Summary

Модель ожога крысы для изучения термического ожога кожи на всю толщину и инфекции

Published: August 23, 2022
doi:

Summary

Модель, имитирующая клинический сценарий ожоговой травмы и инфекции, необходима для дальнейших исследований ожогов. Настоящий протокол демонстрирует простую и воспроизводимую модель ожоговой инфекции крыс, сравнимую с таковой у людей. Это облегчает изучение ожогов и инфекций после ожога для разработки новых местных методов лечения антибиотиками.

Abstract

Методики индукции ожогов непоследовательно описаны в моделях на крысах. Однородная модель ожоговой раны, представляющая клинический сценарий, необходима для проведения воспроизводимых ожоговых исследований. Настоящий протокол описывает простой и воспроизводимый способ получения ожогов на всю толщину с общей площадью поверхности тела (TBSA) ~20% у крыс. Здесь медный стержень размером 22,89 см2 (диаметр 5,4 см), нагретый до 97 ° C на водяной бане, был нанесен на поверхность кожи крысы, чтобы вызвать ожоговую травму. Медный стержень с высокой теплопроводностью был способен рассеивать тепло глубже в тканях кожи, создавая ожог на всю толщину. Гистологический анализ показывает ослабленный эпидермис с коагуляционным повреждением на всю толщину дермы и подкожной клетчатки. Кроме того, эта модель репрезентативна для клинических ситуаций, наблюдаемых у госпитализированных пациентов с ожогами после ожоговой травмы, такой как иммунная дисрегуляция и бактериальные инфекции. Модель может повторять системную бактериальную инфекцию как грамположительными, так и грамотрицательными бактериями. В заключение, в этой статье представлена простая в освоении и надежная модель ожога крыс, которая имитирует клинические ситуации, включая иммунную дисрегуляцию и бактериальные инфекции, что имеет большое значение для разработки новых местных антибиотиков для лечения ожоговых ран и инфекций.

Introduction

Ожоговые травмы являются одними из самых разрушительных форм травм, при этом смертность достигает 12% даже в специализированных ожоговых центрах 1,2,3. Согласно недавно опубликованным отчетам, ~ 486 000 пациентов с ожогами ежегодно нуждаются в медицинской помощи в Соединенных Штатах, при этом почти 3 500 смертей 1,2,3,4,5,6. Ожоговая травма представляет собой серьезную проблему для иммунной системы пациентов и создает значительную открытую рану, которая медленно заживает, делая их восприимчивыми к кожной, легочной и системной колонизации нозокомиальными, условно-патогенными бактериями. Иммунная дисрегуляция в сочетании с бактериальной инфекцией связана с повышенной заболеваемостью и смертностью у ожоговых больных7.

Модель ожогов и инфекций животных имеет важное значение для изучения патогенеза бактериальных инфекций после повреждения кожи и подавления иммунитета, связанного с ожоговой травмой. Такие модели позволяют разрабатывать и оценивать новые методы лечения бактериальных инфекций у ожоговых больных. Крысы и люди имеют сходные физиологические и патологические характеристики кожи, которые были задокументированыранее 8. Кроме того, крысы меньше по размеру, что делает их более легкими в обращении, более доступными и простыми в приобретении и обслуживании, чем более крупные модели животных.

Эти характеристики делают крыс идеальным модельным животным для изучения ожогов и инфекций9. К сожалению, техника индукции ожога непоследовательна и часто минимально описана 10,11,12,13,14. Настоящий протокол предназначен для разработки простой, экономически эффективной и воспроизводимой процедуры для создания последовательной ожоговой травмы на всю толщину в модели крысы, которая имитирует клинический сценарий и может быть использована для оценки иммуносупрессии и бактериальной инфекции.

Protocol

Все процедуры были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) Университета Северной Каролины и проводились в соответствии с установленными им руководящими принципами. Для экспериментов использовали самцов и самок крыс Sprague Dawley (250-300 г) в возраст…

Representative Results

Представленный здесь протокол обладает высокой воспроизводимостью и привел к ожоговой травме третьей степени на всю толщину у крыс. Ожоговая рана выглядит восково-белой после индукции ожога (рис. 2B). Цвет ожоговой травмы изменился с белого на коричневый в течение 72 часо…

Discussion

Для изучения патофизиологии ожоговой травмыбыло представлено несколько моделей ожогов 8,12,16,17. В настоящем исследовании мы использовали модель крысы для разработки простого и воспроизводимого протокола, чтобы вызв?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Авторы благодарят Отдел сравнительной медицины Университета Северной Каролины за предоставление и уход за животными. Мы благодарим Лорен Ральф и Мию Евангелисту из Pathology Services Core за экспертную техническую помощь в области гистопатологии / цифровой патологии, включая срезы тканей и визуализацию. Это исследование было поддержано исследовательским грантом Министерства обороны (номер награды W81XWH-20-1-0500, GR и TV).

Materials

1 mL syringe BD, USA 309597 Used to inject the analgesic
1.7 mL Microtube Olympus, USA 24-282 Used to carry morphine
10% NBF VWR, USA 16004-115 Used to fix the skin piece for staining
30 mL syringe BD, USA 302832 Used to inject the lactate ringer solution
70% ethyl alcohol Fischer Scientific, USA BP28184
Aperio AT2 Digital Pathology  Slide Scanner with ImageScope software Aperio, Technologies Inc., Vista, CA, USA n/a Scanning of H & E slides and analysis
Cetrimide agar plates BD, USA 285420 Selective media plates for Pseudomonas aeruginosa growth
Copper rods n/a n/a Used to induce the burn injury
Cotton tipped applicators OMEGA Surgical supply, USA 4225-IMC Used to apply eye ointment
Electric shaver Oster, USA Golden A5 Used to remove the dorsal side hairs
Eye lube Dechra, UK n/a The eye wetting agent to provide long lasting comfort and avoid eye dryness
Fluff filled underpads Medline, USA MSC281225 Used in the burn procedure
Forcep F.S.T. 11027-12 Used to hold the skin piece
Gauze sponges Oasis, USA PK412 Used to clean the applied nair cream from the dorsal side 
Heat-resistant gloves n/a n/a Used to hold the heated copper rods
Hematology Analyzer IDEXX laboratories, USA ProCyte Dx
Induction chamber Kent Scientific, USA vetFlo-0730 Used to anesthesize the animals
Insulin syringe BD, USA 329461
Isoflurane Pivetal, USA NDC46066-755-04 Used to anesthesized rats to induce a loss of consciousness
Isoflurane vaporiser n/a n/a
Lactated ringer's solution icumedical, USA NDC0990-7953-09 Used to resuscitate the rats
L-shaped spreader Fischer Scientific, USA 14-665-230
Mannitol Agar BD, USA 211407 Selective media plates for Staphylococcus aureus growth
Minicollect tubes (K2EDTA) greiner bio-one, USA 450480 Used to collect the blood
Morphine Mallinckrodt, UK NDC0406-8003-30 This analgesia was used to induce the inability to feel burn injury pain
Muller Hinton Broth BD, USA 275730
Muller Hinton II Agar BD, USA 211438
Nair hair removal lotion Nair, USA n/a Used to remove the residual hairs on dorsal side
Needle 23 G BD, USA 305193 Used to inject the lactate ringer solution
Normal saline n/a n/a
Spectrophotometer ThermoScientific, USA Genesys 30
Sprague-Dawley rats, male and female Charles River Labs n/a 7-9 weeks old for burn induction
Surgical Scissor F.S.T. 14501-14 Used to cut the desired skin piece
Tissue collection tubes Globe Scientific 220101236
Tissue Homogenizer Kinematica, Inc, USA POLYTRON PT2100 Used to homogenize the tissue samples
Water bath Fischer Scientific, USA n/a Used to induce the burn injury
Weighted heating pad Comfytemp, USA n/a Used during the procedure to keep rat's body warm

References

  1. Peck, M., Molnar, J., Swart, D. A global plan for burn prevention and care. Bulletin of the World Health Organization. 87, 802-803 (2009).
  2. American Burn Association. Burn incidence and treatment in the United States: 2011 fact sheet. Chicago: American Burn Association. , (2011).
  3. Miller, S. F., et al. National burn repository 2007 report: a synopsis of the 2007 call for data. Journal of Burn Care & Research. 29 (6), 862-870 (2008).
  4. Kruger, E., Kowal, S., Bilir, S. P., Han, E., Foster, K. Relationship between patient characteristics and number of procedures as well as length of stay for patients surviving severe burn injuries: analysis of the American Burn Association National Burn Repository. Journal of Burn Care & Research. 41 (5), 1037-1044 (2020).
  5. American Burn Association. Burn incidence and treatment in the United States: 2016. Burn Incidence Fact Sheet. Chicago: American Burn Association. , (2016).
  6. Willis, M. L., et al. Plasma extracellular vesicles released after severe burn injury modulate macrophage phenotype and function. Journal of Leukocyte Biology. 111 (1), 33-49 (2022).
  7. Kartchner, L. B., et al. One-hit wonder: late after burn injury, granulocytes can clear one bacterial infection but cannot control a subsequent infection. Burns. 45 (3), 627-640 (2019).
  8. Abdullahi, A., Amini-Nik, S., Jeschke, M. Animal models in burn research. Cellular and Molecular Life Sciences. 71 (17), 3241-3255 (2014).
  9. Cai, E. Z., et al. Creation of consistent burn wounds: a rat model. Archives of Plastic Surgery. 41 (4), 317 (2014).
  10. Pessolato, A. G. T., dos Santos Martins, D., Ambrósio, C. E., Mançanares, C. A. F., de Carvalho, A. F. Propolis and amnion reepithelialise second-degree burns in rats. Burns. 37 (7), 1192-1201 (2011).
  11. Gurung, S., Škalko-Basnet, N. Wound healing properties of Carica papaya latex: in vivo evaluation in mice burn model. Journal of Ethnopharmacology. 121 (2), 338-341 (2009).
  12. Eloy, R., Cornillac, A. Wound healing of burns in rats treated with a new amino acid copolymer membrane. Burns. 18 (5), 405-411 (1992).
  13. Upadhyay, N., et al. Safety and healing efficacy of Sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) seed oil on burn wounds in rats. Food and Chemical Toxicology. 47 (6), 1146-1153 (2009).
  14. El-Kased, R. F., Amer, R. I., Attia, D., Elmazar, M. M. Honey-based hydrogel: In vitro and comparative In vivo evaluation for burn wound healing. Scientific Reports. 7 (1), 1-11 (2017).
  15. Fan, G. -. Y., et al. Severe burn injury in a swine model for clinical dressing assessment. Journal of Visualized Experiments. (141), e57942 (2018).
  16. Davenport, L., Dobson, G., Letson, H. A new model for standardising and treating thermal injury in the rat. MethodsX. 6, 2021-2027 (2019).
  17. Kaufman, T., Lusthaus, S., Sagher, U., Wexler, M. Deep partial skin thickness burns: a reproducible animal model to study burn wound healing. Burns. 16 (1), 13-16 (1990).
  18. Casal, D., et al. Blood supply to the integument of the abdomen of the rat: a surgical perspective. Plastic and Reconstructive Surgery Global Open. 5 (9), (2017).
  19. Casal, D., et al. A model of free tissue transfer: the rat epigastric free flap. Journal of Visualized Experiments. (119), e55281 (2017).
  20. Naldaiz-Gastesi, N., Bahri, O. A., Lopez de Munain, A., McCullagh, K. J., Izeta, A. The panniculus carnosus muscle: an evolutionary enigma at the intersection of distinct research fields. Journal of Anatomy. 233 (3), 275-288 (2018).
  21. Weber, B., et al. Modeling trauma in rats: similarities to humans and potential pitfalls to consider. Journal of Translational Medicine. 17 (1), 1-19 (2019).
  22. Nguyen, J. Q. M., et al. Spatial frequency domain imaging of burn wounds in a preclinical model of graded burn severity. Journal of Biomedical Optics. 18 (6), 066010 (2013).
  23. Sobral, C., Gragnani, A., Morgan, J., Ferreira, L. Inhibition of proliferation of Pseudomonas aeruginosa by KGF in an experimental burn model using human cultured keratinocytes. Burns. 33 (5), 613-620 (2007).
  24. Olivera, F., Bevilacqua, L., Anaruma, C., Boldrini Sde, C., Liberti, E. Morphological changes in distant muscle fibers following thermal injury i n Wistar rats. Acta Cirurgica Brasileira. 25, 525-528 (2010).
  25. Davies, J. W. . Physiological Responses to Burning Injury. , (1982).
  26. Neely, C. J., et al. Flagellin treatment prevents increased susceptibility to systemic bacterial infection after injury by inhibiting anti-inflammatory IL-10+ IL-12-neutrophil polarization. PloS One. 9 (1), e85623 (2014).
  27. Dunn, J. L., et al. Direct detection of blood nitric oxide reveals a burn-dependent decrease of nitric oxide in response to Pseudomonas aeruginosa infection. Burns. 42 (7), 1522-1527 (2016).
  28. Gouma, E., et al. A simple procedure for estimation of total body surface area and determination of a new value of Meeh’s constant in rats. Laboratory Animals. 46 (1), 40-45 (2012).
  29. Dawson, N. The surface-area/body-weight relationship in mice. Australian Journal of Biological Sciences. 20 (3), 687-690 (1967).
  30. Moins-Teisserenc, H., et al. Severe altered immune status after burn injury is associated with bacterial infection and septic shock. Frontiers in Immunology. 12, 529 (2021).
  31. Robins, E. V. Immunosuppression of the burned patient. Critical Care Nursing Clinics. 1 (4), 767-774 (1989).

Play Video

Cite This Article
Sharma, R., Yeshwante, S., Vallé, Q., Hussein, M., Thombare, V., McCann, S. M., Maile, R., Li, J., Velkov, T., Rao, G. Rat Burn Model to Study Full-Thickness Cutaneous Thermal Burn and Infection. J. Vis. Exp. (186), e64345, doi:10.3791/64345 (2022).

View Video