Summary
熱傷と感染症の臨床シナリオを模倣したモデルは、熱傷研究を促進するために必要です。本プロトコルは、ヒトにおけるそれに匹敵する単純で再現可能なラット熱傷感染モデルを実証する。これにより、新しい局所抗生物質治療を開発するための火傷および火傷後の感染症の研究が容易になります。
Abstract
熱傷誘発の方法論は、ラットモデルでは一貫して説明されていません。再現可能な熱傷研究を行うには、臨床シナリオを表す均一な熱傷モデルが必要です。本プロトコルは、ラットにおいて~20%の全体表面積(TBSA)全層熱傷を生じさせるための簡単で再現性のある方法を記載している。ここでは、水浴中で97°Cで加熱した22.89cm2(直径5.4cm)の銅棒をラット皮膚表面に塗布し、熱傷を誘発した。熱伝導率の高い銅棒は、皮膚組織の奥深くに熱を放散して、全層の火傷を引き起こすことができました。組織学的分析は、真皮および皮下組織の全層範囲への凝固損傷を伴う表皮の減弱を示す。さらに、このモデルは、免疫調節不全や細菌感染などの火傷後の入院熱傷患者で観察される臨床状況の代表です。このモデルは、グラム陽性菌とグラム陰性菌の両方による全身性細菌感染を再現できます。結論として、この論文は、免疫調節不全や細菌感染などの臨床状況を模倣した、習得が容易で堅牢なラット熱傷モデルを提示し、熱傷や感染症に対する新しい局所抗生物質薬の開発にかなりの有用性があります。
Introduction
火傷は最も壊滅的な形態の外傷の1つであり、専門の火傷センターでも死亡率は12%に達します1,2,3。最近発表された報告によると、米国では毎年~486,000人の熱傷患者が医療を必要としており、3,500人近くが死亡しています1,2,3,4,5,6。火傷は患者の免疫系に大きな課題を課し、治癒が遅い重大な開放創を作り出し、院内および日和見細菌による皮膚、肺、および全身のコロニー形成の影響を受けやすくなります。細菌感染と組み合わされた免疫調節不全は、火傷患者の罹患率と死亡率の増加に関連しています7。
動物の熱傷および感染モデルは、皮膚の損傷および熱傷外傷に関連する免疫抑制後の細菌感染の病因を研究するために不可欠です。このようなモデルは、熱傷患者の細菌感染症を治療するための新しい方法の設計と評価を可能にします。ラットとヒトは、以前に文書化されている同様の皮膚の生理学的および病理学的特徴を共有しています8。さらに、ラットはサイズが小さいため、大型の動物モデルよりも取り扱いが容易で、手頃な価格で、調達と保守が容易です。
これらの特性により、ラットは火傷や感染症を研究するのに理想的なモデル動物になります9。残念ながら、火傷誘発の技術は一貫性がなく、しばしば最小限に記述されています10、11、12、13、14。本プロトコルは、臨床シナリオをシミュレートし、免疫抑制および細菌感染を評価するために使用できるラットモデルで一貫した全層熱傷を作成するための簡単で費用効果が高く、再現可能な手順を開発するように設計されています。
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Protocol
すべての手順は、ノースカロライナ大学の施設内動物管理使用委員会(IACUC)によって承認され、確立されたガイドラインに従って実施されました。7〜9週齢の雄および雌のSprague Dawleyラット(250〜300g)を実験に使用した。すべての動物は、12時間:12時間の明暗サイクルで飼育され、食物と水が 自由に自由にアクセスできました。研究を開始する前に、鎮痛計画について必ず施設の獣医師と協力してください。
1.火傷に対するラットの準備
- 火傷の24時間前に火傷に備えて動物を準備します。
- 呼吸が遅くなるまで、誘導チャンバー内の100%酸素中の5%イソフルランでラットを5分間麻酔します(流量:2 L / min)。
- ラットが深く麻酔されたら(すべての手足のつま先のつまみに反応しない)、ラットを腹臥位の加熱パッドに移動し、ノーズコーンを介して維持するためにイソフルランを酸素で1.5%に減らします。
- 麻酔後および処置中の角膜の乾燥を防ぐために、綿先端のアプリケーターを使用して両眼の角膜に眼脂を塗布します。
- 電気バリカンを使用してラットの背部を剃り( 材料の表を参照)、肩甲骨から尾の付け根まで大きな長方形でできるだけ多くの髪を取り除きます(図2A)。
- 生理食塩水に浸したティッシュで剃った部分をきれいにして、抜け毛を拭き取ります。先端がコットンのアプリケーターで剃毛部分に脱毛ローションを塗り、~3分間そのままにしておきます。
注:参照されている脱毛ローションを3分以上塗布すると、皮膚に赤い発疹が誘発されます。 - 濡れたガーゼスポンジでその部分を2回拭いてローションを取り除き、皮膚の炎症を防ぎます。
- イソフルランをオフにし、ノーズコーンを取り外し、ラットを回復ケージに入れます。
注意: 回復ケージに加熱パッドを入れます。 - 回収した動物を清潔な収容ケージに移し、翌日の火傷処置を行います(ラットが麻酔から回復するまでに~10〜15分かかる場合があります)。
2.ラットの火傷を誘発する
- 火傷の日に、水浴温度を97°Cに設定し、4本の銅棒すべて(各420 g; 図1)燃焼実験の1時間前に水浴中で、ロッドを均一に暖めさせた。
注意: ロッドは水に浸す必要があります。実験前に温度計を使用してデジタル温度表示の精度を確認してください。 - セクション1で述べたようにラットを麻酔します。
- ラットがすべての手足のつま先をつまんで反応しなくなったら、維持のために酸素中の1.5%イソフルランを含む腹臥位の加熱パッドに置きます(図2A)。
- 疼痛管理のために腹腔内(i.p.)経路 を介して モルヒネ(体重20 mg / kg)を注射します 6.
- 水浴中の水の温度を確認してください。タイマーをセットし、耐熱手袋を着用してください。
- 加熱した銅棒を水浴から取り出し、ラットの背部に7秒間触れて火傷を誘発します。
注意: 熱損失を最小限に抑えるために、水浴と動物の間に最小距離(10〜15 cm)を保ち、火傷を誘発している間はロッドに圧力をかけないでください(つまり、接触は重力によって維持する必要があります)。 - 火傷部位ごとに1本のロッドを使用して4回の火傷を4回適用し、直後に約20%のTBSAフルコンタクト火傷を引き起こします(図2B)。
- 火傷後、乳酸リンゲル溶液(0.1 mL / g体重)のi.p.注射によって動物を蘇生させます。.
注:体温調整された乳酸リンガー溶液を使用して、ラットを蘇生させます。 - イソフルランをオフにし、ノーズコーンを取り外し、回復のためにラットをヒートマットの上に置きます。
3.細菌接種材料と感染の準備
- 緑 膿 菌PAO1および 黄色ブドウ球菌のATCC25923の凍結サンプルを、火傷実験の2日前にミュラーヒントン寒天培地(MHA)プレートにストリークします。
- 翌日、プレートから増殖した細菌の単一のコロニーを選択し、接種ループを使用して、プレートからわずかにこすり落とします。その後、それを培養チューブに入れて10 mLのミュラーヒントンブロス(MHB)を植菌し、インキュベーターシェーカーで37°Cで一晩培養した。
- 火傷と感染の日に、培養液を4,000 × g で5分間遠心分離します。ペレットを生理食塩水(0.9%NaCl溶液)で洗浄する。
- 細菌ペレットを生理食塩水に再懸濁し、0.1 OD600 nm(600 nm での光学密度)まで希釈します。この細菌懸濁液200μLを取り、それを生理食塩水800μLと混合して細菌接種材料を希釈し、2 ×10 7 CFU / mLの所望の細菌接種材料を得る。
- 前のステップで調製した 緑膿 菌または 黄色ブドウ球菌の接種源50 μL(感染用量1×106 CFU )を、火傷の15分後に麻酔をかけたラットに、29 Gの針を使用して熱傷のできるだけ近い皮下に注射します。
- 火傷の傷に感染した後、回復のためにラットを加熱パッドの上に置きます。動物が回復したら(~15〜20分)、清潔なケージに保管します。
注:火傷の後、ケージごとに1匹のラットを飼ってください。噛みやすいように水ウェットフードペレットを使用し、手が届きやすいようにケージの床に置きます。 - 疼痛管理のために、ケージ内のウォーターボトルにモルヒネ添加水(0.4 mg / mL)を入れます。.
注:経口モルヒネは、人間の火傷患者の臨床状況を反映しています。この研究では、経口モルヒネを利用して、獣医スタッフと何度も相談した後、これらの実験を人間の火傷患者に匹敵するようにしました。飲酒と体重のログは、実験を通して維持されました。すべての手順で同じ飲酒システムを使用してください。ブプレノルフィンなどの他の鎮痛薬は、施設の動物飼育ガイドラインに従って皮下/腹腔内に投与できます。. - モニタリングチェックリストに記入し、実験期間中、動物の苦痛や病気を注意深く監視します。
4.火傷の評価
- 火傷の直後の色とマージンの観点から皮膚熱傷を形態学的に評価します。
- 熱傷した皮膚をヘマトキシリンとエオジン(H&E)で染色して、熱傷の構造と上皮間隙15 を視覚化します(サンプル処理についてはステップ5.6を参照)。
5.ラットサンプルの後処理と細菌の列挙
- 火傷後24、48、および72時間でラットを過剰摂取の麻酔で安楽死させます。.
- 心臓穿刺 によって ラットから血液サンプルを採取し、ミニコレクトチューブに採取します。
- 血液サンプルからの完全な血球数を分析して、宿主の免疫系に対する火傷誘発の影響を判断します。
- 安楽死時に皮膚、皮下組織、筋肉、肺、脾臓を採取します。
注:皮膚の一部(~1 cm × 1 cm、重さ~200-300 mg)はH&E染色用に、別の部分は細菌の計数用に保管してください。 - 10 mLの収集チューブに組織を採取し、氷上の通常の生理食塩水に入れて細菌を数えます。
- 通常の生理食塩水で組織重量を正規化し、組織ホモジナイザーを使用してサンプルを均質化します( 材料表を参照)。
- 組織ホモジネートを通常の生理食塩水で順次希釈する。
- 緑 膿菌に感染したラットから採取したサンプル用のセトリミド寒天プレート上の希釈ホモジネート100μLおよび各組織サンプルのすべての希釈液をプレート。
注: 黄色ブドウ球菌に感染したラットから収集されたサンプルのメッキには、マンニトール寒天プレートを使用してください。. - プレートをインキュベーター内で37°Cで16〜18時間インキュベートします。
- 翌日、プレート上の細菌コロニーをカウントし、希釈比を掛けてCFU / mLカウントを取得し、組織の重量で正規化してCFU / g組織を計算します。
- データ分析ソフトウェアを使用して、さまざまなサンプリング時点でのさまざまな臓器の細菌数をプロットします。
- 火傷した皮膚のH&E染色を行い、創傷構造と上皮間隙を視覚化します。
- はさみと歯付き鉗子を使用して、火傷領域から1 cm x 1 cmの皮膚パッチを切り取り、固定液(10%中性緩衝ホルマリン、NBF)に室温で48時間浸します。
注意: 容器を回転させて、すべての組織が固定液に完全に浸され、固定液の体積が組織体積の30倍になるようにします。 - 皮膚組織を70%(v / v)エタノールで室温で72時間脱水します。
- 脱水したサンプルをパラフィンブロックで処理して切片を切断し、H&E15で染色します。
- 40倍の対物レンズを使用して、スライドスキャナー( 材料表を参照)で染色されたスライドをデジタル画像化します。
- ソフトウェアを使用してスキャンした画像を解析します(解析用画像の処理については 補足ファイル1 を参照、 資料表を参照)。
- 染色された皮膚セクションのすべてのフィールドを調べて、表皮、真皮、皮下組織、および骨格筋の状態を評価します。
- はさみと歯付き鉗子を使用して、火傷領域から1 cm x 1 cmの皮膚パッチを切り取り、固定液(10%中性緩衝ホルマリン、NBF)に室温で48時間浸します。
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Representative Results
ここに提示されたプロトコルは非常に再現性が高く、ラットに3度の全層熱傷をもたらしました。火傷の傷は、火傷誘発後にワックス状の白色に見えます(図2B)。火傷の色は、火傷後72時間の間に白から茶色に変化しました(図2B-E)。
組織学的分析により、全層熱傷(熱傷後24時間の深さ>2.61 mm; 図3B)。無傷の非火傷皮膚と比較して、火傷動物の皮膚サンプルは、火傷後24、48、および72時間ですべての層にわたって損傷の証拠を示しました(図3)。さらに、組織学的分析では、皮下脂肪と骨格筋の関与により、表皮層が完全に破壊され、真皮の厚さ全体が損傷することが示されました(図3B)。
細菌クリアランスを評価するために、緑膿菌および黄色ブドウ球菌の感染後24、48、および72時間でさまざまな組織を採取しました。細菌は、すべての熱傷ラットについて感染部位から回収された(図4A、B)。さらに、熱傷ラットの皮膚から回収された細菌数は、感染後24時間で緑膿菌の最初の接種量よりも少なかったのに対し、熱傷および感染後48時間および72時間で得られた組織サンプルは細菌量の増加を示しました(図4A)。対照的に、最初の接種源と比較して、皮膚の黄色ブドウ球菌についてすべての時点で2log10の増加が観察されました(図4B)。これは、黄色ブドウ球菌が、火傷によって誘発された免疫抑制だけでなく、組織内での活発な複製のために感染を確立することができたことを示唆しています。
皮膚のさまざまな層(すなわち、皮下組織、筋肉、および遠位器官)も分析して、細菌の播種を調べました。皮下組織と筋肉は、肺と脾臓よりも高い細菌量を示しました。まとめると、これらのデータは、熱傷ラットがそれぞれ 緑膿 菌(図4A)または 黄色ブドウ球菌(図4B)の創傷接種後24時間または48時間後に全身感染を発症することを示しています。完全な血球数は、ベースライン時および火傷後72時間で血液分析装置( 資料表を参照)を使用しても取得されました。総白血球数は時間とともに減少し、免疫抑制を示しています。好中球数は火傷後に減少しましたが、ベースラインと比較して72時間で感染後に増加しました(表1)。しかし、火傷と感染後に赤血球数と血小板数の増加が観察され、全身性炎症を示しています。
図1:火傷誘導を与えるために使用される銅棒。 カスタムメイドロッドの重量は420gで、直径5.4cm、高さ6.4cmです。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図2:熱傷誘発前後のラット背側の肉眼図。 (A)剃毛後のラット背側、(B)熱傷直後、(C)熱傷後24時間、(D)熱傷後48時間、および(E)熱傷後72時間。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図3:熱傷重症度各レベルのH&E染色断面の代表的な画像。 (A)偽ラット皮膚の組織像は、表皮、真皮、皮下組織層を明確に区別しています。(B)熱傷後24時間の皮膚組織像は、真皮の全層および皮下組織に凝固損傷を伴う表皮の減弱を示し、最大熱傷の深さは>2.61mmでした。 (C)熱傷後48時間で、最大熱傷深さは2.35 mmであり、(D)熱傷後72時間で、最大熱傷深さは2.20 mmでした。画像は40倍の倍率でスキャンされました。スケールバー= 500 μm(西暦)。略称:H&E = ヘマトキシリンおよびエオジン。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図4:熱傷の感染後のさまざまな臓器における細菌負荷の定量化。 ラットは、熱傷の15分後に皮下注射 を介して 細菌の6ログCFUに感染しました。全身性疾患の進行を決定するために、感染後24、48、および72時間で皮膚、皮下組織、筋肉、肺、および脾臓を採取しました。各時点で3匹のラットを使用した。(A) 緑膿 菌PA01、(B) 黄色ブドウ球 菌ATCC25923。略語:CFU =コロニー形成単位。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
| 細胞の種類 | ベースライン (平均± SD) | 72時間 非感染(平均± SD) | 72時間感染(平均±SD) |
| 白血球(109 / L) | 16.9 ± 4.9 | 7.1 ± 2.0 | 6.50±5.5 |
| 好中球 (109/L);(%) | 4.0 ± 1.1;(24.3 ± 2.8) | 1.4 ± 0.4;(20.2 ± 5.7) | 1.88 ± 1.0;(35.0 ± 12.4) |
| リンパ球 (109/L);(%) | 11.6 ± 4.1;(68.5 ± 1.7) | 4.8 ± 1.7;(66.5 ± 7.6) | 3.54 ± 3.9;(46.4 ± 17.0) |
| 単球 (109/L);(%) | 0.9 ± 0.3;(5.4 ± 1.5) | 0.8 ± 0.2;(11.5 ± 1.6) | 1.0 ± 0.6;(17.3 ± 5.5) |
| 赤血球 (1012/L) | 7.5 ± 0.3 | 7.1 ± 0.8 | 10.0 ± 1.1 |
| ヘモグロビン (g/dL) | 14.3 ± 0.7 | 13.4 ± 1.0 | 18.6 ± 2.0 |
| 血小板(109 / L) | 723.3 ± 353.1 | 942.7 ± 43.1 | 1359.0 ± 228.5 |
| HCT (%) | 45.6 ± 3.0 | 39.9 ± 3.7 | 55.7±8.2 |
表1:火傷の損傷および感染の前後の血液学的パラメータ。 略称:HCT =ヘマトクリット値。
補足ファイル1:Aperio ImageScopeでH&E画像を解析する手順。 略称:H&E = ヘマトキシリンおよびエオジン。 このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。
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Discussion
熱傷の病態生理学を研究するために、いくつかの熱傷モデルが提示されている8、12、16、17。本研究では、ラットモデルを使用して、患者の感染した熱傷をシミュレートするために、全層熱傷とそれに続く細菌感染を誘発するためのシンプルで再現性のあるプロトコルを開発しました。人間の状態を模倣する動物モデルとしてのラットの選択は、コスト、使いやすさ、再現性、およびデータの信頼性のバランスに基づいています。本明細書で使用されるラットモデルは、他のモデルに比べて多くの利点を有する:それは取り扱いが容易であり、最も一般的に使用される熱傷モデルであり、文献間の比較を可能にする。ラットは実験環境で広く使用されているにもかかわらず、ラットとヒトの外皮は組織学的に同一ではありません18,19。ラットの外皮は、皮膚、パニクルス脂肪として知られる脂肪層で構成されており、この層の下には、白い脂肪組織と平滑筋に関連する緩い結合組織の鞘があり、パンニクルスカルノサスとして知られる層を形成しています。後者の層は、ほとんどの人間の外皮には存在しません。その平滑筋細胞は速くて十分な創傷収縮を促進するので、これは重要である20。さらに、ラットの創傷治癒メカニズムはヒトの創傷治癒メカニズムとは実質的に異なることに注意する必要があります8。したがって、研究者は、この論文で説明されているプロトコルの結果を解釈するときに、このことに留意する必要があります。それにもかかわらず、限局性火傷および火傷後敗血症を研究するためのラットモデルの有用性は疑いの余地がなく、臨床的に信頼性が高く移転可能な豊富なデータを生み出しています21。さらに、ラットは他の小動物と比較して表面積が大きいため、比較的大きな火傷の誘発が可能で、臨床的に関連する火傷研究に適したモデルになります。
沸騰水16、加熱された真鍮棒22、加熱されたアルミニウムテンプレート17、ステンレス鋼棒23の上に置かれた恒温ホットプレート、および体表面24の45%を超える火傷を含む、火傷誘発の異なる方法が公開されている。理想的な実験プロトコルは、サイズと深さが一貫した火傷の傷を達成する能力を持っています。本研究では,97°Cの水中で加熱した420gの銅棒を用いて,直接コンダクタンスを介して熱を伝達し,火傷を誘発した。固体構造から皮膚表面への熱エネルギーコンダクタンスは、使用される圧力ではなく、温度勾配25および固体構造と皮膚17,25の間の距離に依存するため、火傷誘導中、ロッドは外圧を加えることなく皮膚表面に直接接触した。金属の選択を決定した要因には、熱伝導率と錆や腐食に耐える能力が含まれていました。
銅は、それぞれ16 W / mK、225 W / mK、および109 W / mKのステンレス鋼、アルミニウム、または真ちゅうと比較して、高い熱伝導率(398 W / mK、Wはワット単位の熱、mはメートル単位の面積、Kはケルビン単位の温度)を持っています9。高熱伝導性の金属棒は、低熱伝導率の金属棒よりも速く皮膚組織に熱エネルギーを放散し、同じ曝露期間内でより深いレベルの火傷を誘発します。さらに、ロッドのサイズおよび重量は、マウス7、26、27の熱傷モデルからアロメトリックスケーリングされ、約20%のTBSA熱傷を誘発した。直径1.9cmの棒(4回塗布後のマウスの総熱傷面積は11.3cm2)を直径5.4cm(4回塗布後のラットの総熱傷面積は91.6cm2)にスケーリングして、ラットで同様の~20%~30%のTBSA熱傷を誘発した(220gラットのTBSAは356.0cm2)28。 ラットのTBSAがマウスの6倍であることを考慮すると(20gマウスのTBSAは61.2cm2である)29。結果は、この方法が全層熱傷を誘発することを明確に示しており、組織学的分析は、熱傷後の異なる時点で正常な皮膚組織と火傷した皮膚組織の間の優れたコントラストを示しました(図3)。このモデルはまた、熱傷後の患者で観察される免疫抑制を捕捉することができた30,31(表1)。
細菌感染症は、火傷患者の治癒過程を損なう重要な脅威であり、多くの場合、火傷後の罹患率と死亡率の主な原因です。同様の状態をシミュレートするために、ラットは緑 膿 菌または 黄色ブドウ球菌のいずれかによる火傷の後に感染しました。当初、細菌の局所適用を試みたが、火傷表面のワックス状の外観が細菌接種材料の吸収を阻害した。このモデルは、肺と脾臓から細菌負荷が回復した場合に見られるように、火傷部位の細菌感染後の全身性疾患の進行を再現することもできました(図4)。結論として、ヒトの熱傷で観察される多くの特徴を示す全層熱傷を作成するための簡単で再現可能な方法を実証しました。このプロトコルは、感染した熱傷の治療のためのさまざまな新しい局所治療薬の研究に役立ちます。このモデルは、異なる創傷被覆材を評価するための費用対効果の高いモデルとしても使用できます。
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Disclosures
著者は開示する利益相反を持っていません。
Acknowledgments
著者らは、動物の提供と世話についてノースカロライナ大学の比較医学部門に感謝しています。病理サービスコアのローレンラルフとミアエヴァンジェリスタには、組織切片やイメージングを含む組織病理学/デジタルパソロジーに関する専門的な技術支援に感謝します。この研究は、国防総省(賞番号W81XWH-20-1-0500、GRおよびTV)からの研究助成金によって支援されました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 mL syringe | BD, USA | 309597 | Used to inject the analgesic |
| 1.7 mL Microtube | Olympus, USA | 24-282 | Used to carry morphine |
| 10% NBF | VWR, USA | 16004-115 | Used to fix the skin piece for staining |
| 30 mL syringe | BD, USA | 302832 | Used to inject the lactate ringer solution |
| 70% ethyl alcohol | Fischer Scientific, USA | BP28184 | |
| Aperio AT2 Digital Pathology Slide Scanner with ImageScope software | Aperio, Technologies Inc., Vista, CA, USA | n/a | Scanning of H & E slides and analysis |
| Cetrimide agar plates | BD, USA | 285420 | Selective media plates for Pseudomonas aeruginosa growth |
| Copper rods | n/a | n/a | Used to induce the burn injury |
| Cotton tipped applicators | OMEGA Surgical supply, USA | 4225-IMC | Used to apply eye ointment |
| Electric shaver | Oster, USA | Golden A5 | Used to remove the dorsal side hairs |
| Eye lube | Dechra, UK | n/a | The eye wetting agent to provide long lasting comfort and avoid eye dryness |
| Fluff filled underpads | Medline, USA | MSC281225 | Used in the burn procedure |
| Forcep | F.S.T. | 11027-12 | Used to hold the skin piece |
| Gauze sponges | Oasis, USA | PK412 | Used to clean the applied nair cream from the dorsal side |
| Heat-resistant gloves | n/a | n/a | Used to hold the heated copper rods |
| Hematology Analyzer | IDEXX laboratories, USA | ProCyte Dx | |
| Induction chamber | Kent Scientific, USA | vetFlo-0730 | Used to anesthesize the animals |
| Insulin syringe | BD, USA | 329461 | |
| Isoflurane | Pivetal, USA | NDC46066-755-04 | Used to anesthesized rats to induce a loss of consciousness |
| Isoflurane vaporiser | n/a | n/a | |
| Lactated ringer's solution | icumedical, USA | NDC0990-7953-09 | Used to resuscitate the rats |
| L-shaped spreader | Fischer Scientific, USA | 14-665-230 | |
| Mannitol Agar | BD, USA | 211407 | Selective media plates for Staphylococcus aureus growth |
| Minicollect tubes (K2EDTA) | greiner bio-one, USA | 450480 | Used to collect the blood |
| Morphine | Mallinckrodt, UK | NDC0406-8003-30 | This analgesia was used to induce the inability to feel burn injury pain |
| Muller Hinton Broth | BD, USA | 275730 | |
| Muller Hinton II Agar | BD, USA | 211438 | |
| Nair hair removal lotion | Nair, USA | n/a | Used to remove the residual hairs on dorsal side |
| Needle 23 G | BD, USA | 305193 | Used to inject the lactate ringer solution |
| Normal saline | n/a | n/a | |
| Spectrophotometer | ThermoScientific, USA | Genesys 30 | |
| Sprague-Dawley rats, male and female | Charles River Labs | n/a | 7-9 weeks old for burn induction |
| Surgical Scissor | F.S.T. | 14501-14 | Used to cut the desired skin piece |
| Tissue collection tubes | Globe Scientific | 220101236 | |
| Tissue Homogenizer | Kinematica, Inc, USA | POLYTRON PT2100 | Used to homogenize the tissue samples |
| Water bath | Fischer Scientific, USA | n/a | Used to induce the burn injury |
| Weighted heating pad | Comfytemp, USA | n/a | Used during the procedure to keep rat's body warm |
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