Abstract
Как и в случае небольшого обнаружения наркотиков молекулы, скрининг пептидных агонистов требует последовательного разведения пептидов для получения кривых концентрация-ответ. Скрининг пептидов обеспечивает дополнительный уровень сложности, как обычные методы обработки образцов наконечников на основе пептидов, разоблачить на большой площади поверхности из пластмассы, что обеспечивает повышенную возможность потери пептида посредством адсорбции. Предотвращение чрезмерного воздействия снижает потери из пластмассы пептида посредством присоединения к пластмассам и , таким образом , сводит к минимуму неточности в прогнозировании потенции, и ранее мы описали преимущества бесконтактной акустических раздаточного для высокопроизводительного скрининга в пробирке пептидных агонистов 1. Здесь мы обсудим полностью интегрированное решение автоматизации для бесконтактного акустической подготовки пептидных серийных разведений в микротитровальных планшетах с использованием в качестве примера для скрининга пептидных агонистов у мышей глюкагон-подобный пептид-1 рецептора (GLP-1R). Наши методы позволяют высокой-throughput клеток на основе анализов для скрининга агонистов и легко масштабируются для поддержки повышенную пропускную способность образца, или для обеспечения увеличения числа копий планшета для анализа (например, для панели более целевых клеточных линий).
Introduction
GLP-1R является признанным целевой препарат в лечении сахарного диабета 2 типа 2. Нативный пептидного агониста рецептора для этого, ГПП-1, имеет в естественных условиях полураспада 2-3 мин 3. Связывание ГПП-1 с его белком мишени приводит рецепторов G в нисходящем производства вторичного мессенджера цАМФ через нативного белка муфте G к активации аденилатциклазы. Измерение накопленного цАМФ обеспечивает надежный анализ для контроля за активацию рецептора и экран для активных GLP-1 аналоги с предпочтительными физико-химическими свойствами. Такой анализ требует серийного разведения образцов тест построить кривые зависимости ответа от концентрации, и это особенно сложным при передаче пептидных образцов. Потенциальные ошибки от зондового подготовки последовательного разбавления были описаны ранее 1,4,5. Пептиды будет адсорбироваться из пластмассы, что приводит к недостоверным потенцией оценок. Потеря Пептид может быть сведено к минимуму с помощью тон включение бычьего сывороточного альбумина (БСА) в буферах и использование силиконизированный, все же из пластмассы связывания с белками остается непредсказуемой. В частности, изменение связывания GLP-1 в экспериментальных контейнерах было описано 6. Существует еще одна сложность в том , что стабилизационные агенты , используемые в лаборатории из пластмассы могут вымываться из советов и микротитровальных пластин в водные буферы анализа и препятствуют функции белка 7, 8. Поэтому методы для уменьшения воздействия Пластик необходимы для повышения точности измерений.
Акустические жидкие распылители фокусировать звуковой сигнал высокой частоты на поверхность образца жидкости, что приводит к выбросу капельки точных nanoliter в смежную планшет для анализа 9. Использование акустического выброса является стандартом в фармацевтической промышленности для подготовки и скрининга больших синтетических библиотек соединений, а технология была хорошо подтверждена для малых moleculэс 10. Насколько нам известно, мы первая группа для описания акустического дозирования для получения рекомбинантных и синтетических пептидов , и мы уже ранее сообщали улучшенную точность по сравнению с обычными зондовых методов , основанных на 1.
В данной статье описывается интеграция получения пептидных последовательных и прямых разбавление бесконтактной передачи акустической на полностью автоматизированной обработки пластин роботизированной системы. Ряд методов , охватывающих акустический перенос образцов были описаны ранее 11. Мы используем двухступенчатый метод для подготовки промежуточных концентраций запаса и серийно разбавить пептидные аналоги для генерации полной кривой доза-реакция. Полученные пептиды инкубируют с клетками, экспрессирующими целевой мыши GLP-1R, и мы используем имеющиеся в продаже гомогенным с временным разрешением флуоресценции (HTRF) анализа для измерения накопления цАМФ внутри этих клеток в качестве считывании пептидных агонистов Activность. Анализ является надежной и поддаются высокой пропускной формате 384-луночного и обычно применяется как для анализа развития и скрининг лекарств проектов 12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Пептид серийным разведением
- Подготовка буфера для анализа: Хенкса солевой раствор (HBSS) с добавлением 25 мМ HEPES, 0,1% BSA и 0,5 мМ 3-изобутил-1-метилксантина (IBMX), рН 7,4.
- Используйте насыпную дозатор реагента систематически добавляют 5 мкл буфера для анализа в каждую лунку пяти 384-луночных низких анализируемый объем пластин.
- Используйте внутреннее программное обеспечение, чтобы создать программу для раздаточного 5 мкл объема дополнение к каждой лунку 384-луночного планшета в соответствии с инструкциями изготовителя.
- Погрузитесь дозирования кассеты трубки в буфере для анализа и премьер жидкости.
- Поместите 384-низкий объем пробы пластины на несущей пластине.
- Нажмите старт.
- Развести все образцы пептидов, независимо от того, транспортное средство хранения, в буфере для анализа с получением 100x пептидный запас.
Примечание: Пептиды , требующие скрининга могут быть представлены в фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) или диметилсульфоксиде (ДМСО) в качестве сочтено целесообразным (например, ДМСО Wбольным оказывают вредное влияние на пептиды с вторичными изменениями, такими как ПЭГилированием). - 25 мкл 100x акции пептидные в колонках 1-5 акустически квалифицированных 384-луночного полипропиленового микропланшет. Эта пластина обозначена 'источник пластины А'. Убедитесь в том, что исходные пластины, но не назначения плиты, плоские дном и соответствовать определенным акустическим допусков, как это определено изготовителем акустических инструментов.
- 25 мкл 100x эталонного контроля в лунки А23 и А24 из источника пластины А.
- Разлить 10 мкл буфера для анализа в колонках 11-15 и 30 мкл буфера для анализа в колонках 21-22 источника пластины А.
- Разлить 10 мкл буфера для анализа в колонках 6-10 и столбцы 16-20 второго акустически квалифицированным 384-луночного полипропиленового микропланшет. Эта пластина обозначена 'источник пластины B'.
- Центрифуга исходные пластины А и В при 300 мкг в течение 1 мин. Включите соответствующий баланс пластины.
- Использование акустической Флуиг диспенсеры интегрированы в автоматизированную систему роботизированной подготовить три последовательных 1: 100 промежуточных разведений (в аналитическом буфере) от 100x пептидных запасов из колонки 1 в исходном А.
ПРИМЕЧАНИЕ: Программирование требует переформатирования пластины и программное обеспечение ответа от дозы (как это предусмотрено изготовителем дозатора акустической жидкости) , чтобы обеспечить три акустические передачи между источниками А и источника B (см рисунок 1 для плит макетов). Шаг 1.9 детали конкретно использование жидкостных распылителей , используемых в этой лаборатории под автоматизированного роботизированного контроля (см Материалы таблицу):- Нагрузка Источник пластины и аналитические планшеты в пластины отеля секции робототехники.
- Open роботизированная программного обеспечения и загрузки пластины переформатирование и протоколы расширения программы доза-ответ. Нажмите кнопку "Выполнить".
Примечание: Автоматизация инструктирует акустический дозатор жидкости для передачи 250 NL из столбцов 1-5 исходной пластины А в колонках 6-10 из источника пластины B, и второй acoustiс жидкостью дозатор способен обрабатывать большие объемы жидкости для обратной засыпки с 15 мкл буфера для анализа для смешивания. Автоматизация затем передает источник пластины B к интегрированным центрифуге и центрифугах при 300 мкг в течение 1 мин (соответствующий баланс пластины включен для всех этапов центрифугирования). Источник пластина B возвращается к дозатору акустической жидкости для передачи 250 нл из колонок 6-10 из исходной пластины B в колонках 11-15 исходной пластины А и обратной засыпки с 15 мкл буфера для анализа, чтобы перемешать. Автоматизация передает источник пластины А интегрированный центрифуге и центрифуг при 300 мкг в течение 1 мин. Источник пластины А затем возвращается к дозатору акустической жидкости для передачи 250 нл из столбцов 11-15 исходной пластины А в колонках 16-20 исходного пластины B и засыпки с 15 мкл буфера для анализа, чтобы перемешать. Автоматизация затем передает источник пластины B к интегрированным центрифуге и центрифуг при 300 мкг в течение 1 мин.
Примечание: Наконец протокол доза-ответ направляет акустическую раздачу передаватьтребуемый объем от каждого из 4-х серийно разведенными скважин источника пластины (как в исходной пластины А и источника пластины В), чтобы построить полную кривую 11-балльной в двух экземплярах в планшеты для анализа (предварительно заполненный 5 мкл буфера для анализа на шаге 1.2 выше ). переводы Автоматизация планшета для анализа в интегрированной центрифуге и центрифуги при 300 мкг в течение 1 мин.
2. Подготовка сотового
- Оттепель криоконсервированных яичника китайского хомячка (СНО), экспрессирующие рецептор целевой мыши GLP-1 быстро в 37 ° С на водяной бане и ресуспендируют в 20 мл буфера для анализа с.
- Центрифуга клеточной суспензии в течение 5 мин при 200g при комнатной температуре (RT). Включите соответствующий баланс.
- Удалите супернатант и ресуспендируют осадок клеток в 10 мл буфера для анализа.
- Развести сотовому складе 1: 1 в трипанового синего и определения жизнеспособной плотности клеток с использованием автоматического счетчика клеток. Ресуспендируют клеток в буфере для анализа при 1,6 × 10 6 клеток на мл ( что эквивалентно 8000 клеток на достл планшеты для анализа).
- Используйте насыпную дозатор реагента для добавления 5 мкл суспензии клеток в каждую лунку планшеты для анализа (содержащие пептиды, серийно разбавленных в 5 мкл буфера для анализа) и инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин.
3. HTRF обнаружения цАМФ анализа
- Доведите HTRF цАМФ набора для анализа до комнатной температуры в течение 30 мин перед использованием.
- Подготовка каждого HTRF реагента (криптат и d2) отдельно при разбавлении 1:20 в буфере для лизиса (патентованного препарата, предоставленного производителем анализа для обнаружения цАМФ).
Примечание: ВНИМАНИЕ: Лизис буфер содержит фторид калия (KF) , который является токсичным и тератогеном 13. Для утилизации, аналитические планшеты, содержащие KF должны быть герметизированы и сжигаются, и любые жидкие отходы должны быть ослаблены до <1 ммоль / л с водой перед удалением вниз раковиной. - Используйте насыпную дозатор реагента для добавления реагента криптатом 5 мкл во все лунки планшеты для анализа.
- Используйте объемный дозатор реагента для добавления реагента d2 5 мкл в Columнс 1-22 из аналитических планшетов.
- Немедленно вручную пипеткой 5 мкл буфера для лизиса в лунки А23-D24 пробирного пластин, чтобы дать неспецифического связывания (NSB) контрольные лунки, и 5 мкл реагента d2 в лунки E23-P24.
- Центрифуга Планшеты в течение 1 мин при 200g при комнатной температуре, чтобы смешивать лунки.
- Накройте Планшеты свести к минимуму испарение и фото-отбеливание и инкубируют при комнатной температуре в течение 1 часа.
- Измерение сигнала флуоресценции резонансного переноса энергии (FRET) с использованием возбуждения при 320 нм и излучение на длине волны 620 нм и 665 нм с использованием планшет-ридера.
Анализ 4. Данные
- Используйте NSB значит вычесть фон из всех лунок.
- Рассчитать% Delta F от 620/665 нм соотношение нм следующим образом:
Отношение = (A 665nm / A 620nm) х 10 4
Delta F = ((Образец Ratio - Коэффициент NSB) / Коэффициент NSB)) х 100
где коэффициент NSB = скважины с реагентом не Д2. - Вычислить% activatионов между нестимулированных клеток и клеток, стимулированных максимальной GLP-1 лиганда, следующим образом:
% Активации = (% Delta Fsample -% DeltaFunstimulated клетки) / (% DeltaFGLP-1 стимулируются клетки -% DeltaF нестимулированных клеток) × 100 - Анализ кривых концентрация-ответ через 4 параметра материально - технического анализа, а также графа как активации% , как это определено эталонным контролем 1.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Мы регулярно использовать двухступенчатый метод для разбавления пептидов с помощью акустической передачи. Для первого шага, акустический диспенсер совмещен с автоматизацией используется для создания четырех акций пептидных промежуточных разведений через два исходных пластин (рис 1а, б). Для второго этапа, мы используем акустический дозатор для дальнейшего разбавить запаса разведений от источника пластин А и В , чтобы создать диапазон концентраций 11 пунктов для каждого теста пептида (рис 1в). Каждый диапазон концентраций пептида обжигают в двух экземплярах, слева направо по аналитическим планшетом, позволяя 16 различных пептидов для скрининга на 384-луночный планшет для анализа (рис 1в). Анализ буфера засыпки выполняется для обеспечения постоянного объема на лунку через планшет для анализа (рис 1d). Эталонного пептида положительного контроля также передаются в целевые планшеты при максимальной эффективной концентрации.
Ent. "ВОК: Keep-together.within-странице =" 1 "> Пластины считываются с использованием флуоресцентного планшет - ридера, а также карту тепла для примера пластину , содержащую 16 пептидов в двух экземплярах показано (рис 2а) Анализ накопления цАМФ используется представляет собой перевернутую Конкурентный анализ, таким образом , низкие значения (показаны как фиолетовый) представляют высокую концентрацию цАМФ. Воспроизводимость повторяющихся точек очевидна , когда данные выражены в виде кривых реакции на концентрацию (2б). Пример 1 (строка а, рис 2а) представляет собой позитивный контроль для анализа. Образцы 2, 3 и 4 (строки B, C и D , соответственно, рис 2а) были неактивны и приравнивают к плоским линиям на рисунке 2b. Образцы 5-16 (ряды Е до Р) представляют собой активные тест-пептидов. метод позволяет генерировать полных кривых концентрация-отклик в широком диапазоне потенции. Блок-схема последовательности подробно весь поток работы показан на 
Рисунок 1:. Пластинчатые Макеты Описание акустического разливного методом серийных разведений. (А, б) Схема расположения 384-луночного источника пластин A и B , содержащий 25 мкл 100x фондовой концентрации каждого пептида (например , с 80 - пептидов , возможных в исходной пластине), 100x положительного контроля, анализа буфера только скважин для обратной засыпки, а также три 1: 100 серийных разведений каждого пептида, полученного с помощью автоматизированной акустической передачи и засыпкой между обоими источниками пластин. (С) один макет планшету , показывающий 11-точечный диапазон концентраций для 16 пептидов в двух повторностях в лунки планшета. (D) Типичный протокол дозирования для диапазона концентраций 11-балльной в мкл конечного объема 10 анализа. Все скважины назначения имеют буфер для анализа засыпки, чтобы обеспечить постоянную окончательную передачу VO Луме 100 нл на лунку. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры. 
Рисунок 2: тепловая карта и доза-реакция кривые Теплокарта показывая флуоресценции при A665 нм.. (А) диапазон концентраций 11-точка для 16 пептидов в двух экземплярах через пластину. Фиолетовый указывает на высокую концентрацию цАМФ (максимум), красный указывает на низкую концентрацию цАМФ (мин). (Б) кривые представитель пептида концентрация-ответ от одного анализа пластины , показывающий диапазон агонист пептидных деятельности GLP-1 рецептора против мышей GLP-1R , выражающую клетки (16 соединений). Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры. 
Рис . 3:. Диаграмма расхода скрининговых процесса Деталь всего процесса Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы увидеть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Этот протокол описывает успешное применение автоматизированного акустического дозирования серийно разбавить образцы пептидов в диапазоне концентраций от 3 х 10 6 , требующей меньше , чем 1 мкл образца. Основным преимуществом этого метода является то, чтобы повысить качество данных путем минимизации пептидный адсорбции с помощью уменьшенной из пластмассы подверженности образцов экспериментальных контейнеров и из пластмассы (например, наконечники пипеток), которые обычно требуются для переноса реагентов и перемешивания. В то время как акустический раздаточный не полностью исключает использование из пластмассы, она значительно уменьшить его. Кроме того, удаление зондового пипеткой также устраняет образец уноса, и ошибки не распространяются на протяжении всего серийного разведения, что позволяет одновременно надежным и воспроизводимым подготовки кривых реакции на концентрацию 14,15.
Другие группы сообщили о прямой акустический перенос тестируемых соединений растворяют в ДМСОКлетки для долгосрочных анализов (> 48 ч), без каких - либо шагов , необходимых смешивания, кроме инверсии планшета для анализа и инкубации в течение долгого времени 16,17. ДМСО весьма полярными и гораздо более пригодным для смешивания с водными растворами, чем биологические образцы, которые должны получать и хранить в PBS. Таким образом, при принятии автоматизированный метод для акустической передачи пептидных образцов, мы использовали дополнительные шаги тампонажных и центрифугирования, чтобы обеспечить тщательное перемешивание, что позволяет для точного образца серийного разведения. Наш опыт показывает, что только центрифугирование не является достаточным, чтобы обеспечить полное перемешивание водных образцов, и, таким образом, метод "мокрого переноса" был разработан, состоящий из акустической передачи в существующий объем 10 мкл водного буфера, за которым следует 15 мкл засыпки из тот же водный буфер. Это не представляется возможным огонь пептидов в исходной пластине сухой, а затем снова заполнить как можно было бы для малых молекул, как водный раствор пептида быстро евапоративная и пептид будет необратимо адсорбироваться на сухой пластиковой пластины. Хотя это не помогает смешивание водных образцов, центрифугирование по-прежнему требуется, чтобы обеспечить образец уровня мениска для акустической передачи. Включение нескольких промежуточного переноса, засыпки и центрифугирование шагов несколько отнимает много времени, хотя и в меньшей степени, чем при ручной подготовки большого количества образцов, а также использование автоматизации позволяет неконтролируемый пропускную способность. Другие сообщили о необходимости ручного соединения для смешивания в 96-луночные планшеты 17. Здесь мы полностью автоматизирован процесс и удалить необходимость ручного вмешательства, когда использование ДМСО не представляется возможным. Стоимость контрольно-измерительных приборов и расходных материалов будет ограничивать использование этого процесса в некоторых ситуациях. Если это так, то мы рекомендуем зондового серийных разведений всегда выполняются в ДМСО , если характер исследуемого образца поддается этому (например, синтетические пептиды). Если образцы не могут быть обработаны с ДМСО (например,Pegylated пептиды) С осторожностью следует применять при интерпретации данных потенции, так как мы ранее показали , даже включение возрастающих концентраций БСА не будет полностью предотвратить адсорбцию 1.
Акустический, наконечник-менее передача имеет дополнительные преимущества, связанные с аналитической миниатюризации, который является существенным, если образцы немногочисленны / конечна, как это часто бывает для животных или биологических образцов человека, и ранее мы описали потенциал для уменьшения объема образцов животного приводит к потребность в меньшем количестве животных в исследовании 1. Важно помнить, что пептиды являются биологические образцы и должны рассматриваться как таковые; в целях поддержания их целостности повторных циклов замораживания-оттаивания следует избегать. Байолоджик является быстро растущей областью новых терапевтических средств, и наш автоматизированный метод высокой пропускной способности для получения пептидов могут быть легко применены к другим биологическим агентам в том числе рекомбинантных белков и антител.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Hanks’ Balanced Salt solution | Sigma-Aldrich | H8264 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H3375 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A9418 | |
| 3-Isobutyl-1-methylxanthine | Sigma-Aldrich | I7018 | Prepared as a 0.5 M stock in DMSO |
| GLP-1 (7-36) amide | Bachem | H-6795 | Prepared as a 1 mg/ml stock in PBS, referred to as '100x reference control' |
| Test peptides | Produced in-house at MedImmune | Supplied at various concentrations in DMSO or PBS as appropriate | |
| 100x peptide stock | Produced in-house at MedImmune | Test peptide diluted into assay buffer to 100x final required concentration | |
| Trypan Blue Solution, 0.4% | Thermo Fisher Scientific | 15250-061 | |
| Cedex XS Cell Analyzer | Innovatis | ||
| Corning 384 well plates, low volume | Sigma-Aldrich | 4514 | |
| Echo Qualified 384-Well Polypropylene Microplate | Labcyte Inc. | P-05525 | |
| Echo Qualified Reservoir | Labcyte Inc. | ER-0055 | |
| Echo 550 Liquid Handler | Labcyte Inc. | Droplet transfer volumes in increments of 2.5 nl | |
| Echo 525 Liquid Handler | Labcyte Inc. | Droplet transfer volumes in increments of 25 nl | |
| ACell Benchtop Automation | HighRes Biosolutions | MC522 | |
| Cellario Lab Automation Scheduling software for Life Science Robotics | HighRes Biosolutions | ||
| MultidropCombi Reagent Dispenser | ThermFisher Scientific | 5840300 | Referred to as 'bulk reagent dispenser' |
| HTRF cAMP Dynamic 2 kit | Cisbio Bioassays | 62AM4PEJ | |
| EnVision Multilabel Reader | PerkinElmer |
References
- Naylor, J., Rossi, A., Hornigold, D. C. Acoustic Dispensing Preserves the Potency of Therapeutic Peptides throughout the Entire Drug Discovery Workflow. J.Lab.Autom. 21 (1), 90-96 (2016).
- Campbell, J. E., Drucker, D. J. Pharmacology, physiology, and mechanisms of incretin hormone action. Cell.Metab. 17 (6), 819-837 (2013).
- Hui, H., Farilla, L., Merkel, P., Perfetti, R. The short half-life of glucagon-like peptide-1 in plasma does not reflect its long-lasting beneficial effects. Eur.J.Endocrinol. 146 (6), 863-869 (2002).
- Harris, D., Olechno, J., Datwani, S., Ellson, R. Gradient, contact-free volume transfers minimize compound loss in dose-response experiments. J.Biomol.Screen. 15 (1), 86-94 (2010).
- Ekins, S., Olechno, J., Williams, A. J. Dispensing Processes Impact Apparent Biological Activity as Determined by Computational and Statistical Analyses. PLoS ONE. 8 (5), 62325 (2013).
- Goebel-Stengel, M., Stengel, A., Tache, Y., Reeve, J. R. The importance of using the optimal plasticware and glassware in studies involving peptides. Anal.Biochem. 414 (1), 38-46 (2011).
- McDonald, G. R., et al. Bioactive Contaminants Leach from Disposable Laboratory Plasticware. Science. 322 (5903), 917 (2008).
- Belaiche, C., Holt, A., Saada, A. Nonylphenol ethoxylate plastic additives inhibit mitochondrial respiratory chain complex I. Clin Chem. 55 (10), 1883-1884 (2009).
- Sackmann, E. K., et al. Technologies That Enable Accurate and Precise Nano- to Milliliter-Scale Liquid Dispensing of Aqueous Reagents Using Acoustic Droplet Ejection. J.Lab.Autom. 21 (1), 166-177 (2016).
- Grant, R. J., et al. Achieving accurate compound concentration in cell-based screening: validation of acoustic droplet ejection technology. J.Biomol.Screen. 14 (5), 452-459 (2009).
- Turmel, M., Itkin, Z., Liu, D., Nie, D. An Innovative Way to Create Assay Ready Plates for Concentration Response Testing Using Acoustic Technology. J.Lab.Autom. 15 (4), 297-305 (2010).
- Butler, R., et al. Use of the site-specific retargeting jump-in platform cell line to support biologic drug discovery. J.Biomol.Screen. 20 (4), 528-535 (2015).
- Panchal, S., Verma, R. J. Effect of sodium fluoride in maternal and offspring rats and its amelioration. Asian Pac.J.Reprod. 3 (1), 71-76 (2014).
- Hanson, S. M., Ekins, S., Chodera, J. D. Modeling error in experimental assays using the bootstrap principle: understanding discrepancies between assays using different dispensing technologies. J.Comput. Aided Mol.Des. 29 (12), 1073-1086 (2015).
- Harris, D., Olechno, J., Datwani, S., Ellson, R. Gradient, Contact-Free Volume Transfers Minimize Compound Loss in Dose-Response Experiments. J.Biomol. Screen. 15 (1), 86-94 (2010).
- Chan, G. K. Y., Wilson, S., Schmidt, S., Moffat, J. G. Unlocking the potential of high-throughput drug combination assays using acoustic dispensing. J.Lab.Autom. 21 (1), 125-132 (2016).
- Roberts, K., et al. Implementation and challenges of direct acoustic dosing into cell-based assays. J.Lab.Autom. 21 (1), 76-89 (2016).
