Abstract
Wie bei Entdeckung kleines Molekül als Wirkstoff, erfordert das Screening für Peptid-Agonisten die serielle Verdünnung von Peptiden Konzentrations-Wirkungs-Kurven zu erzeugen. Screening Peptide bietet eine zusätzliche Ebene der Komplexität als herkömmliche Spitzenbasis Probenhandhabungsverfahren Peptide zu einer großen Oberfläche von Plastikmaterialien belichten, eine erhöhte Chance für Peptidverlust durch Adsorption bereitstellt. Verhindern übermäßigen Exposition gegenüber Kunststoffgeschirr reduziert Peptidverlust durch Festhalten an Kunststoffen und minimiert somit Ungenauigkeiten in Potenz Vorhersage, und wir haben zuvor beschrieben die Vorteile von akustischen berührungslosen Abgabe für in vitro High-Throughput - Screening von Peptidagonisten 1. Hier diskutieren wir eine vollständig integrierte Automatisierungslösung zur berührungslosen akustischen Herstellung von Peptid-Reihenverdünnungen in Mikrotiterplatten unter Verwendung der beispielsweise zum Screenen von Peptidagonisten an der Maus Glucagon-like Peptid-1-Rezeptor (GLP-1R). Unsere Methoden ermöglichen hohe-throughput zellbasierten Assays zum Screenen auf Agonisten und sind leicht skalierbar erhöhten Probendurchsatz zu unterstützen, oder für eine erhöhte Anzahl von Kopien Testplatte (beispielsweise für eine Gruppe von mehreren Zielzelllinien) zu ermöglichen.
Introduction
Die GLP-1R ist ein etabliertes Medikament Ziel bei der Behandlung von Typ - 2 - Diabetes 2. Das native Peptid - Agonisten für diesen Rezeptor, GLP-1, hat eine in vivo Halbwertszeit von 2-3 min 3. Die Bindung von GLP-1 an seinen G-Protein-gekoppelten Rezeptorziel Ergebnisse in der stromabwärtigen Herstellung des second messenger cAMP durch native G-Protein-Kopplung an die Aktivierung von Adenylatcyclase. Die Messung des akkumulierten cAMP stellt eine robuste Test-Rezeptoraktivierung zu überwachen und für die aktive GLP-1-Analoga mit bevorzugten physikalisch-chemischen Eigenschaften zu screenen. Ein solcher Assay erfordert die serielle Verdünnung der Testproben Konzentrations-Reaktions-Kurven zu konstruieren, und dies ist besonders kompliziert, wenn Peptidproben reichte. Mögliche Fehler von der Spitze-basierten seriellen Verdünnung Vorbereitung wurden zuvor 1,4,5 beschrieben. Peptide werden auf Kunststoffgeschirr, was zu unzuverlässigen Potenz Schätzungen adsorbieren. Peptidverlust kann durch t minimiert werdener die Aufnahme von Rinderserumalbumin (BSA) in Puffer und die Verwendung von silikonisierten Kunststoffgeschirr, noch Proteinbindungs bleibt unvorhersehbar. Insbesondere wurde die Änderung der Bindung von GLP-1 an Versuchsbehältern wurde 6 beschrieben. Es gibt eine weitere Komplikation bei , dass die Stabilisierungsmittel in Laborkunststoffprodukte verwendet wird, kann von den Spitzen und Mikrotiterplatten in wßriges Assaypuffer auslaugen und stören Proteinfunktion 7, 8. Daher Methoden Exposition gegenKunstStoffGeschirr zu reduzieren , sind notwendig , um die Genauigkeit der Messungen zu erhöhen.
Akustische Flüssigkeitsspender konzentriert eines hochfrequenten akustischen Signals auf der Oberfläche einer Flüssigkeitsprobe, wodurch der Ausstoß von Tröpfchen präzise Nanoliter- in eine benachbarte Testplatte 9. Die Verwendung von akustischen Ausstoß ist in der pharmazeutischen Industrie für die Herstellung und das Screening von großen synthetischen Substanzbibliotheken Standard, und die Technologie für kleine molecul gut validiert wurdees 10. Unseres Wissens sind wir die erste Gruppe akustische Abgabe zur Herstellung von rekombinanten und synthetischen Peptide zu beschreiben , und wir haben bereits berichtet , die eine verbesserte Genauigkeit im Vergleich zu herkömmlichen Tipp-basierten Methoden 1.
Dieser Artikel beschreibt die Integration der Herstellung von Peptid serielle und direkte Verdünnungen von berührungslosen akustischen Übertragung auf eine vollautomatische Plattenrobotersystem Handhabung. Eine Anzahl von Verfahren umfasst Akustisches von Proben wurden zuvor 11 beschrieben. Wir verwenden ein zweistufiges Verfahren zur Zwischenstammkonzentrationen herzustellen und zu seriell Peptidanaloga für die Erzeugung der vollen Dosis-Wirkungskurve verdünnen. Die hergestellten Peptide werden inkubiert mit den Zellen des Ziel Maus GLP-1R exprimieren, und wir verwenden eine im Handel erhältliche homogene zeitaufgelöste Fluoreszenz (HTRF) -Assay cAMP-Akkumulation in diesen Zellen als eine Auslesung von Peptid-Agonist aktiv zu messen,keit. Der Assay ist robust und zugänglich für ein Hochdurchsatz - 384-Well - Format und routinemäßig sowohl Assay - Entwicklung angewendet und Wirkstoff - Screening - Projekte 12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Peptidserienverdünnung
- Bereiten Assaypuffer: Hanks gepufferter Salzlösung (HBSS), supplementiert mit 25 mM HEPES, 0,1% BSA und 0,5 mM 3-Isobutyl-1-methylxanthin (IBMX), pH 7,4.
- Verwenden Sie einen Bulk-Reagenzspender systematisch 5 ul Testpuffer hinzufügen zu jeder Vertiefung von fünf 384-Well-Low-Volume-Testplatten.
- Verwenden Sie den internen Software ein Abgabeprogramm für 5 ul Volumen zusätzlich zu jeder Vertiefung einer 384-Well-Platte zu erstellen, wie Anweisungen des Herstellers.
- Tauchen Abgabe Kassettenschläuche in Testpuffer und Prime Flüssigkeit.
- Legen Sie 384-well geringem Volumen Assayplatte auf Plattenträger.
- Drücke Start.
- Verdünnen Sie alle Peptidproben, unabhängig von Speicher Fahrzeug, in Testpuffer ein 100x Peptid Lager herzustellen.
HINWEIS: Peptides Screening erfordern , können in phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) oder Dimethylsulfoxid (DMSO) bereitgestellt werden , wie als angemessen erachtet wird (beispielsweise DMSO wkrank haben eine schädliche Wirkung auf Peptide mit sekundären Modifikationen wie PEGylierung). - Dispense 25 ul 100x Peptid Bestände in Spalten 1-5 von einem akustisch qualifizierten 384-Mikrotiterplatte aus Polypropylen. Diese Platte ist 'bezeichnet Source-Platte A'. Stellen Sie sicher, dass die Quellplatten, aber nicht Zielplatten sind mit flachem Boden und entsprechen den spezifischen akustischen Toleranzen, wie vom Hersteller von akustischen Instrumenten definiert.
- Dispense 25 ul 100x Referenzkontrolle in die Vertiefungen A23 und A24 von Quellenplatte A.
- Dispense 10 & mgr; l Testpuffer in Spalten 11 bis 15 und 30 & mgr; l Testpuffer in Spalten 21-22 von Quellenplatte A.
- Dispense 10 & mgr; l Testpuffer in Spalten 6-10 und Spalten 16-20 eines zweiten akustisch qualifiziert 384-Mikrotiterplatte aus Polypropylen. Diese Platte wird "Quellenplatte B 'bezeichnet.
- Zentrifuge Quellenplatten A und B bei 300 × g für 1 min. Fügen Sie eine entsprechende Ausgleichsplatte.
- Verwenden Sie akustische fluid Spender in ein automatisiertes Robotersystem integriert drei aufeinanderfolgenden 1 vorzubereiten: aus der Kolonne 100 Zwischenverdünnungen (in Testpuffer) der 100x-Peptid-Aktien 1 in Quelle A.
HINWEIS: Die Programmierung erfordert Platte neu formatiert und Dosis - Wirkungs - Software (wie vom Hersteller des akustischen Flüssigkeitsspender zur Verfügung gestellt) drei akustische Übertragungen zwischen Quelle A und Quelle B zu ermöglichen (Abbildung 1 für Plattenlayouts sehen). Schritt 1.9 Details insbesondere die Verwendung von Fluidspender in diesem Labor unter automatisierten Robotersteuerung verwendet wird (siehe Materialien Table):- Ladequellenplatten und Testplatten in Plattenhotelteil der Robotik.
- Offene automatisierten Roboter-Software und Lastplatte neu formatiert und Dosis-Wirkungs-Programmerweiterung Protokolle. Klicken Sie auf "Ausführen".
HINWEIS: Automation weist einen akustischen Flüssigkeitsspender 250 nl von Spalten A 1-5 von Quellenplatte in Spalten zu übertragen 6-10 von Quellenplatte B und eine zweite Acoustic Flüssigkeitsspender der Lage, größere Flüssigkeitsvolumina Umgang mit 15 & mgr; l Testpuffer zu verfüllen zu mischen. Automation überträgt dann Source-Platte B zu integrierten Zentrifuge und Zentrifugen bei 300 g für 1 min (eine entsprechende Ausgleichsplatte ist für alle Zentrifugationsschritte enthalten). Source Platte B ist mit dem akustischen Fluidspender für die Übertragung von 250 nl zurück von Spalten 6-10 der Quellenplatte B in Spalten 11-15 der Quellenplatte A und Verfüllung mit 15 ul Assaypuffer zu mischen. Automation überträgt Quellenplatte A integrierte Zentrifuge und Zentrifugen bei 300 g für 1 min. Quelle Platte A wird dann zu dem akustischen Flüssigkeitsspender für den Transfer von 250 nl von Spalten 11-15 der Quellplatte A in Spalten 16-20 der Quellplatte B und Verfüllung mit 15 & mgr; l Testpuffer zu mischen. Automation überträgt dann Source-Platte B zu integrierten Zentrifuge und Zentrifugen bei 300 g für 1 min.
HINWEIS: Schließlich wird die Dosis-Wirkungs-Protokoll leitet akustische Ausgabe zu übertragendas erforderliche Volumen von jedem der vier seriell Source-Platte Brunnen verdünnt (sowohl in der Source-Platte A und Source-Platte B) 1.2 eine vollständige 11-Punkt-Kurve in zweifacher Ausfertigung in Assayplatten (gefüllt mit 5 & mgr; l Testpuffer in Schritt zu konstruieren oben ). Automation Transfers Assayplatte integrierte Zentrifuge und Zentrifugen bei 300 g für 1 min.
2. Zellpräparation
- Auftau kryokonservierten Chinese hamster ovary (CHO) Zellen, die das Ziel Maus GLP-1-Rezeptor rasch in einem 37 ºC Wasserbad und Resuspendieren in 20 ml Assaypuffer exprimieren.
- Zentrifuge Zellsuspension für 5 min bei 200 xg bei Raumtemperatur (RT). Fügen Sie ein angemessenes Gleichgewicht.
- Überstand verwerfen und resuspendieren Zellpellet in 10 ml Assaypuffer.
- Verdünnen Zelle Lager 1: 1 in Trypanblau und bestimmen Lebendzelldichte eine automatische Zellzähler verwendet wird. Die Zellen in Assaypuffer bei 1,6 x 10 6 Zellen pro ml (äquivalent zu 8000 Zellen pro well Assayplatten).
- Verwenden einer Schütt Reagenzspender 5 & mgr; l der Zellsuspension hinzugefügt zu jeder Vertiefung der Testplatten (mit seriell verdünnten Peptide in 5 & mgr; l Assay-Puffer) und Inkubation für 30 min bei RT.
3. HTRF cAMP-Detection-Assay
- Bringen HTRF cAMP-Assay-Kit für 30 min auf RT vor der Verwendung.
- Bereiten Sie jede HTRF-Reagenz (Kryptat und d2) getrennt bei einer Verdünnung von 1:20 in Lysispuffer (eigene Formulierung, durch Hersteller von cAMP-Nachweistest zur Verfügung gestellt).
HINWEIS: ACHTUNG: Lysepuffer enthält Kaliumfluorid (KF) , die toxisch ist und einen teratogen 13. Zur Entsorgung Assay-Platten, die KF sollte versiegelt und verbrannt werden, und jede flüssige Abfälle müssen mit Wasser vor der Entsorgung in den Ausguss auf <1 mmol / l verdünnt werden. - Verwenden Sie einen Bulk-Reagenzspender 5 ul Kryptat- Reagenz in alle Vertiefungen der Testplatten hinzuzufügen.
- Verwenden Sie einen Bulk-Reagenzspender 5 ul d2 Reagenz colum hinzufügenns 1-22 der Testplatten.
- Unmittelbar Pipette manuell 5 & mgr; l Lyse-Puffer in Vertiefungen A23-D24 der Testplatten nicht-spezifische Bindung (NSB) Kontrollvertiefungen zu geben, und 5 ul d2 Reagenz in die Vertiefungen E23-P24.
- Zentrifugieren Sie die Testplatten für 1 min bei 200 × g bei RT die Brunnen zu mischen.
- Decken Sie die Testplatten Verdunstung und Photobleaching zu minimieren und Inkubation bei RT für 1 Stunde.
- Messen Sie Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (FRET) Signal mit einer Anregung bei 320 nm und Emission bei 620 nm und 665 nm einen Plattenleser.
4. Datenanalyse
- Verwenden Sie NSB bedeuten Hintergrund aus allen Wells abzuziehen.
- Berechnen% Delta F aus dem 665 nm / 620 nm-Verhältnis wie folgt:
Ratio = (A 665 nm / A 620nm) x 10 4
Delta F = ((Sample Ratio - Verhältnis NSB) / Ratio - NSB)) x 100
wo Verhältnis NSB = Vertiefungen ohne d2 Reagenz. - Berechnen% betätigendesIonen zwischen unstimulierten Zellen und Zellen mit maximaler GLP-1-Liganden stimuliert, wie folgt:
% Aktivierung = (% Delta fSAMPLE -% DeltaFunstimulated Zellen) / (% DeltaFGLP-1 stimulierten Zellen -% DeltaF unstimulierten Zellen) x 100 - Analysieren Sie Konzentrations-Wirkungs - Kurven über 4-Parameter logistische Analyse und grafische Darstellung in% Aktivierung , wie durch Bezugssteuerung 1 definiert.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Wir verwenden routinemäßig einen zweistufigen Verfahren Peptide über akustische Übertragung zu verdünnen. Für den ersten Schritt wird ein akustisches Spender mit Automatisierungs fluchtet verwendet vier Stammpeptidzwischenverdünnungen über zwei Quellenplatten (1a, b) zu erzeugen. Für den zweiten Schritt, verwenden wir einen akustischen Spender zur weiteren Stammverdünnungen von der Quelle Platten A verdünnen und B eine 11-Punkt - Konzentrationsbereich für jeden Test - Peptid (Abbildung 1c) zu erstellen. Jedes Peptid Konzentrationsbereich ist in zweifacher Ausfertigung, von links nach rechts über die Testplatte gebrannt, so dass 16 verschiedene Peptide pro 384-Well - Assayplatte (Abbildung 1c) zu sehen sein. Assaypuffer Verfüllung wird durchgeführt , um ein konstantes Volumen pro Vertiefung über die Testplatte (Abbildung 1d) zu gewährleisten. Referenzpeptid positive Kontrollen werden auch in den Zielplatten bei maximaler wirksame Konzentration übertragen.
Eintr. "fo: keep-together.within-page =" 1 "> Platten eine fluoreszierende Platte Leser gelesen werden , und eine Heatmap für ein Beispiel Platte 16 Peptide in doppelter Ausführung enthält (Abbildung 2a) gezeigt Der Test cAMP - Anreicherung verwendet ein invertiertes Kompetitionsassay, eine hohe Konzentration von cAMP. Reproduzierbarkeit der doppelten Punkte stellen somit niedrige Werte (als violett dargestellt) ist offensichtlich , wenn Daten als Konzentrations-Wirkungs - Kurven (Figur 2b). Probe 1 (Reihe A, 2a) ausgedrückt wird stellt eine positive Kontrolle für den Test. die Proben 2, 3 und 4 (Zeilen B, C und D bzw. 2a) waren inaktiv und gleichzusetzen mit den Flachleitungen in 2b. die Proben 5-16 (Zeilen E bis P) repräsentieren aktive Testpeptide dar. Das Verfahren ermöglicht die Erzeugung von Voll Konzentrations-Wirkungs-Kurven in einem breiten Potenzreihe. Ein Flussdiagramm den gesamten Arbeitsablauf detailliert dargestellt in 
Abb . 1: Plattenlayouts Beschreibung der akustischen Reihenverdünnungsverfahren zu verzichten. (A, b) Aufbau eines 384-Well - Source - Platten A und B , die 25 & mgr; l von 100 x Stock Konzentration jedes Peptids (Beispiel mit 80 Peptiden möglich pro Source - Platte), 100x Positivkontrolle, Testpuffer nur für Brunnen für Verfüllung und drei 1: 100 Reihenverdünnungen jedes Peptids durch automatische akustische Übertragung und Verfüllung zwischen den beiden Quellplatten vorbereitet. (C) Eine einzelne Testplatte Layout 11-Punkt - Konzentrationsbereich für 16 Peptide in zweifacher Ausfertigung über die Platte. (D) Typische Abgabeprotokoll für einen 11-Punkt - Konzentrationsbereich in einem 10 & mgr; l Endassayvolumen. Alle Ziel Brunnen haben einen Testpuffer Verfüllung eine konstante endgültige Übertragung vo zu schaffen lumen von 100 nl pro Vertiefung. Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen. 
Abbildung 2: Heatmap und Dosis-Wirkungs-Kurven Heatmap zeigt Fluoreszenz bei A665 nm.. (A) 11-Punkt - Konzentrationsbereich für 16 Peptide in zweifacher Ausfertigung über die Platte. Lila zeigt eine hohe Konzentration von cAMP (max) zeigt rote eine niedrige Konzentration von cAMP (min). (B) repräsentative Peptid Konzentrations-Wirkungs - Kurven von einem einzelnen Plattentest eine Reihe von GLP-1 - Rezeptor - Agonisten Peptid Aktivitäten gegen Maus - GLP-1R - exprimierenden Zellen (16 Verbindungen) zeigt. Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen. 
Abbildung 3:.. Flow Chart des Screening - Prozesses Detail des gesamten Workflows Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Dieses Protokoll beschreibt die erfolgreiche Anwendung von automatisierten akustischen Ausgabe zu seriell Peptidproben über einen Konzentrationsbereich von 3 x 10 6 , die weniger als 1 ul Probe verdünnen. Der große Vorteil dieser Methode ist, über reduzierte Exposition von Proben zu experimentellen Behälter und Kunststoffgeschirr (wie Pipettenspitzen) Datenqualität durch Minimierung Peptid Adsorption an Kunststoffprodukte zu erhöhen, die für Reagenztransfer und Mischen normalerweise erforderlich sind. Während akustische Abgabe vollständig nicht die Verwendung von Plastikmaterialien auszuschließen, nicht reduziert es deutlich es. Darüber hinaus eliminiert die Entfernung der Spitze basierenden Pipettieren auch Probenverschleppung, und Fehler werden nicht im gesamten Reihenverdünnungs propagiert, so dass sowohl für zuverlässige und reproduzierbare Herstellung von Konzentrations-Wirkungs - Kurven 14,15.
Andere Gruppen haben die direkte akustische Übertragung von Testverbindungen in Lösung in DMSO berichtetZellen für die Langzeittests (> 48 h) ohne Mischschritte erforderlich andere als Inversion der Assayplatte und Inkubation über die Zeit 16,17. DMSO ist hochpolar und ist viel zugänglicher mit wässrigen Lösungen als biologische Proben zu mischen, die in PBS hergestellt und gelagert werden müssen. Wenn daher für die akustische Übertragung von Peptidproben ein automatisiertes Verfahren zur Annahme, haben wir weitere Verfüllung und Zentrifugationsschritte eingesetzt Durchmischung zu gewährleisten, für eine genaue Probenverdünnungsreihen ermöglicht. Unsere Erfahrung zeigt, dass die Zentrifugation allein nicht ausreicht, um die vollständige Vermischung der wässrigen Proben zu gewährleisten und somit eine "wet Übertragung" Verfahren entwickelt, bestehend aus akustischen Übertragung in ein existierendes 10 ul Volumen an wässrigem Puffer, gefolgt von einer 15 ul Verfüllung des gleichen wässrigen Puffer. Es ist nicht möglich, Peptide in eine trockene Quellenplatte zu schießen und dann als eine Macht für kleine Moleküle, wie die wässrige Peptidlösung wieder füllen wird schnell evaNehmens und das Peptid wird auf die trockene Kunststoffplatte irreversibel adsorbieren. Obwohl es nicht wässriger Proben Mischen nicht zu erleichtern, wird der Zentrifugation noch ein Niveau Probe Meniskus zur akustischen Übertragung zu gewährleisten, erforderlich. Die Einbeziehung mehrerer Zwischenübertragungs, Verfüllung und Zentrifugationsschritte ist etwas zeitaufwendig, wenn auch weniger als die manuelle Herstellung großer Zahlen von Proben und die Verwendung von Automatisierungs unüberwachten Durchsatz ermöglicht. Andere haben die Notwendigkeit für eine manuelle Verbindung berichtet 17 in 96-Well - Platten zu mischen. Hier haben wir den Prozess vollständig automatisiert und entfernt die Notwendigkeit für ein manuelles Eingreifen, wenn die Verwendung von DMSO nicht möglich ist. Die Kosten für die Instrumentierung und Verbrauchsmaterialien wird die Anwendung dieses Verfahrens in einigen Einstellungen begrenzen. Wenn dies der Fall ist, empfiehlt es tip-basierte serielle Verdünnungen werden in DMSO immer durchgeführt , wenn die Art der Testprobe zu diesem zugänglich ist (beispielsweise synthetische Peptide). Falls Proben nicht mit DMSO behandelt werden (zBPEGylierte Peptide) Vorsicht ist geboten, wenn Potenz der Interpretation der Daten, da wir zuvor auch die Aufnahme gezeigt haben Konzentrationen von BSA Erhöhung nicht vollständig Adsorption 1 zu verhindern.
Akustisch, Spitze lose Übertragung hat im Zusammenhang zusätzliche Vorteile Assay Miniaturisierung, die unerlässlich ist, wenn Proben knapp / endlich sind, so oft der Fall für Tier- oder menschlichen biologischen Proben, und wir haben bereits beschrieben das Potenzial für das Volumen der Tierproben zu reduzieren, was zu Voraussetzung für weniger Tiere pro Studie 1. Es ist wichtig, sich daran zu erinnern, dass Peptide sind biologische Proben und sollten als solche behandelt werden; um ihre Integrität wiederholen Gefrier-Auftau-Zyklen zu halten, sollten vermieden werden. Biologics ist ein schnell wachsender Bereich neuartiger Therapeutika und unseren automatisierten Hochdurchsatz-Verfahren zur Herstellung von Peptiden kann leicht an andere biologische Mittel, einschließlich von rekombinanten Proteinen und Antikörpern angewendet werden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Hanks’ Balanced Salt solution | Sigma-Aldrich | H8264 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H3375 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A9418 | |
| 3-Isobutyl-1-methylxanthine | Sigma-Aldrich | I7018 | Prepared as a 0.5 M stock in DMSO |
| GLP-1 (7-36) amide | Bachem | H-6795 | Prepared as a 1 mg/ml stock in PBS, referred to as '100x reference control' |
| Test peptides | Produced in-house at MedImmune | Supplied at various concentrations in DMSO or PBS as appropriate | |
| 100x peptide stock | Produced in-house at MedImmune | Test peptide diluted into assay buffer to 100x final required concentration | |
| Trypan Blue Solution, 0.4% | Thermo Fisher Scientific | 15250-061 | |
| Cedex XS Cell Analyzer | Innovatis | ||
| Corning 384 well plates, low volume | Sigma-Aldrich | 4514 | |
| Echo Qualified 384-Well Polypropylene Microplate | Labcyte Inc. | P-05525 | |
| Echo Qualified Reservoir | Labcyte Inc. | ER-0055 | |
| Echo 550 Liquid Handler | Labcyte Inc. | Droplet transfer volumes in increments of 2.5 nl | |
| Echo 525 Liquid Handler | Labcyte Inc. | Droplet transfer volumes in increments of 25 nl | |
| ACell Benchtop Automation | HighRes Biosolutions | MC522 | |
| Cellario Lab Automation Scheduling software for Life Science Robotics | HighRes Biosolutions | ||
| MultidropCombi Reagent Dispenser | ThermFisher Scientific | 5840300 | Referred to as 'bulk reagent dispenser' |
| HTRF cAMP Dynamic 2 kit | Cisbio Bioassays | 62AM4PEJ | |
| EnVision Multilabel Reader | PerkinElmer |
References
- Naylor, J., Rossi, A., Hornigold, D. C. Acoustic Dispensing Preserves the Potency of Therapeutic Peptides throughout the Entire Drug Discovery Workflow. J.Lab.Autom. 21 (1), 90-96 (2016).
- Campbell, J. E., Drucker, D. J. Pharmacology, physiology, and mechanisms of incretin hormone action. Cell.Metab. 17 (6), 819-837 (2013).
- Hui, H., Farilla, L., Merkel, P., Perfetti, R. The short half-life of glucagon-like peptide-1 in plasma does not reflect its long-lasting beneficial effects. Eur.J.Endocrinol. 146 (6), 863-869 (2002).
- Harris, D., Olechno, J., Datwani, S., Ellson, R. Gradient, contact-free volume transfers minimize compound loss in dose-response experiments. J.Biomol.Screen. 15 (1), 86-94 (2010).
- Ekins, S., Olechno, J., Williams, A. J. Dispensing Processes Impact Apparent Biological Activity as Determined by Computational and Statistical Analyses. PLoS ONE. 8 (5), 62325 (2013).
- Goebel-Stengel, M., Stengel, A., Tache, Y., Reeve, J. R. The importance of using the optimal plasticware and glassware in studies involving peptides. Anal.Biochem. 414 (1), 38-46 (2011).
- McDonald, G. R., et al. Bioactive Contaminants Leach from Disposable Laboratory Plasticware. Science. 322 (5903), 917 (2008).
- Belaiche, C., Holt, A., Saada, A. Nonylphenol ethoxylate plastic additives inhibit mitochondrial respiratory chain complex I. Clin Chem. 55 (10), 1883-1884 (2009).
- Sackmann, E. K., et al. Technologies That Enable Accurate and Precise Nano- to Milliliter-Scale Liquid Dispensing of Aqueous Reagents Using Acoustic Droplet Ejection. J.Lab.Autom. 21 (1), 166-177 (2016).
- Grant, R. J., et al. Achieving accurate compound concentration in cell-based screening: validation of acoustic droplet ejection technology. J.Biomol.Screen. 14 (5), 452-459 (2009).
- Turmel, M., Itkin, Z., Liu, D., Nie, D. An Innovative Way to Create Assay Ready Plates for Concentration Response Testing Using Acoustic Technology. J.Lab.Autom. 15 (4), 297-305 (2010).
- Butler, R., et al. Use of the site-specific retargeting jump-in platform cell line to support biologic drug discovery. J.Biomol.Screen. 20 (4), 528-535 (2015).
- Panchal, S., Verma, R. J. Effect of sodium fluoride in maternal and offspring rats and its amelioration. Asian Pac.J.Reprod. 3 (1), 71-76 (2014).
- Hanson, S. M., Ekins, S., Chodera, J. D. Modeling error in experimental assays using the bootstrap principle: understanding discrepancies between assays using different dispensing technologies. J.Comput. Aided Mol.Des. 29 (12), 1073-1086 (2015).
- Harris, D., Olechno, J., Datwani, S., Ellson, R. Gradient, Contact-Free Volume Transfers Minimize Compound Loss in Dose-Response Experiments. J.Biomol. Screen. 15 (1), 86-94 (2010).
- Chan, G. K. Y., Wilson, S., Schmidt, S., Moffat, J. G. Unlocking the potential of high-throughput drug combination assays using acoustic dispensing. J.Lab.Autom. 21 (1), 125-132 (2016).
- Roberts, K., et al. Implementation and challenges of direct acoustic dosing into cell-based assays. J.Lab.Autom. 21 (1), 76-89 (2016).
