Abstract
כמו גילוי תרופות מולקולה קטנה, בדיקות סקר לאיתור אגוניסטים פפטיד מחייב דילול סדרתי של פפטידים לייצר תגובה עקומות ריכוז. הקרנת פפטידים מעניקה שכבה נוספת של מורכבות כמו שיטות טיפול מדגם קונבנציונליות מבוסס קצה לחשוף פפטידים על שטח פנים גדול של plasticware, מתן הזדמנות מוגברת אובדן פפטיד באמצעות ספיחה. מניעת חשיפה מוגזמת plasticware מפחית אובדן פפטיד באמצעות דבקות פלסטיק ובכך מצמצם אי דיוקים חיזוי עוצמה, ואנו בעבר תיאר את היתרונות של אקוסטית ללא מגע מחלק להקרנה במבחנה תפוקה גבוהה של אגוניסטים פפטיד 1. כאן אנו דנים פתרון אוטומציה משולבים במלואם להכנת אקוסטי ללא מגע של דילולים סדרתי פפטיד צלחות microtiter ניצול בדוגמה של ההקרנה עבור אגוניסטים פפטיד על קולטן גלוקגון דמוי עכבר פפטיד-1 (GLP-1R). השיטות שלנו לאפשר גבוה-throughput מבוסס תאי מבחני למסך עבור אגוניסטים והם להרחבה בקלות לתמוך תפוקת מדגם גדלה, או כדי לאפשר למספר גדול יותר של עותקי צלחת assay (למשל, עבור פנל של קווים נוספים תא המטרה).
Introduction
של GLP-1R מהווה יעד תרופה קיימת לטיפול בסוכרת מסוג 2 2. אגוניסט פפטיד המקורי עבור קולטן זה, GLP-1, יש in vivo זמן מחצית חיים של 2-3 דק '3. הכריכה של GLP-1 לתוצאות קולטן היעד מצמידים חלבון G שלה בייצור במורד הזרם של cAMP השליח השני באמצעות צימוד חלבון יליד ז 'ההפעלה של cyclase adenylyl. מדידה במחנה שנצבר מספקת assay חזק כדי לפקח הפעלת קולטן ו למסך אנלוגים GLP-1 פעילים עם מאפייני physicochemical מועדפים. כזה assay מחייב דילול סדרה של דגימות בדיקה לבנות תגובה עקומה ריכוז, וזה מסובך במיוחד בעת מסירת דגימות פפטיד. שגיאות פוטנציאליות מהכנת דילול סדרה מבוסס קצה תוארו בעבר 1,4,5. פפטידים יהיה לספוג plasticware, וכתוצאה מכך הערכות עצמה אמינות. ניתן למזער אובדן פפטיד באמצעות tהוא הכללת אלבומין בסרום שור (BSA) מאגרים ושימוש plasticware siliconized, עדיין חלבון מחייב נשאר בלתי צפויות. בפרט, וריאציה עקדת GLP-1 למיכלי ניסיוני תוארה 6. יש סיבוך נוסף סוכני ייצוב לזה המשמש plasticware מעבדה יכול לסנן מן טיפי צלחות microtiter לתוך מאגרי assay מימית ולהפריע חלבון פונקציה 7, 8. לכן, שיטות להקטין את חשיפת plasticware נחוצה כדי לשפר את מידת הדיוק של מדידות.
מכשירי נוזלי אקוסטיות להתמקד צליל האקוסטי בתדירות גבוהה על פני השטח של מדגם נוזל, וכתוצאה מכך הוא הוצאתן של טיפות nanoliter מדויקות לתוך צלחת assay סמוכה 9. השימוש של פליטה אקוסטית הוא סטנדרטי בתעשיית התרופות לעריכת הקרנת ספריות תרכובת סינטטיות גדולות, ואת הטכנולוגיה תאומת טוב molecul הקטןes 10. למיטב ידיעתנו, אנחנו הקבוצה הראשונה לתאר מחלק אקוסטי לעריכת פפטידים רקומביננטי וסינטטיים ואנחנו בעבר דיווחנו על הדיוק המשופר בהשוואה לשיטות קצה מבוסס קונבנציונליות 1.
מאמר זה מתאר את האינטגרציה של הכנת דילולים סדרתי וישיר פפטיד בהעברה אקוסטי ללא מגע על גבי מערכת רובוטיקה טיפול צלחת אוטומטי לחלוטין. מספר השיטות המקיפות העברת אקוסטי של דגימות תוארו בעבר 11. אנו מנצלים שיטת שני שלבים להכין ריכוזי מניות ביניים לדלל אנלוגים פפטיד סדר עבור הדור של עקומת מנה-תגובה המלאה. פפטידים מוכן מודגרת עם תאים המבטאים את עכבר היעד GLP-1R, ואנו משתמשים קרינת זמן נפתר הומוגנית זמין מסחרי (HTRF) assay למדוד הצטברות cAMP בתוך התאים האלה כמו הודעה של activ אגוניסט פפטידity. Assay הוא חזק מקובל בפורמט תפוקה גבוהה 384 גם ויישמנו באופן שיגרתי הוא בפיתוח assay הקרנת סמי פרויקטים 12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. דילול סדרתי פפטיד
- הכן חיץ assay: הנקס שנאגרו תמיסת מלח (HBSS) השלימו עם 25 HEPES מ"מ, BSA 0.1% ו -0.5 מ"מ 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX), pH 7.4.
- השתמש מנפק מגיב בתפזורת להוסיף באופן שיטתי 5 μl של חיץ assay היטב בכל חמש 384 גם צלחות assay בנפח נמוכות.
- השתמש בתוכנה פנימית ליצירת תכנית מחלק לתוספת נפח 5 μl לכל גם צלחת 384-גם לפי הוראות יצרן.
- לטבול מחלק צינורות קלטת חיץ assay נוזל הממשלה.
- מניחים צלחת assay בנפח נמוך 384 גם על נושאת צלחת.
- לחץ התחל.
- לדלל כל דגימות פפטיד, ללא קשר לרכב אחסון, למאגר assay לייצר מלאי פפטיד 100x.
הערה: פפטידים מחייב הקרנה ניתן לספק מלוח פוספט שנאגר (PBS) או sulfoxide דימתיל (DMSO) כפי שייראה לו (למשל, DMSO wחולה יש השפעה מזיקה על פפטידים עם שינויים משניים כגון PEGylation). - לוותר 25 μl מניות פפטיד 100x לעמודות 1-5 של microplate פוליפרופילן מוסמך אקוסטית 384 גם. צלחת זו מיועדת ל'מקור צלחת '. ודא צלחות מקור, אך לא צלחות יעד, הם תחתיים שטוחים להתאים לסיבולות אקוסטי ספציפית כפי שהוגדר על ידי היצרן של כלים אקוסטיים.
- לוותר 25 μl 100x מלא התייחסות אל בארות A23 ו A24 של א צלחת המקור
- לוותר חיץ assay 10 μl לעמודות 11-15 ו -30 חיץ assay μl לעמודות 21-22 א צלחת מקור
- לוותר חיץ assay 10 μl לעמודות 6-10 ועמודות 16-20 של microplate פוליפרופילן השני מוסמך אקוסטית 384 גם. צלחת זו מיועדת ל'מקור צלחת ב '.
- A ו- B צלחות מקור צנטריפוגה XG ב 300 דקות 1. כלול צלחת איזון ראויה.
- השתמש flui אקוסטימכשירי ד משולב לתוך מערכת רובוטית אוטומטית להכין שלושה רציפים 1: דילולים ביניים 100 (חיץ assay) של מניות פפטיד 100x מעמודה 1 במקור א
הערה: תכנות דורש לעצב מחדש צלחת ותוכנת מנת תגובה (כפי שנמסר על ידי היצרן של מנפק נוזל אקוסטי) כדי לאפשר שלוש העברות אקוסטי בין מקור ומקור B (ראה איור 1 עבור פריסות צלחת). שלב 1.9 פרטים במיוחד השימוש של מכשירי נוזל המשמשים במעבדה זו בשליטת רובוטיות אוטומטית (ראה לוח חומרים):- צלחות מקור טען וצלחות assay לתוך קטע רובוטיקה מלון צלחת.
- להרחיב אוטומטי לעצב מחדש צלחת תוכנת עומס רובוטית ופרוטוקולי הרחבת תכנית מנת תגובה. לחץ על 'הפעלה'.
הערה: אוטומציה מורה מנפק נוזל אקוסטי להעביר 250 NL מעמודות 1-5 של מקור צלחת לעמודות 6-10 של מקור צלחת B, וכן acousti השניג מנפק נוזל מסוגל להתמודד עם כמויות נוזלים גדולות להשלים רווחים עם 15 μl חיץ assay לערבב. אוטומציה ואז מעבירה מקור צלחת ב 'צנטריפוגות משולבת צנטריפוגות ב XG 300 דקות 1 (צלחת איזון ראויה כלולה עבור כל צעדי צנטריפוגה). B צלחת מקור מוחזר מנפק נוזל אקוסטי להעברת 250 NL מעמודות 6-10 המקור צלחת B לעמודות 11-15 של צלחת המקור למילוי עם חיץ assay 15 μl לערבב. אוטומצית מקור העברות צלחת א 'עד צנטריפוגות צנטריפוגות משולבות XG ב 300 דקות 1. צלחת מקור ואז מוחזר מנפק נוזל אקוסטי להעברת 250 NL מעמודות 11-15 של צלחת המקור לתוך עמודות 16-20 של B צלחת המקור למילוי עם חיץ assay 15 μl לערבב. אוטומציה ואז מעבירה מקור צלחת ב 'צנטריפוגות משולבת צנטריפוגות ב XG 300 דקות 1.
הערה: לבסוף פרוטוקול מנת התגובה מפנה מחלק אקוסטי להעבירהנפח הנדרש מכל אחד 4 בארות צלחת המקור בדילול סדרתי (בשני צלחת המקור ומקור צלחת B) לבנות עקום 11 נקודות מלאות בשני עותקי צלחות assay (טרום מלא חיץ assay 5 μl בשלב 1.2 לעיל ). העברות אוטומציה צלחת assay כדי צנטריפוגות משולב צנטריפוגות ב XG 300 דקות 1.
2. תא הכנה
- שחלה של אוגר סיני cryopreserved ההפשרה (CHO) התאים המבטאים את הקולטן ל- GLP-1 העכבר היעד במהירות באמבט 37 ºC מים resuspend במאגר assay 20 מ"ל.
- ההשעיה תא צנטריפוגה במשך 5 דקות ב 200 XG בטמפרטורת החדר (RT). כלול איזון ראוי.
- בטל supernatant ו resuspend תא גלולה במאגר assay 10 מ"ל.
- לדלל תא מניות 1: 1 בכחול Trypan ולקבוע צפיפות תאי קיימא באמצעות דלפק תא אוטומטי. תאים Resuspend במאגר assay ב 1.6 x 10 6 תאים לכל מ"ל (שווה ערך ל 8,000 תאים לכל well של צלחות assay).
- השתמש מנפק מגיב בתפזורת להוסיף 5 μl של ההשעיה תא היטב כל צלחות assay (המכיל פפטידים בדילול סדרתי חיץ assay 5 μl) ו לדגור על RT למשך 30 דקות.
3. Assay איתור HTRF cAMP
- תביאו ערכת assay HTRF cAMP ל RT למשך 30 דקות לפני השימוש.
- הכן כל מגיב HTRF (cryptate ו- D2) בנפרד בשעה 1:20 דילול במאגר תמוגה (ניסוח קניינית, המסופקים על ידי היצרן של assay זיהוי cAMP).
הערה: זהירות: תמוגה חיץ מכיל פלואוריד אשלגן (KF) שהוא רעיל וכן teratogen 13. למידע אודות השלכה, צלחות assay המכילות KF צריכות להיות אטומות לאפר, וכל פסולת נוזלית חייבת להיות מדוללת ל <1 מילימול / ליטר עם מים לפני הסילוק לתוך הכיור. - השתמש מנפק מגיב בתפזורת להוסיף מגיב cryptate 5 μl לכל הבארות של צלחות assay.
- השתמש מנפק מגיב בתפזורת להוסיף מגיב D2 5 μl כדי קולוםns 1-22 של צלחות assay.
- מיד ידני פיפטה חיץ תמוגה 5 μl לתוך בארות A23-D24 של צלחות assay לתת ספציפיים שאינם מחייבים (NSB) בארות שליטה, ו -5 μl של מגיב D2 לתוך בארות E23-p24.
- צנטריפוגה צלחות assay דקות 1 ב 200 XG ב RT לערבב את הבארות.
- מכסה את צלחות assay למזער התאדות צילום הלבנה לדגור על RT במשך שעה 1.
- מדוד תהודת העברת אנרגית פלואורסצנטי (סריג) אות באמצעות עירור ב 320 ננומטר פליטה ב 620 ננומטר ו 665 ננומטר באמצעות קורא צלחת.
ניתוח 4. נתונים
- השתמש מתכוון NSB לחסר רקע מכל הבארות.
- חישוב% דלתא F מיחס 665 ננומטר / 620 ננומטר כדלקמן:
יחס = (A 665nm / A 620nm) x 10 4
דלתא F = ((יחס לדוגמה - יחס NSB) / יחס NSB)) x 100
שם יחס NSB = בארות ללא מגיב D2. - חישוב activat%יון בין תאים ותאי unstimulated מגורה עם ליגנד GLP-1 המרבי כדלקמן:
הפעלת% = (% דלתא Fsample -% תאים DeltaFunstimulated) / (% מגורה DeltaFGLP-1 תאים -% תאים unstimulated DeltaF) x 100 - לנתח עקומות ריכוז תגובה באמצעות ניתוח לוגיסטי 4-פרמטר, וגרף כפי הפעלת% כפי שהוגדר על ידי התייחסות מלאה 1.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
אנו משתמשים באופן שגרתי בשיטה דו-צעד כדי לדלל פפטידים באמצעות העברה אקוסטית. עבור השלב הראשון, מנפק אקוסטי מיושר עם אוטומציה משמש ליצירת ארבעה דילולים ביניים פפטיד המניות על פני שני לוחות מקור (איור 1 א, ב). עבור השלב השני, אנו משתמשים מנפק אקוסטית נוספת לדלל דילולים המניות מצלחות מקור A ו- B כדי ליצור טווח הריכוז 11 נקודות עבור כל הפפטיד הבדיקה (איור 1 ג '). כל טווח ריכוז פפטיד הוא ירה בשני עותקים, משמאל לימין על פני צלחת assay, המאפשר 16 פפטידים שונים שיוקרו לכל 384 גם צלחת assay (איור 1 ג '). מילוי חוזר חיץ assay מבוצע כדי להבטיח נפח קבוע לכל טוב על פני הצלחת assay (1D איור). הפנית פפטיד בקרות חיוביות גם מועברות לתוך צלחות יעד בריכוז אפקטיבי מקסימאלי.
אף אוזן גרון. "FO: keep-together.within-page =" 1 "> פלטות לקרוא באמצעות קורא צלחת ניאון, וגם מפת חום עבור צלחת למשל המכיל 16 פפטידים בשני עותקים מוצג (איור 2 א) את assay הצטברות cAMP בשימוש הוא assay תחרות הפוך, ערכים נמוכים וכך (כפי שמוצג סגול) מייצג ריכוז גבוה של cAMP. שחזור של נקודות כפולות מתגלה גם כאשר מתבטאים נתונים כמו עקומות תגובת ריכוז (איור 2b). לדוגמא 1 (שורה, איור 2 א) מייצג כביקורת חיובית עבור assay. 2 דוגמאות, 3 ו -4 (שורות B, C ו- D בהתאמה, איור 2 א) היו פעילים ו משווים לקווי שטוח איור 2b. דוגמאות 5-16 (שורות ה 'P) מייצגים פעיל פפטידים הבדיקה. השיטה מאפשרת הדור של עקומות ריכוז מענה מלא על פני מגוון רחב עוצמה. תרשים זרימה המפרט את זרימת העבודה כולו מוצג 
איור 1:. פלייט פריסות תיאור אקוסטי מחלק שיטת דילול סדרתי. (A, b) פריסה של צלחות מקור 384 גם ו- B המכיל 25 μl של 100x ריכוז מניות של כל פפטיד (למשל עם 80 פפטידים אפשריים לכל צלחת מקור), 100x בקרה חיובית, חיץ בלבד assay בארות למילוי חוזר, ו שלוש 1: 100 דילולים סידוריים של כל פפטיד שהכין העברת מילוי חוזר אקוסטי אוטומטיים בין לוחות המקור שניהם. (ג) פריסת צלחת assay יחידה מציגה טווח ריכוז 11 נקודות עבור 16 פפטידים בשני עותקים על פני הצלחת. (ד) פרוטוקול לוותר אופייני עבור מגוון ריכוז 11 נקודות ב 10 נפחי assay סופיים μl. כל בארות היעד יש מילוי חוזר חיץ assay לספק vo העברה הסופי מתמיד lume של 100 nl היטב. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. 
איור 2: מפת חום מנת תגובה עקומה מפת החום מראה קרינה ב ננומטר A665.. (א) טווח ריכוז 11 נקודות עבור 16 פפטידים בשני עותקים על פני הצלחת. סגול עולה ריכוז גבוה של cAMP (מקסימום), אדום עולה ריכוז נמוך של cAMP (דקות). (ב) תגובה עקומה ריכוז נציג פפטיד מתוך assay צלחת האחת מראה מגוון של פעילויות פפטיד אגוניסט לקולטן GLP-1 נגד עכבר GLP-1R לבטא בתאים (16 תרכובות). נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. 
איור 3:.. תרשים זרימה של תהליך מיון הפירוט של כל העבודה אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
פרוטוקול זה מתאר את היישום המוצלח של מחלק אקוסטי האוטומטי לדלל דגימות פפטיד סדרתי על פני טווח ריכוז של 3 x 10 6 הדורשים פחות מ -1 μl של מדגם. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא לשפר את איכות נתונים באמצעות מזעור ספיחת פפטיד plasticware באמצעות לחשיפה מצומצמת של דגימות למכלי ניסיוני plasticware (כגון טיפי פיפטה) כי נדרשים בדרך כלל להעברת מגיב ערבוב. בעוד מחלק אקוסטית לא לגמרי פוסל את השימוש plasticware, זה להפחית באופן משמעותי. יתר על כן, את הסרת pipetting מבוסס קצה גם מבטלת שריד מדגם, ושגיאות אינן מופצות ברחבי דילול סדר כולו, המאפשר הן הכנה אמינה לשחזור של עקומות ריכוז תגובת 14,15.
קבוצות אחרות דיווחו העברת אקוסטי הישירה של תרכובות בדיקת solubilized ב DMSOתאים עבור מבחנים לטווח ארוך (> 48 שעות) ללא מדרגות ערבוב נדרשו מלבד היפוך של צלחת assay דגירה לאורך זמן 16,17. DMSO מאוד הקוטב הוא נוח יותר לקבל ערבוב עם תמיסות מימיות מ דגימות ביולוגיות כי חייב להיות מוכן ומאוחסן PBS. לכן, כאשר אימוץ שיטה אוטומטית להעברת אקוסטי של דגימות פפטיד, יש לנו עובדים צעדים המילוי החוזר צנטריפוגה נוספות כדי להבטיח ערבוב יסודי, המאפשר דילול סדרתי מדגם מדויק. ניסיוננו מלמד כי צנטריפוגה לבדו אינה מספיק כדי להבטיח ערבוב מלא של דגימות מימיות, ולכן, שיטת 'העברה רטובה "פותחה מורכב העברת האקוסטית לתוך נפח 10 μl קיימים של חיץ מימי, ואחריו מילוי חוזר 15 μl של אותו חיץ מימי. לא ניתן לפטר פפטידים לתוך צלחת מקור יבשה ולאחר מכן חזרה למלא כפי שעושה עבור מולקולות קטנות, כפתרון פפטיד המימי תהיה במהירות evaporate ואת פפטיד יהיה לספוג באופן בלתי הפיך לצלחת הפלסטיק היבשה. למרות שזה אינו מסייע ערבוב של דגימות מימיות, צנטריפוגה עדיין נדרשת כדי להבטיח המניסקוס מדגם רמה להעברת אקוסטית. הכללת העברה מרובה ביניים, מילוי חוזר צנטריפוגה צעדים היא מעט זמן רב, אם כי פחות מאשר הכנה ידנית של מספר רב של דגימות, ושימוש אוטומציה מאפשרת קצב העברת נתונים ללא השגחה. אחרים דיווחו על הצורך המתחם ידני ערבוב 96-גם צלחות 17. כאן יש לנו את התהליך לאוטומטי לחלוטין הסיר את הצורך בהתערבות ידנית כשהשימוש DMSO אינו אפשרי. עלות המכשור ומתכלה תגביל את השימוש של תהליך זה חלק מההגדרות. אם זה מקרה, אנו ממליצים דילולי סדרה מבוסס קצה תמיד מבוצעים DMSO אם האופי של מדגם הבדיקה ניתן זה (לדוגמא, פפטידים סינטטיים). אם דגימות לא יכולים להיות מטופלים עם DMSO (למשל,פפטידים PEGylated) יש להיזהר בשימוש כאשר לפרש נתונים עוצמה, מאז אנחנו בעבר הראו גם הכללת ריכוז גדל והולך של BSA לא ימנע לחלוטין ספיחה 1.
אקוסטית, טיפ-פחות העברה יש יתרונות נוספים הקשורים מזעור assay שהוא חיוני אם דגימות נדירות / סופיות כפי שקורה לעתים קרובות עבור בעלי חיים או דגימות ביולוגיות אדם, ואנו בעבר תארו את הפוטנציאל לצמצום היקף דגימות חיים המובילים דרישה לבעלי חיים פחות לכל מחקר 1. חשוב לזכור כי פפטידים הם דגימות ביולוגיות יש לטפל ככזה; על מנת לשמור על להקפיא להפשיר מחזורים חוזרים שלמותם יש להימנע. מוצרים ביולוגיים הוא אזור גדל במהירות של הרפוי רומן, ושיטת התפוקה גבוהה האוטומטית שלנו לעריכת פפטידים יכולה בקלות להיות מיושמת על גורמים ביולוגיים אחרים, כוללת חלבונים ונוגדנים רקומביננטי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Hanks’ Balanced Salt solution | Sigma-Aldrich | H8264 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H3375 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A9418 | |
| 3-Isobutyl-1-methylxanthine | Sigma-Aldrich | I7018 | Prepared as a 0.5 M stock in DMSO |
| GLP-1 (7-36) amide | Bachem | H-6795 | Prepared as a 1 mg/ml stock in PBS, referred to as '100x reference control' |
| Test peptides | Produced in-house at MedImmune | Supplied at various concentrations in DMSO or PBS as appropriate | |
| 100x peptide stock | Produced in-house at MedImmune | Test peptide diluted into assay buffer to 100x final required concentration | |
| Trypan Blue Solution, 0.4% | Thermo Fisher Scientific | 15250-061 | |
| Cedex XS Cell Analyzer | Innovatis | ||
| Corning 384 well plates, low volume | Sigma-Aldrich | 4514 | |
| Echo Qualified 384-Well Polypropylene Microplate | Labcyte Inc. | P-05525 | |
| Echo Qualified Reservoir | Labcyte Inc. | ER-0055 | |
| Echo 550 Liquid Handler | Labcyte Inc. | Droplet transfer volumes in increments of 2.5 nl | |
| Echo 525 Liquid Handler | Labcyte Inc. | Droplet transfer volumes in increments of 25 nl | |
| ACell Benchtop Automation | HighRes Biosolutions | MC522 | |
| Cellario Lab Automation Scheduling software for Life Science Robotics | HighRes Biosolutions | ||
| MultidropCombi Reagent Dispenser | ThermFisher Scientific | 5840300 | Referred to as 'bulk reagent dispenser' |
| HTRF cAMP Dynamic 2 kit | Cisbio Bioassays | 62AM4PEJ | |
| EnVision Multilabel Reader | PerkinElmer |
References
- Naylor, J., Rossi, A., Hornigold, D. C. Acoustic Dispensing Preserves the Potency of Therapeutic Peptides throughout the Entire Drug Discovery Workflow. J.Lab.Autom. 21 (1), 90-96 (2016).
- Campbell, J. E., Drucker, D. J. Pharmacology, physiology, and mechanisms of incretin hormone action. Cell.Metab. 17 (6), 819-837 (2013).
- Hui, H., Farilla, L., Merkel, P., Perfetti, R. The short half-life of glucagon-like peptide-1 in plasma does not reflect its long-lasting beneficial effects. Eur.J.Endocrinol. 146 (6), 863-869 (2002).
- Harris, D., Olechno, J., Datwani, S., Ellson, R. Gradient, contact-free volume transfers minimize compound loss in dose-response experiments. J.Biomol.Screen. 15 (1), 86-94 (2010).
- Ekins, S., Olechno, J., Williams, A. J. Dispensing Processes Impact Apparent Biological Activity as Determined by Computational and Statistical Analyses. PLoS ONE. 8 (5), 62325 (2013).
- Goebel-Stengel, M., Stengel, A., Tache, Y., Reeve, J. R. The importance of using the optimal plasticware and glassware in studies involving peptides. Anal.Biochem. 414 (1), 38-46 (2011).
- McDonald, G. R., et al. Bioactive Contaminants Leach from Disposable Laboratory Plasticware. Science. 322 (5903), 917 (2008).
- Belaiche, C., Holt, A., Saada, A. Nonylphenol ethoxylate plastic additives inhibit mitochondrial respiratory chain complex I. Clin Chem. 55 (10), 1883-1884 (2009).
- Sackmann, E. K., et al. Technologies That Enable Accurate and Precise Nano- to Milliliter-Scale Liquid Dispensing of Aqueous Reagents Using Acoustic Droplet Ejection. J.Lab.Autom. 21 (1), 166-177 (2016).
- Grant, R. J., et al. Achieving accurate compound concentration in cell-based screening: validation of acoustic droplet ejection technology. J.Biomol.Screen. 14 (5), 452-459 (2009).
- Turmel, M., Itkin, Z., Liu, D., Nie, D. An Innovative Way to Create Assay Ready Plates for Concentration Response Testing Using Acoustic Technology. J.Lab.Autom. 15 (4), 297-305 (2010).
- Butler, R., et al. Use of the site-specific retargeting jump-in platform cell line to support biologic drug discovery. J.Biomol.Screen. 20 (4), 528-535 (2015).
- Panchal, S., Verma, R. J. Effect of sodium fluoride in maternal and offspring rats and its amelioration. Asian Pac.J.Reprod. 3 (1), 71-76 (2014).
- Hanson, S. M., Ekins, S., Chodera, J. D. Modeling error in experimental assays using the bootstrap principle: understanding discrepancies between assays using different dispensing technologies. J.Comput. Aided Mol.Des. 29 (12), 1073-1086 (2015).
- Harris, D., Olechno, J., Datwani, S., Ellson, R. Gradient, Contact-Free Volume Transfers Minimize Compound Loss in Dose-Response Experiments. J.Biomol. Screen. 15 (1), 86-94 (2010).
- Chan, G. K. Y., Wilson, S., Schmidt, S., Moffat, J. G. Unlocking the potential of high-throughput drug combination assays using acoustic dispensing. J.Lab.Autom. 21 (1), 125-132 (2016).
- Roberts, K., et al. Implementation and challenges of direct acoustic dosing into cell-based assays. J.Lab.Autom. 21 (1), 76-89 (2016).
