Isolement et culture de cellules épithéliales gingivales humaines primaires à l’aide de Y-27632

Zhiwei Xie; Jizhou Shi; Min Zong; Qiuping Xu; Chang Liu; Jie Wen; Qun Zhang; Panpan Liu; Guanyi Liu; Jing Guo; Xunwei Wu

doi:10.3791/62978

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Article de méthode

Isolement et culture de cellules épithéliales gingivales humaines primaires à l’aide de Y-27632

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DOI :

10.3791/62978

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6 novembre 2021

Zhiwei Xie¹^,²^,³ , Jizhou Shi⁴ , Min Zong³ , Qiuping Xu¹ , Chang Liu¹ , Jie Wen¹ , Qun Zhang¹ , Panpan Liu¹ , Guanyi Liu¹ , Jing Guo²^,⁵ , Xunwei Wu¹

¹Department of Tissue Engineering and Regeneration, School and Hospital of Stomatology, Cheeloo College of Medicine, Shandong University & Shandong Key Laboratory of Oral Tissue Regeneration & Shandong Engineering Laboratory for Dental Materials and Oral Tissue Regeneration, ²Department of Orthodontics, School and Hospital of Stomatology, Cheeloo College of Medicine, Shandong University & Shandong Key Laboratory of Oral Tissue Regeneration & Shandong Engineering Laboratory for Dental Materials and Oral Tissue Regeneration, ³Department of Stomatology, Shengli Oilfield Central Hospital, ⁴Department of Pediatric Surgery, Shengli Oilfield Central Hospital, ⁵Ningbo Stomatology Hospital of Savaid Stomatology School, Hangzhou Medical College

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici une méthode modifiée pour l’isolement et la culture de cellules épithéliales gingivales humaines en ajoutant l’inhibiteur de Rock, Y-27632, à la méthode traditionnelle. Cette méthode est plus facile, prend moins de temps, améliore les propriétés des cellules souches et produit un plus grand nombre de cellules épithéliales à fort potentiel à la fois pour le laboratoire et pour les applications cliniques.

Résumé

Le tissu gingival est la première structure qui protège les tissus parodontaux et joue un rôle significatif dans de nombreuses fonctions buccales. L’épithélium gingival est une structure importante du tissu gingival, en particulier dans la réparation et la régénération du tissu parodontal. L’étude des fonctions des cellules épithéliales gingivales a une valeur scientifique cruciale, comme la réparation des défauts buccaux et la détection de la compatibilité des biomatériaux. Comme les cellules épithéliales gingivales humaines sont des cellules kératinisées hautement différenciées, leur durée de vie est courte et elles sont difficiles à passer. Jusqu’à présent, il n’existe que deux façons d’isoler et de mettre en culture des cellules épithéliales gingivales, une méthode d’explantation directe et une méthode enzymatique. Cependant, le temps nécessaire pour obtenir des cellules épithéliales en utilisant la méthode d’explantation directe est plus long et le taux de survie cellulaire de la méthode enzymatique est plus faible. Cliniquement, l’acquisition de tissu gingival est limitée, de sorte qu’un système d’isolement et de culture in vitro stable, efficace et simple est nécessaire. Nous avons amélioré la méthode enzymatique traditionnelle en ajoutant Y-27632, un inhibiteur de la kinase rho-associée (ROCK), qui peut favoriser sélectivement la croissance des cellules épithéliales. Notre méthode enzymatique modifiée simplifie les étapes de la méthode enzymatique traditionnelle et augmente l’efficacité de la culture des cellules épithéliales, ce qui présente des avantages significatifs par rapport à la méthode d’explantation directe et à la méthode enzymatique.

Introduction

La gencive humaine, la structure de défense de première ligne qui protège le tissu parodontal, n’est pas seulement une barrière physique et chimique^1,mais sécrète également différentes classes de médiateurs inflammatoires qui participent aux réponses immunitaires et constituent une barrière immunitaire^2,^3. L’épithélium gingival joue un rôle important dans la réparation et la régénération du tissu parodontal. Par conséquent, l’étude de la défense et de l’immunité de l’épithélium gingival est d’une grande importance pour comprendre l’apparition, le diagnostic et le traitement de la parodo....