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Behavior

通过无节制的乳腺造影获得衰老小鼠呼吸模式的方法

Published: April 28, 2020 doi: 10.3791/59393

Summary

无节制的大气胸膜术用于量化清醒小鼠的呼吸模式。我们显示,在标准化协议下,15 个片段显示的值与延长的安静呼吸持续时间相似。这种方法还允许在造型室的第一个小时内量化呼吸暂停和增强呼吸。

Abstract

无节制的大气胸膜(UBP)是一种量化小鼠呼吸模式的方法,经常报告小鼠的呼吸频率、潮汐体积和分钟通气。此外,还可以收集有关呼吸的神经输出的信息,包括中央呼吸暂停和增强呼吸的存在。UBP 的一个重要考虑因素是获得一个呼吸段,对焦虑或主动行为的影响最小,以阐明对呼吸挑战的反应。在这里,我们提出了一个协议,允许在老年小鼠中获得短而安静的基线,相当于等待更长的安静呼吸。使用较短的时间段是有价值的,因为一些小鼠菌株可能越来越兴奋或焦虑,并且较长的安静呼吸时间可能无法在合理的时间范围内实现。我们在UBP室放置了22个月大的小鼠,并将4个15分钟的安静呼吸段在60-120分钟之间与长达10分钟的安静呼吸周期进行了比较,这些呼吸时间需要2~3小时才能获得。在30分钟的熟悉期之后,我们还获得了在静默呼吸段之前的中枢呼吸暂停和增强呼吸计数。我们表明,10分钟的安静呼吸相当于使用更短的15秒的持续时间。此外,导致这15个安静呼吸段的时间可用于收集有关中心来源的呼吸暂停的数据。该协议允许调查人员在一定时间内收集呼吸模式数据,并使小鼠的安静基线测量成为可能,这些小鼠的兴奋行为可能会增加。UBP 方法本身提供了一种收集呼吸模式数据的有用和非侵入性方法,并允许在多个时间点对小鼠进行测试。

Introduction

,UBP是评估呼吸模式1、2、3、42,3的常用技术。14在这种方法中,小鼠被放置在一个封闭的腔室中,其中主室(动物所在的位置)和参考室之间的压力差异通过肺气管仪进行过滤,以获得值。由此产生的UBP设置是非侵入性和无拘无束的,并允许在不需要麻醉或手术的情况下评估呼吸措施。此外,该技术适用于需要随着时间的推移在同一鼠标中进行多次测量的研究。在单个试验或多次试验中,可以使用此方法量化呼吸频率、潮汐体积和分钟通气等变量。全身UBP还提供峰值流量和呼吸周期持续时间的测量。这些参数一起量化了呼吸模式。记录的呼吸痕迹还使得可以查看数据并计算给定时间段内显示的中央呼吸暂停数。此计数可用于分析潮汐体积和吸气时间,以测量呼吸模式的其他变化。

虽然存在几种非侵入性胸膜技术,用于直接评估肺生理参数,但全身UBP允许一种以最小的过度压力筛选呼吸功能的方法。头出胸膜,它利用潮汐中流测量,也是非侵入性的,依赖于约束,像许多其他类型的胸膜术(例如,双室胸膜)。虽然这些方法已用于啮齿动物模型测量气道响应能力5,使用颈领或小约束管可能会使小鼠(与其他物种)更长的时间适应,并返回到休息水平。

获得最佳空气呼吸段是基线比较的重要考虑因素。随着商业上可用胸膜系统的使用增加,许多实验室都能够收集呼吸模式数据。重要的是,在整个收集期间,呼吸模式是可变的,尤其是对于小鼠。话虽如此,有必要将基线分析标准化,作为确保实验者培训水平不混淆结果的手段。收集空气呼吸段的方法有很多种,作为实验设计之间的一个变化区域。一个例子包括根据之前定义的一组时间在室1中平均最后10-30分钟的数据,而另一种方法包括等待鼠标明显平静5~10分钟6。后者可能需要 2⁄3 小时才能实现,在某些情况下,如果鼠标不够平静,则可能需要放弃试验。这种担心是观察行为更焦虑和兴奋的小鼠菌株的一个特别重要的考虑因素。这些小鼠可能需要更长的时间来适应腔室环境,并且只保持平静的时间很短。限制用于基线收集的时间会标准化每个鼠标的室时间。

实验者获得适当的基线,包括鼠标中的静止行为值,但也及时发生,这一点至关重要。因此,本报告的目的是提供用于获取小鼠呼吸参数的短静基线值的方法的描述。此外,我们报告说,呼吸暂停和增强呼吸可以在室内的第一个小时量化。

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Protocol

所有程序都得到勒莫恩学院机构动物护理和使用委员会的批准。所有使用动物都符合《实验室动物护理和使用指南》8中所述的政策。

注:(关键)在实验前,获得动物使用所需的所有批准和培训。重要的是,实验者熟悉小鼠的行为和活动水平,包括睡眠、窘迫和/或运动伪影与正常嗅探和呼吸的迹象。

1. 全身胸腔室

  1. 阅读大气测量胸膜室(包括连接器、O 形环等)的相应用户手册,并创建标准协议文件以定义分析器(例如代谢)和特定于软件的参数。
  2. 确保所有软管和管都连接到造型室。将气体流管(流入)和真空管(流出)直接连接到大气测量胸膜室。
    注:流入必须连接到开口标记偏置流
  3. 将 CO2、O2和 N2气体罐连接到气体混合器。在试验之前,请确保所有储气罐都处于打开位置。

2. 大气胸腔室的校准

  1. 通过在大气测量胸膜软件的硬件选项卡下选择7700-放大器设置,校准高流量和低气流。
  2. 设置适合实验设计和气体分析仪(±0.1升/分钟)的真空(从腔室流出)。
    注:在整个校准和实验中,流出率必须保持不变,以便进行准确的代谢记录。
  3. 通过从造型室中取出流管并关闭真空来设置低气流的空气流量。
  4. 通过将0输入到相应腔室的低单位单元格中来记录零流量。双击低卡路里单元格,将时间更改为 3 s,然后点击"度量"。
  5. 重新连接流管,让气体(20.93% O2,平衡N2)从气体混合器流经大气混合器的大气胸膜室。
  6. 将从升/分钟到毫升/秒的流入转换为毫升/秒。单击相应腔室的"高单位"单元格,以毫升/秒为单位输入值。双击高 Cal,将时间更改为 3 s,然后单击"度量 "。
  7. 保持7700-放大器设置选项卡打开,以校准代谢分析仪到大气胸膜扫描软件。

3. 代谢分析仪校准

  1. 在气体混合器方案中,设置气体混合器释放含有20.93%O2和79.07%N2的气体流2
  2. 在代谢分析仪上,将 O2校准级别设置为 20.93%,CO2设置为 0%。输入相应值后,将拨号回采样
  3. 设置高 O2百分比。单击大气测量胸腔扫描软件的ABCD-4选项卡,然后在 C2 线高单元下输入20.93。高卡下,将时间更改为 3 s 并命中测量
  4. 设置较低的 CO2百分比。在 C3 线的"低 Cal"下输入0,然后将时间更改为 3 s,然后单击"低 Cal" 下的度量
  5. 在气体混合器程序中,将 O2值更改为 10%,将 CO2值更改为 5%。等待几分钟,气体流量以调整到这些值。在代谢分析仪上,转动调节旋钮以校准等于 5% 的 CO2。校准值后,请务必将拨号转回采样
  6. 设置高 CO2百分比。在大气测量胸膜扫描软件上将适当的值插入 O2和 CO2之前,确保分析仪读数稳定。单击 C3 下的"高单位"并输入5。将高卡更改为 3 s 并命中度量
  7. 设置低 O2百分比。单击 C2 选项下的"低单位"并输入10。单击"低 Cal",输入 3,然后单击"度量"。
  8. 将气体混合器上的气体值更改回 20.93% O2和 79.07% N2。等待几分钟,让造型室调整到这些值。如果代谢分析仪未自动读取 20.93% O2和 0% CO2,请重复步骤 3.1_u20123.7,以确保正确校准。定期通过认证的储气罐确认适当的校准。
  9. 重新检查连接到大气胸膜室的流量计。调整进出腔室的空气流量,以适合实验的速率(通常为 0.1~0.3 升/分钟)。
  10. 将所有设置应用于大气测量胸膜扫描软件后,单击"确定"开始录制。

4. 无节制胸腔

  1. 记录鼠标的重量和初始体温。等待 10 分钟,然后将鼠标放入造型室,从空腔室收集 O2和 CO2数据。在老鼠熟悉的安静区域工作,因此噪音和气味不会干扰数据收集。避免任何可能的中断,包括门的打开和关闭或人员进出数据收集室。
    注:这一特定协议使用了22个月大的雄性C57BL/6J鼠标。
  2. 在第一个小时内,记录鼠标的行为并记录详细的笔记,包括流入/流出腔室的特定值。
  3. 60分钟后,注意以下60分钟的安静呼吸段。列出任何长度至少15秒的片段,无需嗅觉和梳理使用植入式设备时,每 10 分钟测量一次体温。
  4. 实验结束时,将鼠标从腔室中取出,放回笼子中。所有设备都应彻底清洁和擦拭。如果水滴仍然存在,请使用加压空气将其移除。

5. 呼吸和代谢模式分析

  1. 打开大气胸膜检查文件,并查阅感兴趣的动物的记录。
  2. 打开软件中的代谢面板,取取 O2和 CO2的前 10 分钟平均值,当腔室为空时。将这些值记录为 FiO2和 FiCO2
  3. 查看大气胸膜扫描软件的"流动"面板。右键单击"分析属性"并设置适当的参数。在Meta 1选项卡下,从步骤 5.2 输入 FiO2和 FiCO2,以及流入 Meta 2下的腔室,以计算 VO2和 VCO2
  4. 对于呼吸分析模式,使用动物行为和流板跟踪的注释确认 15 秒安静呼吸的时间。从"数据分析器"选项卡输入"打开数据分析器对话"下 15 秒的安静呼吸间隔的时间。单击"分析器视图模式"仅显示特定 15 秒感兴趣的片段。
  5. 单击"保存已分析的派生数据"。打开电子表格中的数据文件以获取装箱数据。

6. 呼吸与增强呼吸分析

  1. 在打开的审阅文件中,退出分析器视图模式。转到"设置+gt; P3 设置"下的图形设置选项,并在"类型"下选择页面视图。为窗格数选择5。-2输入标记为"低"的框中,将2输入标记为"高"的包装盒中,以毫升/秒为单位进行流量测量。应用更改。
  2. 滚动到流跟踪面板上的 30 分钟标记。
  3. 在将鼠标放入室后 30-60 分钟内数出呼吸暂停和增强的呼吸。量化持续超过或等于0.5s的暂停呼吸周期,表示呼吸暂停。增强的呼吸是由呼吸痕迹急剧上升超过1.25 mL/s,然后急剧下降低于-0.75 mL/s。

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Representative Results

报告UBP的结果是评估在正常空气气体下进行的16岁(22个月大)小鼠的呼吸模式(20.93%O2,平衡N2)。分析首先包括将长 10 分钟的安静呼吸段(需要 2 小时以上才能获得)与 4 个短 15 秒段(在 60–120 分钟内量化)的平均值进行比较。图1A提供了具有代表性的静呼吸流量跟踪,其中呼吸与无活动呼吸行为一致。当从动物身上收集类似的追踪时,软件应该接受100%的呼吸。然而,图 1B表示从更活跃的部分呼吸,其中小鼠正在探索腔室、嗅探和/或梳理。与图 1B所示类似的跟踪不太可能被软件接受,并且对于此方法使用和解释的呼吸收集类型并不适合。用于评估两个时间点之间可能的呼吸模式差异的参数是呼吸频率(图 2A)、潮汐量 (VT、图2B),分钟通风(VE,图2C),C潮汐体积/吸气时间比(VT/Ti,图2D),以及分钟通风/排出的二氧化碳比(VE/VCO2/g,图2E),所有这些都使用大气测量胸腔和Drorbaugh和Fenn方程计算。为这些措施报告的值在之前为鼠标模型6、,9报告的值范围内。各群体之间没有明显差异;对呼吸频率和VT数据的多次比较的单独修正与Bonferroni(p <p 0.025 被认为是显著)。这些结果表明,使用 15 个基线使用简化协议可提供与较长基线协议类似的结果。

对频率、VT、VE、VT/Ti 和 VE/VCO2/g 的四个 15 s 基线段(图 3)进行了进一步分析。没有发现任何时间点之间的显著差异(p > 0.05)。任何呼吸模式测量的四个时间段中的任何一个的可变性也没有差异。此外,我们测试了 15 s 组与 10 分钟组的段的可变性,在比较平均组数据时,使用 Levene 的测试没有发现任何显著差异。

图4中介绍了UBP协议第30-60分钟内观察到的每种动物的呼吸暂停和增强呼吸的数量。这些结果表明,老年动物在30分钟内表现出大量的呼吸暂停和增强的呼吸(如图1CC所示)。这些数据表明衰老过程中的变化,因为这些发现是在22个月大的小鼠身上发现的。为了确认呼吸暂停和增强呼吸分析的跨值可靠性,为两个不同的研究人员计算了 Pearson 相关性。比率者之间存在高度一致,apneas 值r = 0.99 表示,增强呼吸的r = 0.86 表示。在未来的研究中,与对照组相比,呼吸暂停次数的增加将说明神经成分引起的呼吸功能障碍。

Figure 1
图 1:代表性流跟踪 .A) 从静谧基线进行流跟踪, 鼠标不显示任何活动行为,如嗅探或修饰。(B) 从我们的分析中不包括的有源呼吸期的流动追踪,即小鼠在室内移动,许多呼吸不被常规接受。(C) 流动跟踪显示增强的呼吸,然后是呼吸暂停一段时间。显示所有跟踪的 5 s 窗口。请点击此处查看此图形的较大版本。

Figure 2
图2:呼吸参数与22个月大的小鼠10分钟和15秒的平静呼吸段相似。乳腺造影用于收集老年小鼠的呼吸数据(n = 16,22个月大)。在两个不同的时间点为小鼠计算呼吸数据,即小鼠在室中的60-120分钟标记内4个15秒的平静间隔的平均值和10分钟的持续平静呼吸。(A) 呼吸频率(呼吸/分钟)。(B) 潮汐体积 (VT; 毫升/呼吸)。(C) 分钟通风 (VE; 毫升/分钟)。(D) 潮汐体积与灵感时间的比率 (VT/Ti; 毫升/秒)。(E) 分钟通风与排出的二氧化碳的比率,标准化为重量(VE/VCO2/g)。临时修正后各组之间没有统计显著差异(p > 0.025)。高于平均值的 >3 SD 值被视为异常值,并从数据集中删除。数据以平均值和 SD 形式显示。请点击此处查看此图形的较大版本。

Figure 3
3:比较四个15秒的间隔。呼吸数据在平静的呼吸小鼠(n = 16,22个月大)中计算,在60-120分钟的腔室放置内间隔4次。(A) 呼吸频率(呼吸/分钟)。(B) 潮汐体积 (VT; 毫升/呼吸)。(C) 分钟通风 (VE; 毫升/分钟)。(D) 潮汐体积与灵感时间的比率 (VT/Ti; 毫升/秒)。(E) 分钟通风与排出的二氧化碳的比率,标准化为重量(VE/VCO2/g)。时段之间没有统计显著性差异(p > 0.05)。异常值定义为高于平均值的 >3 SD 并删除。数据以平均值和 SD 形式显示。请点击此处查看此图形的较大版本。

Figure 4
图4:小鼠的呼吸暂停和增强呼吸计数。Apneas(+0.5 s无呼吸)和增强呼吸(ABs;吸入量急剧上升超过1.25 mL/s,然后以低于-0.75 mL/s)的剧烈呼气计算在30-60分钟之间。n对计数的分析超过 30 分钟,并报告该时间段的总数。数据以平均值和 SD 形式显示。请点击此处查看此图形的较大版本。

Figure 5
图5:无节制的大气胸膜(UBP)设置的原理图。总体 UBP 设置应与图中描述的设置类似。必须测量进出腔室的气体的流量测量值,并且必须为数据解释而了解气体成分。请点击此处查看此图形的较大版本。

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Discussion

该协议提供有关小鼠安静呼吸基线的信息,以及收集有关中央呼吸暂停和增强呼吸的数据。代表性的结果显示,与一群老老鼠平均4个15秒的呼吸模式相比,10分钟的安静基线具有相似的呼吸模式。重要的是,15回合在统计上没有区别,这些组也没有差异的变化,使用Levene的测试。这些数据表明,即使是短暂的回合也足以监测安静的呼吸。然而,完全有可能,在15秒和10分钟时分析小鼠体内的个体变异可能会导致不同的发现,因为10分钟的回合可能包括最小的嗅探和梳理活动。但是,使用 Levene 的测试比较单个鼠标基线段可提供不同于该协议中描述的分析。总体而言,此方法的设计使用 15 秒的呼吸段,可在室内 60-120 分钟内获取,而必须等待每只鼠标实现更长的安静基线持续时间。

基线所需的较短持续时间允许对更多焦虑/激动的小鼠菌株进行静呼吸测试。使用较长的呼吸段(即10或2分钟)延长了协议持续时间,如果小鼠在3小时内没有显示安静的呼吸痕迹,可能需要放弃试验。由于许多实验设计也包含呼吸挑战(即缺氧),分配给其他气体的延长时间突出表明基线收集时间需要标准化。使用一次15s的安静呼吸有助于缓解与小鼠(和小鼠菌株)一起工作的担忧,这些小鼠在室内可能特别兴奋。在进行大气胸膜造影时,我们发现,每项研究的小鼠中,有10%由于无法在室内进行2分钟的连续安静呼吸而不得不被排除在外。以前的熟悉试验的实施在实验当天放在腔室中时,未能让老鼠更快地平静下来。然而,由于不同的菌株、性别和年龄的小鼠对室环境的反应可能10,都不同,因此,对于某些,人群来说,习惯化技术可能有帮助。我们的熟悉试验包括,在实验前数天内将小鼠放在UBP室内,在试验室中放置1⁄2小时。虽然我们观察到动物行为在这个过程后没有变化,但先前的研究表明,需要24小时的习惯来消除导致小鼠12人自发性身体活动的新奇效应。此外,Kabir等人还发现,在家庭笼子里放置与气压胸膜室相似的塑料圆柱体,有利于让老鼠在实验13之前熟悉设置。

该协议还通过定量中枢呼吸暂停来发现小鼠可能的呼吸功能障碍,这表明神经控制问题。在基线呼吸模式收集之前的30分钟的观察显示,所有16只老年小鼠都表现出大量的呼吸和增强呼吸(如图1C所示)。这个老老鼠群中无数的呼吸暂停凸显了该协议在不增加实验时间的情况下量化另一种重要呼吸措施的能力。应该指出,年龄和疾病进展(如果适用)会影响呼吸暂停发作的存在和数量。

为了描述安静呼吸,在整个协议期间持续观察大气胸膜室和小鼠是很重要的。对于安静呼吸的量化,小鼠应该清醒,但不参与任何活动行为,如嗅探、梳理或探索(如图1A所示)。由于睡眠期间的呼吸模式可能与清醒动物14、15,15不同,因此在清醒状态下平静呼吸的收集至关重要。安静的呼吸时间可能较长,可能包括睡眠期,根据实验设计,睡眠时间可能并不适合。在这种情况下,较短的安静呼吸段是理想的记录,因为当活动段侧翼短 (15 s) 安静的呼吸段时,睡眠期间收集数据的可能性会降低。我们观察到,在小鼠模型中,较长的安静呼吸段可能具有挑战性,因为与大鼠相比,室内小鼠的行为似乎大不相同。观察小鼠呼吸流量以进行适当的呼吸段并记录动物行为都很重要。在通风减少或呼吸不稳定的情况下,此方法仍可以使用。在这些情况下,实验者在选择 15 个片段时必须对队列视而不见。软件程序应区分呼吸,在15年期间接受率为100%。我们建议注意呼吸的追踪,除了确保动物符合基线的行为标准,因为固定小鼠可能仍然焦虑。先前的一项研究报告说,虽然大鼠表现出镇静的行为,但他们仍然表现出改变的呼吸模式(即频率增加),以回应13号测试室内受控的刺激。

频率、VT、VE、吸气和呼气时间以及VE/VCO2的测量均使用分析仪和UBP软件进行量化,并经常在文献中报告。特别是,VT 和 VE 计算使用 Drorbaugh 和 Fenn 方程16,这需要已知温度、环境室温度、湿度和气压值。建议在整个实验中收集这些测量值,以获得最准确的 VT 和 VE 值。系统计算的其他变量应谨慎使用。UBP不是肺力学的直接衡量标准;因此,与气道阻力相关的变量(例如,增强的暂停[Penh])的解释应考虑到这一警告在5 。UBP 设置中可能影响软件计算的变量的其他组件包括流速和系统的一般校准。确认密封件和垫片工作正常(无泄漏),并确保所有设备正确连接到大气胸膜室(图 5)。进出造型室的流量应保持一致。所需的流速可能因 UBP 设置而异,因此在实验前检查这些值非常重要。进入腔室的流量应足以及时提供新鲜空气或气体挑战。流速还应足以允许代谢分析仪测量 O2和 CO2,而无需在腔室环境中积聚 CO2,这会带来呼吸模式变化的风险。同样,需要定期实施气体混合器/分析仪校准,以确保正确测量代谢参数。

有意识的UBP的其他注意事项包括减少实验室内的干扰,而动物正在接受测试。嘈杂的噪音、不同的气味以及房间里非必要的人员的存在,都会增加老鼠表现出的焦虑行为。使用较小的房间作为测试区域可能有帮助,但如果这是不可能的,纸板墙(有一个小的观察窗口)可以设置周围的房间,以减少干扰小鼠。室内的电气活动应保持在最低水平,以防止在大气胸膜内出现额外的噪音。因此,当软件从空腔室收集数据时,请务必注意 10 分钟期间的流跟踪。这些跟踪应保持平坦,任何中断或轻微波是噪音的迹象,应加以解决。打开和关闭门或 HVAC 工作的压力变化也会增加错误波动,并确保这些操作发生得最小(并且当它们发生时注意到它们)至关重要。湿度也会影响计算出的潮汐体积和分钟通风,因此在使用前确认造型室和连接管干燥非常重要。如有必要,使用 Drierite 珠与流入管的顺序可以帮助在腔室入口之前去除空气中的所有冷凝。在湿度通常高于《动物护理和使用指南》8中列出的水平(30%~70%,理想情况下在设定点的 10% 以内)的情况下,将实施此步骤。由于动物的存在,室内的湿度也会积聚。虽然有些湿度是正常的,但如果动物过度活跃或放置在室内更长时间,它可能会继续积聚。如果湿度水平达到最高水平(99.99%),则在实验期间可能需要打开和擦拭腔室,以保持类似的呼吸措施。该软件考虑气压、环境温度、动物温度和湿度的变化。最佳做法是保持在合理范围内的值,以便跨年龄、菌株和性别比较"苹果到苹果"。此外,小鼠的昼夜周期和测试的时间范围,以及房间的具体照明条件,是考虑13、17,17的重要细节。例如,我们通常测试小鼠在照明类似于他们的房房(光或暗周期)和在3小时范围内18。在数据收集和分析期间,实验者还应对动物群保持盲目性,以防止在选择基线时出现差异。如果可能,同一实验者应收集所有数据和/或分析给定实验中的所有跟踪。使实验者对动物群视而不见的步骤,以及在一天中类似时间进行随机化和测试,对于调查的严格性至关重要。最终,有一些无关因素可能改变流跟踪,在执行 UBP 时应考虑这些顾虑。

UBP方法是一种用于描述小鼠呼吸模式的技术。使用 15 s 呼吸段时,基线测量可在 2 小时内收集。在这里,我们报道了一种可以对年龄小鼠进行的方法,它们往往比年轻的小鼠在室内更激动,这表明其他焦虑或活跃的小鼠菌株也可以用这种协议进行测试。从 UBP 收集的数据是非侵入性的,允许在多个时间点进行测试,这对于有关衰老、药物治疗和疾病进展的研究非常有用。

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Disclosures

作者没有什么可透露的。

Acknowledgments

作者要感谢安吉拉·勒、莎拉·鲁比和玛丽莎·米奇在维护动物群落方面所做的工作。这项工作由 1R15 HD076379 (L.R.D.)、3R15 HD076379(支持 CNR 的 L.R.D.)和麦克德维特自然科学本科研究奖学金 (BEE) 资助。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Carbon Dioxide Analyzer AEI Technologies CD-3A 
Carbon Dioxide Sensor AEI Technologies  P-61B
Computer must be compliant with Ponemah requirements
Drierite beads PermaPure LLC DM-AR
Flow Control AEI Technologies R-1 vacuum
Flowmeter TSI 4100 need one per chamber and one for vacuum
Gas Mixer MCQ Instruments GB-103
Gas Tanks Haun 100% oxygen, 100% carbon dioxide, 100% nitrogen - food grade, or pre-mixed tanks for nomal room air and gas challenges
Oxygen Analyzer AEI Technologies S-3A
Oxygen Sensor AEI Technologies  N-22M
Polyurethane Tubing SMC TUS 0604 Y-20
Ponemah Software DSI
Small Rodent Chamber Buxco/DSI
Thermometer (LifeChip System) Destron-Fearing any type of thermometer to take accurate body temperatures is appropriate, but the use of implantable chips allows for minimal disturbance to animal for taking several body temperature measurements while the animal is still in the UBP chamber 
Transducers Validyne DP45 need one per chamber 
Whole Body Plethysmography System  Data Science International (DSI) Includes ACQ-7700, pressure/temperature probes, etc. 

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References

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行为, 问题 158, Apnea, 频率, 分钟通风, 潮汐体积, VCO2, 增强呼吸
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Receno, C. N., Cunningham, C. M.,More

Receno, C. N., Cunningham, C. M., Eassa, B. E., Purdy, R., DeRuisseau, L. R. Method to Obtain Pattern of Breathing in Senescent Mice through Unrestrained Barometric Plethysmography. J. Vis. Exp. (158), e59393, doi:10.3791/59393 (2020).

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