예 생체내 절연 골격 Microvessel 준비
Summary
<em> 예 생체내</em> 준비는 혈관 vasoactive 자극에 반응하며 수동 벽 기계를 통해 기본적인 구조적 특성의 평가 모두의 심문에 대한 가장 큰 gracilis 근육 저항 arterioles의 분리에 대해 설명되어 있습니다.
Abstract
절연 microvessel 준비는, 따라서 관류 저항 1-5 여러 요인 공헌 제어하는 혈관 직경의 전형을 허용 전직 생체내 준비이며. 이것은 처음. 15 몇 년 전 우치다 외 의해 설명, 대형 측정에서였다 고전 실험 준비입니다. 이것은 초기 설명은 광범위 주로 버지니아 6-8의 대학에서 박사 브라이언 Duling의 실험실에서 수정되고 향상되었습니다 기법에 대한 기초를 제공하고, 우리는 다음 페이지에서 현재의 접근 방식을 제시. 이러한 준비는 특히 선택의 microvessel 같은 시궁창에서 gracilis의 arteriole을 참조되지만, 기본적인 준비가 쉽게 종의 9-13 전역의 거의 모든 다른 조직이나 기관으로부터 격리 선박에 적용할 수 있습니다. 고립된 microvessels의 기계식 (즉, 차원) 변경 사항을 쉽게 평가할 수생리학 (예 : hypoxia, intravascular 압력, 또는 전단) 또는 pharmacological 도전, 그리고 손상에 통합 반응 구성된 기계론의 요소로 통찰력을 제공할 수 있지만 예전의 생체내, 조직의 광범위한 배열에 대응 인치 이 방법의 중요성 또한 intravascular 압력 (myogenic), 자율 innervation, hemodynamic 포함한 기타 출처로부터 기부금의 많은 컨트롤을 허용하는 동시에 그것이, microvessel 직경의 통합 규제에 영향 손쉬운 조작을 허용하는 것입니다 ( 예를 들어, 전단 응력), 내피 의존하거나 독립적인 자극, 호르몬, 그리고 parenchymal 영향, 부분적인 목록을 제공합니다. 적절한 실험 조건에서하고 적절한 목표, 이것은 생체내 또는 쉽게 광범위한 체계적인 변수의 손쉬운 제어를 허용하지 않는 현장 조직 / 기관의 준비에서 이상의 장점이 될 수 있습니다.
mA이 준비의 조 제한은 본질적으로 그 강점의 결과입니다. 정의함으로써, 이들 선박의 동작이 혈관 저항의 규정에 가장 중요한 참여자의 많은과 같은 신경 체액, 신진 대사 등을 포함하여 제거된 조건에서 연구되고 수사관들은 피하기 위해 오버 경고합니다 통역이 준비를 활용 수집되는 데이터의 추정. 이러한 준비에 관해서는 관심의 또 다른 중요한 영역이 같은 내피 안감이나 혈관 평활근 세포와 같은 구성 요소를 손상하는 것은 매우 쉬울 수있다는 것입니다, 오류 등 그 변수 소스를 소개하실 수 있습니다. 그것은 강력하게 개인 조사는 실험 시작시와 정기적으로 프로토콜의 과정에 걸쳐 모두, 준비의 품질을 보장하기위한 적절한 측정을 활용하는 것이 좋습니다.
Protocol
Discussion
이러한 일반적인 기술은 쉽게 대부분의 조직에 적용할 수 있지만 제시 프로토콜, 골격 근육 microvessel의 분리, 제거 및 이중 cannulation을 설명합니다. 현재 원고 내용은 용어 "arteriole"도 주요 장기에 재관류 저항의 규정에 기여 아니면 휴식 활성 톤 미만의 직경 70-120 μm의 사이에 이르기까지 저항 혈관을 설명하기 위해 저자가 사용되었습니다 조직.
일부 수정이 시스템은…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 미국 심장 협회 (EIA 0740129N)와 NIH T32 HL90610에 의해 지원되었다.
Materials
| Reagents and Equipment | Company | Comments/Catalogue # |
| Vessel Chamber | Custom | Dave Eick (MCW) |
| Heated Circulating Water Bath | PolyScience and Haake | Haake DC 10 |
| Pipets | Frederick Haer & Co. | Capillary Tubing 2.0 mm OD x 1.0 mm ID (27-33-1) |
| Pressure Monitor | World Precision Instruments | |
| Water Jacketed Reservoir | Custom | |
| External Light Source | World Precision Instruments | Novaflex |
| Pipet Puller | MicroData Instruments | PMP102 Micropipet Puller |
| Full complement of surgical tools | Fine Science Tools | Dumont |
| Ultra Fine Forceps | Fine Science Tools | Inox #5 |
| Silk Suture Thread | Ethilon | #10-0 or 9-0 |
| Stereo Microscope | Olympus | Olympus SZ-11 |
| Analog Video Calipers | Boeckeler | Via Controller (Via-100) |
| High Resolution Analog Camera | Panasonic | GP-MF 602 |
| Oxygen Tank | Regional | 21% balance nitrogen and 5% CO2 balance nitrogen |
| Tubing | Tygon | |
| Drain Pump | Cole Parmer Instrument Co. | |
| Modified Rat PSS | See recipe below | |
| Van Breemen’s Relaxant PSS | See recipe below |
Table 1. A list of the major components of isolated microvessel station setup presented in the Figures.
| Modified Rat PSS Recipe | To make two liters of PSS | 20X Salt Stock (2L) | 20X Buffer Stock (2L) |
| NaCl | 278.0 g | ||
| KCl | 14.0 g | ||
| MgSO4-7H2O | 11.5 g | ||
| CaCl2-H2O | 9.4 g | ||
| NaHCO3 | 80.8 g | ||
| EDTA | 0.4 g | ||
| NaH2PO4 | 0.28 g | ||
| Glucose | 1.98 g | ||
| 20x Salt Stock | 100 mL | ||
| 20x Buffer Stock | 100 mL | ||
| Distilled Water | 1800 mL |
Table 2. Recipe for standard physiological salt solution (PSS) used in the isolated microvessel protocols.
Comments on Recipe: Make 2 L of Salt Stock and 2 L of Buffer Stock. These can be refrigerated when not being used, but shake them well and often before preparing PSS. The additional ingredients are added at the time of preparation of final PSS.
| Van Breemen’s Relaxant PSS | To make 2 liters of PSS | 20X Salt Stock (1L) | 20X Buffer Stock (1L) |
| NaCl | 107.4 g | ||
| KCl | 7.0 g | ||
| MgSO4-7H2O | 5.76 g | ||
| MgCl2-6H2O | 81.32 g | ||
| NaHCO3 | 40.4 g | ||
| EDTA | 0.2 g | ||
| EGTA | 15.22 | ||
| NaH2PO4 | 0.28 g | ||
| Glucose | 1.98 g | ||
| 20x Salt Stock | 100 mL | ||
| 20x Buffer Stock | 100 mL | ||
| Distilled Water | 1800 mL |
Table 3. Recipe for Van Breemen’s relaxant physiological salt solution (PSS) used in the isolated microvessel protocols under conditions of zero active tone.
Comments on Recipe: Make 1 L of Salt Stock and 1 L of Buffer Stock. These can be refrigerated when not being used, but shake them well and often before preparing PSS. The additional ingredients are added at the time of preparation of final relaxant PSS.
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