاثري (PDR)، وانسداد الوريد الشبكي (RVO). معظم دراسات OIR تلاحظ الأوعية الدموية الجديدة في شبكية العين في نقاط زمنية محددة. ومع ذلك ، فإن نمو الأوعية الديناميكي في الفئران الحية على طول مسار زمني ، وهو أمر ضروري لفهم أمراض الأوعية المرتبطة ب OIR ، لم تتم دراسته بشكل كاف. هنا ، نصف بروتوكولا خطوة بخطوة لتحريض نموذج الماوس OIR ، مع تسليط الضوء على المزالق المحتملة ، وتوفير طريقة محسنة لتحديد مناطق طمس الأوعية (VO) والأوعية الدموية الجديدة (NV) بسرعة باستخدام تلطيخ التألق المناعي. الأهم من ذلك ، قمنا بمراقبة إعادة نمو الأوعية في الفئران الحية من P15 إلى P25 عن طريق إجراء تصوير الأوعية الدموية قاع العين بالفلوريسين (FFA) في نموذج فأر OIR. يسمح لنا تطبيق FFA على نموذج الماوس OIR بمراقبة عملية إعادة التشكيل أثناء إعادة نمو السفينة.
Introduction
عادة ما تمتد الأوعية الدموية الجديدة في الشبكية (RNV)، والتي تعرف بأنها حالة تنشأ فيها أوعية مرضية جديدة من الأوردة الشبكية الموجودة، على طول السطح الداخلي للشبكية وتنمو في الجسم الزجاجي (أو الفضاء تحت الشبكية في ظل بعض الظروف)1. وهو سمة مميزة وسمة مشتركة للعديد من اعتلالات الشبكية الإقفارية، بما في ذلك اعتلال الشبكية الخداجي (ROP)، وانسداد الوريد الشبكي (RVO)، واعتلال الشبكية السكري التكاثري (PDR)2.
أشارت العديد من الملاحظات السريرية والتجريبية إلى أن نقص التروية هو السبب الرئيسي لتوسع الأوعية الدموية الجديدة في الشبكية 3,4. في شرطة عمان السلطانية، يتعرض حديثي الولادة لأكسجين عالي المستوى في حاضنات مغلقة لزيادة معدلات البقاء على قيد الحياة، وهو أيضا محرك مهم لوقف نمو الأوعية الدموية. بعد الانتهاء من العلاج ، تعاني شبكية العين من الأطفال حديثي الولادة من فترة نقص الأكسجة نسبيا5. وينظر إلى حالات أخرى في انسداد الأوردة الشبكية المركزية أو الفرعية في RVO ويلاحظ أيضا تلف الشعيرات الدموية في الشبكية الذي يسببه اعتلال الأوعية الدقيقة في PDR2. يزيد نقص الأكسجة من التعبير عن العوامل الوعائية المنشأ مثل عامل النمو البطاني الوعائي (VEGF) من خلال مسار إشارات العامل الناجم عن نقص الأكسجة -1α (HIF-1α) والذي بدوره يوجه الخلايا البطانية الوعائية للنمو في منطقة نقص الأكسجة وتشكيل أوعية جديدة 6,7.
ROP هو نوع من اعتلال الشبكية التكاثري الوعائي عند الأطفال الخدج وسبب رئيسي لعمى الأطفال8,9 ، والذي يتميز بنقص الأكسجة في الشبكية ، والأوعية الدموية الجديدة في الشبكية وتضخم التنسج الليفي10,11,12. في 1950s ، وجد الباحثون أن التركيز العالي للأكسجين يمكن أن يحسن بشكل كبير الأعراض التنفسية للأطفال الخدج13,14. ونتيجة لذلك ، تم استخدام العلاج بالأكسجين بشكل متزايد في الأطفال الخدج في ذلك الوقت15. ومع ذلك ، بالتزامن مع الاستخدام الواسع النطاق للعلاج بالأكسجين في الأطفال الخدج ، زاد حدوث ROP عاما بعد عام. ومنذ ذلك الحين، ربط الباحثون الأكسجين بشرطة عمان السلطانية، مستكشفين نماذج حيوانية مختلفة لفهم التسبب في ROP و RNV16.
في الإنسان ، يتم الانتهاء من معظم تطوير الأوعية الدموية في الشبكية قبل الولادة بينما في القوارض تتطور الأوعية الدموية الشبكية بعد الولادة ، مما يوفر نظاما نموذجيا يمكن الوصول إليه لدراسة تكوين الأوعية الدموية في الأوعية الدموية الشبكية2. مع التقدم المستمر للبحث ، أصبحت نماذج اعتلال الشبكية الناجم عن الأكسجين (OIR) نماذج رئيسية لمحاكاة تولد الأوعية الدموية المرضية الناتجة عن نقص التروية. لا توجد أنواع حيوانية محددة في دراسة نموذج OIR وقد تم تطوير النموذج في أنواع حيوانية مختلفة ، بما في ذلك القطالصغير 17 ، والفئران18 ، والفأر19 ، وجرو البيجل20 ، والزرد21. تشترك جميع النماذج في نفس الآلية التي تتعرض من خلالها لفرط التأكسج أثناء تطور الشبكية المبكر ثم تعود إلى البيئة المعيارية. لاحظ سميث وآخرون أن تعريض الجراء الفئران لفرط التأكسج من P7 لمدة 5 أيام أدى إلى شكل متطرف من انحدار الأوعية الدموية في شبكية العين المركزية وإعادتها إلى هواء الغرفة في P12 أدى تدريجيا إلى خصلات الأوعية الدموية الجديدة ، والتي نمت نحو الجسم الزجاجي19. كان هذا نموذج ماوس OIR موحد يسمى أيضا نموذج سميث. وقام كونور وآخرون بتحسين البروتوكول وقدموا طريقة قابلة للتطبيق عالميا لتحديد مساحة VO (طمس الأوعية) و NV (الأوعية الدموية الجديدة) في عام 2009 ، مما زاد من قبول واستخدام النموذج22. لا يزال نموذج الماوس OIR هو النموذج الأكثر استخداما على نطاق واسع الآن بسبب صغر حجمه ، وتكاثره السريع ، وخلفيته الوراثية الواضحة ، وقابليته للتكرار الجيد ، ومعدل نجاحه العالي.
في الفئران ، تبدأ الأوعية الدموية في الشبكية بعد الولادة مع نمو الأوعية من رأس العصب البصري إلى شبكية العين الداخلية نحو أورا سيراتا. أثناء نمو الشبكية الطبيعي، تنبت الأوعية الشبكية الأولى من رأس العصب البصري حول الولادة، وتشكل شبكة موسعة (الضفيرة الأولية) التي تصل إلى المحيط حول يوم ما بعد الولادة 7 (P7)23. ثم تبدأ الأوعية في النمو في شبكية العين لتشكيل طبقة عميقة ، واختراق شبكية العين ، وإنشاء شبكة صفائحية حول الطبقة النووية الداخلية (INL) كما هو الحال في الإنسان24. بحلول نهاية الأسبوع الثالث بعد الولادة (P21) ، اكتمل تقريبا تطور الضفيرة الأعمق. بالنسبة لنموذج الماوس OIR ، يظهر انسداد الأوعية الدموية دائما في شبكية العين المركزية بسبب الانحطاط السريع لعدد كبير من شبكات الأوعية الدموية غير الناضجة في المنطقة الوسطى أثناء التعرض لفرط التأكسج. لذلك ، يحدث نمو الأوعية الدموية الجديدة المرضية أيضا في شبكية العين المحيطية الوسطى ، وهي حدود المنطقة غير التروية ومنطقة الأوعية الدموية. ومع ذلك ، فقد تشكلت أوعية الشبكية البشرية تقريبا قبل الولادة. أما بالنسبة للأطفال الخدج، فإن شبكية العين الطرفية ليست وعائية بالكامل عند تعرضها لفرط التأكسج25,26. لذلك يظهر انسداد الأوعية الدموية والأوعية الدموية الجديدة بشكل رئيسي في شبكية العين الطرفية27,28. على الرغم من هذه الاختلافات ، فإن نموذج OIR للفأر يلخص عن كثب الأحداث المرضية التي تحدث أثناء الأوعية الدموية الجديدة الناجمة عن نقص التروية.
يمكن تقسيم تحريض نموذج OIR إلى مرحلتين29: في المرحلة 1 (مرحلة فرط التأكسج) ، يتم إيقاف نمو الأوعية الدموية في شبكية العين أو تخلفه مع انسداد وانحدار الأوعية الدموية نتيجة لانخفاض VEGF وموت الخلايا المبرمج للخلايا البطانية 24,30 ؛ في المرحلة 2 (مرحلة نقص الأكسجة) ، ستصبح إمدادات الأكسجين في شبكية العين غير كافية في ظل ظروف هواء الغرفة29 ، وهو أمر ضروري للنمو العصبي والتوازن 19,31. عادة ما يؤدي هذا الوضع الإقفاري إلى توسع الأوعية الدموية الجديدة غير المنظم وغير الطبيعي.
حاليا ، طريقة النمذجة شائعة الاستخدام هي بالتناوب بين التعرض العالي / المنخفض للأكسجين: تتعرض الأمهات وصغارهن للأكسجين بنسبة 75٪ لمدة 5 أيام في P7 تليها 5 أيام في هواء الغرفة حتى أظهر P17 نتائج مماثلة22 ، وهي نقطة النهاية لتحريض نموذج الماوس OIR. (الشكل 1). بالإضافة إلى محاكاة ROP ، يمكن أيضا استخدام هذا التنسيب المرضي بوساطة نقص التروية لدراسة أمراض الشبكية الإقفارية الأخرى. تشمل القياسات الرئيسية لهذا النموذج تحديد مساحة VO و NV ، والتي يتم تحليلها من حوامل مسطحة في الشبكية عن طريق تلطيخ التألق المناعي أو تروية FITC-dextran. يمكن دراسة كل فأر مرة واحدة فقط بسبب العملية المميتة. في الوقت الحاضر ، هناك طرق قليلة لمراقبة التغيرات الديناميكية للأوعية الدموية في الشبكية بشكل مستمر أثناء عملية الانحدار الوعائي وتكوين الأوعية الدموية المرضية32. في هذه الورقة ، نقدم بروتوكولا مفصلا لتحريض نموذج OIR ، وتحليل الحوامل المسطحة في الشبكية بالإضافة إلى سير عمل تصوير الأوعية الدموية بقاع العين (FFA) على الفئران والذي سيكون مفيدا في الحصول على فهم أكثر شمولا للتغيرات الديناميكية الوعائية خلال مرحلتين من نموذج فأر OIR.
Protocol
Representative Results
Discussion
تتأثر قابلية الفئران ل OIR بالعديد من العوامل. لا يمكن مقارنة الجراء من خلفية وراثية مختلفة وسلالات. في الفئران البيضاء BALB / c ، تنمو الأوعية مرة أخرى في منطقة VO بسرعة مع انخفاض كبير في خصلات الأوعية الدموية الجديدة38 ، والتي تجلب بعض الصعوبات للبحث. في الفئران C57BL / 6 ، هناك زيادة ف?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر جميع الأعضاء من مختبرنا ومختبر العيون في مركز تشونغشان لطب العيون على مساعدتهم التقنية. كما نشكر البروفيسور تشونكياو ليو على الدعم التجريبي. تم دعم هذا العمل من خلال منح من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (NSFC: 81670872; بكين، الصين)، ومؤسسة العلوم الطبيعية في مقاطعة قوانغدونغ، الصين (المنحة رقم 2019A1515011347)، ومشروع بناء مستشفى رفيع المستوى من مختبر الدولة الرئيسي لطب العيون في مركز تشونغشان لطب العيون (المنحة رقم 303020103؛ قوانغتشو ، مقاطعة قوانغدونغ ، الصين).
Materials
| 1 mL sterile syringe | Solarbio | YA0550 | For preparation of retinal flat mounts and intraperitoneal injection |
| 1× Phosphate buffered saline (PBS) | Transgen Biotech | FG701-01 | For preparation of retinal flat mounts |
| 2 ml Microcentrifuge Tube | Corning | MCT-200-C | For preparation of retinal flat mounts |
| 48 Well Clear TC-Treated Multiple Well Plates | Corning | 3548 | For preparation of retinal flat mounts |
| Adhesive microscope slides | Various | For preparation of retinal flat mounts | |
| Adobe Photoshop CC 2019 | Adobe Inc. | For image analysis | |
| Carbon dioxide gas | Various | For sacrifice | |
| Cover slide | Various | For preparation of retinal flat mounts | |
| Curved forceps | World Precision Instruments | 14127 | For preparation of retinal flat mounts |
| DAPI staining solution | Abcam | ab228549 | For labeling nucleus on retinal flat mounts |
| Dissecting microscope | Olmpus | SZ61 | For preparation of retinal flat mounts |
| Fluorescein sodium | Sigma-Aldrich | F6377 | For in vivo imaging |
| Fluorescent Microscope | Zeiss | AxioImager.Z2 | For acquisition of fluorescence images of retinal flat mounts |
| Fluoromount-G Mounting media | SouthernBiotech | 0100-01 | For preparation of retinal flat mounts |
| Hydroxypropyl Methylcellulose | Maya | 89161 | For in vivo imaging |
| Isolectin B4 594 antibody | Invitrogen | I21413 | For labeling retinal vasculature on retinal flat mounts |
| Mice C57/BL6J | GemPharmatech of Jiangsu Province | For OIR model induction | |
| Micro dissecting scissors-straight blade | World Precision Instruments | 503242 | For preparation of retinal flat mounts |
| No.4 straight forceps | World Precision Instruments | 501978-6 | For preparation of retinal flat mounts |
| Normal donkey serum | Abcam | ab7475 | For preparation of retinal flat mounts |
| O2 sensor | Various | For monitoring the level of O2 | |
| OxyCycler | Biospherix | A84XOV | For OIR model induction |
| Paraformaldehyde (PFA) | Sigma | P6148-1KG | For tissue fixation |
| Pentobarbital sodium | Various | For anesthesia | |
| Soda lime | Various | For absorbing excess CO2 in the oxygen chamber | |
| SPECTRALIS HRA+OCT | Heidelberg | HC00500002 | For in vivo imaging |
| SPSS Statistics 22.0 | IBM | For statistical analysis | |
| Tansference decloring shaker | Kylin-Bell | ZD-2008 | For preparation of retinal flat mounts |
| Tissue culture dish (Low attachment) | Corning | 3261-20EA | For preparation of retinal flat mounts |
| Transfer pipettes | Various | For preparation of retinal flat mounts | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | SLBW6818 | For preparation of retinal flat mounts |
| Tropicamide | Various | For in vivo imaging | |
| ZEN Imaging Software | ZEISS | For image acquisition and export |
References
- Vavvas, D. G., Miller, J. W. Chapter 26 – Basic Mechanisms of Pathological Retinal and Choroidal Angiogenesis. Retina (Fifth Edition). 1, 562-578 (2013).
- Selvam, S., Kumar, T., Fruttiger, M. Retinal vasculature development in health and disease. Progress in Retinal and Eye Research. 63, 1-19 (2018).
- Shimizu, K., Kobayashi, Y., Muraoka, K. Midperipheral fundus involvement in diabetic retinopathy. Ophthalmology. 88 (7), 601-612 (1981).
- Ashton, N. Retinal vascularization in health and disease: Proctor Award Lecture of the Association for Research in Ophthalmology. American Journal of Ophthalmology. 44 (4), 7-17 (1957).
- Hellström, A., Smith, L. E., Dammann, O. Retinopathy of prematurity. Lancet. 382 (9902), 1445-1457 (2013).
- Xu, Y., et al. Melatonin attenuated retinal neovascularization and neuroglial dysfunction by inhibition of HIF-1α-VEGF pathway in oxygen-induced retinopathy mice. Journal of Pineal Research. 64 (4), 12473 (2018).
- Cavallaro, G., et al. The pathophysiology of retinopathy of prematurity: an update of previous and recent knowledge. Acta Ophthalmologica. 92 (1), 2-20 (2014).
- Gilbert, C., Rahi, J., Eckstein, M., O’Sullivan, J., Foster, A. Retinopathy of prematurity in middle-income countries. Lancet. 350 (9070), 12-14 (1997).
- Chen, J., Smith, L. E. Retinopathy of prematurity. Angiogenesis. 10 (2), 133-140 (2007).
- Fielder, A., Blencowe, H., O’Connor, A., Gilbert, C. Impact of retinopathy of prematurity on ocular structures and visual functions. Archives of Disease in Childhood. Fetal and Neonatal Edition. 100 (2), 179-184 (2015).
- Moshfeghi, D. M. Presumed transient reactive astrocytic hyperplasia in immature retina. Retina. 26, 69-73 (2006).
- Kandasamy, Y., Hartley, L., Rudd, D., Smith, R. The association between systemic vascular endothelial growth factor and retinopathy of prematurity in premature infants: a systematic review. British Journal of Ophthalmology. 101 (1), 21-24 (2017).
- Shah, P. K., et al. Retinopathy of prematurity: Past, present and future. World Journal of Clinical Pediatrics. 5 (1), 35-46 (2016).
- Kinsey, V. E. Retrolental fibroplasia; cooperative study of retrolental fibroplasia and the use of oxygen. AMA Archives of Ophthalmology. 56 (4), 481-543 (1956).
- Tin, W., Gupta, S. Optimum oxygen therapy in preterm babies. Archives of Disease in Childhood. Fetal and Neonatal Edition. 92 (2), 143-147 (2007).
- Liu, C. H., Wang, Z., Sun, Y., Chen, J. Animal models of ocular angiogenesis: from development to pathologies. FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 31 (11), 4665-4681 (2017).
- Ashton, N., Ward, B., Serpell, G. Effect of oxygen on developing retinal vessels with particular reference to the problem of retrolental fibroplasia. The British Journal of Ophthalmology. 38 (7), 397-432 (1954).
- Penn, J. S., Tolman, B. L., Lowery, L. A. Variable oxygen exposure causes preretinal neovascularization in the newborn rat. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 34 (3), 576-585 (1993).
- Smith, L. E., et al. Oxygen-induced retinopathy in the mouse. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 35 (1), 101-111 (1994).
- McLeod, D. S., Brownstein, R., Lutty, G. A. Vaso-obliteration in the canine model of oxygen-induced retinopathy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 37 (2), 300-311 (1996).
- Cao, R., Jensen, L. D., Söll, I., Hauptmann, G., Cao, Y. Hypoxia-induced retinal angiogenesis in zebrafish as a model to study retinopathy. PLoS One. 3 (7), 2748 (2008).
- Connor, K. M., et al. Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological angiogenesis. Nature Protocols. 4 (11), 1565-1573 (2009).
- Fruttiger, M. Development of the mouse retinal vasculature: angiogenesis versus vasculogenesis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 43 (2), 522-527 (2002).
- Stahl, A., et al. The mouse retina as an angiogenesis model. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51 (6), 2813-2826 (2010).
- Rivera, J. C., et al. Ischemic retinopathies: oxidative stress and inflammation. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2017, 3940241 (2017).
- Bashinsky, A. L. Retinopathy of prematurity. North Carolina Medical Journal. 78 (2), 124-128 (2017).
- Flynn, J. T., et al. Retinopathy of prematurity. Diagnosis, severity, and natural history. Ophthalmology. 94 (6), 620-629 (1987).
- Aguilar, E., et al. Chapter 6. Ocular models of angiogenesis. Methods in Enzymology. 444, 115-158 (2008).
- Liegl, R., Priglinger, C., Ohlmann, A. Induction and readout of oxygen-induced retinopathy. Methods in Molecular Biology. 1834, 179-191 (2019).
- Lutty, G. A., McLeod, D. S. Retinal vascular development and oxygen-induced retinopathy: a role for adenosine. Progress in Retinal and Eye Research. 22 (1), 95-111 (2003).
- Vähätupa, M., et al. Oxygen-induced retinopathy model for ischemic retinal diseases in rodents. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (163), (2020).
- Kim, C. B., D’Amore, P. A., Connor, K. M. Revisiting the mouse model of oxygen-induced retinopathy. Eye and Brain. 8, 67-79 (2016).
- Gammons, M. V., Bates, D. O. Models of oxygen induced retinopathy in rodents. Methods in Molecular Biology. 1430, 317-332 (2016).
- Xiao, S., et al. Fully automated, deep learning segmentation of oxygen-induced retinopathy images. Journal of Clinical Investigation Insight. 2 (24), (2017).
- McLeod, D. S., D’Anna, S. A., Lutty, G. A. Clinical and histopathologic features of canine oxygen-induced proliferative retinopathy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 39 (10), 1918-1932 (1998).
- Penn, J. S., Johnson, B. D. Fluorescein angiography as a means of assessing retinal vascular pathology in oxygen-exposed newborn rats. Current Eye Research. 12 (6), 561-570 (1993).
- Mezu-Ndubuisi, O. J., et al. In vivo retinal vascular oxygen tension imaging and fluorescein angiography in the mouse model of oxygen-induced retinopathy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 54 (10), 6968-6972 (2013).
- Zeilbeck, L. F., Müller, B., Knobloch, V., Tamm, E. R., Ohlmann, A. Differential angiogenic properties of lithium chloride in vitro and in vivo. PLoS One. 9 (4), 95546 (2014).
- Walsh, N., Bravo-Nuevo, A., Geller, S., Stone, J. Resistance of photoreceptors in the C57BL/6-c2J, C57BL/6J, and BALB/cJ mouse strains to oxygen stress: evidence of an oxygen phenotype. Current Eye Research. 29 (6), 441-447 (2004).
- Zhang, Q., Zhang, Z. M. Oxygen-induced retinopathy in mice with retinal photoreceptor cell degeneration. Life Sciences. 102 (1), 28-35 (2014).
- Okamoto, N., et al. Transgenic mice with increased expression of vascular endothelial growth factor in the retina: a new model of intraretinal and subretinal neovascularization. The American Journal of Pathology. 151 (1), 281-291 (1997).
- Ohlmann, A., et al. Norrin promotes vascular regrowth after oxygen-induced retinal vessel loss and suppresses retinopathy in mice. The Journal of Neuroscience. 30 (1), 183-193 (2010).
- Fang, L., Barber, A. J., Shenberger, J. S. Regulation of fibroblast growth factor 2 expression in oxygen-induced retinopathy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 56 (1), 207-215 (2014).
- Chan, C. K., et al. Differential expression of pro- and antiangiogenic factors in mouse strain-dependent hypoxia-induced retinal neovascularization. Laboratory Investigation. 85 (6), 721-733 (2005).
- Stahl, A., et al. Postnatal weight gain modifies severity and functional outcome of oxygen-induced proliferative retinopathy. The American Journal of Pathology. 177 (6), 2715-2723 (2010).
- Vanhaesebrouck, S., et al. Association between retinal neovascularization and serial weight measurements in murine and human newborns. European Journal of Ophthalmology. 23 (5), 678-682 (2013).
- Gerschman, R., Nadig, P. W., Snell, A. C., Nye, S. W. Effect of high oxygen concentrations on eyes of newborn mice. The American Journal of Physiology. 179 (1), 115-118 (1954).
- Lange, C., et al. Kinetics of retinal vaso-obliteration and neovascularisation in the oxygen-induced retinopathy (OIR) mouse model. Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 247 (9), 1205-1211 (2009).
- Huang, S., et al. Comparison of dextran perfusion and GSI-B4 isolectin staining in a mouse model of oxygen-induced retinopathy. Eye Science. 30 (2), 70-74 (2015).
- Paques, M., et al. Panretinal, high-resolution color photography of the mouse fundus. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 48 (6), 2769-2774 (2007).
- Fletcher, E. L., et al. Animal models of retinal disease. Progress in Molecular Biology and Translational Science. 100, 211-286 (2011).
