Paring en Viertal Scheiding van Chlamydomonas reinhardtii Voor Genetische analyse
Summary
Paring en tetrade scheiding nodig zijn voor genetische analyse in<em> Chlamydomonas reinhardtii</em>. Hier laten we zien standaard methoden voor gametogenese, paring, zygote kieming en tetrade dissectie. Dit protocol bestaat uit een gemakkelijk te volgen reeks van stappen die ervoor zorgt dat genetische benaderingen vatbaar is voor wetenschappers die minder bekend zijn met<em> Chlamydomonas</em>.
Abstract
De eencellige groene alg<em> Chlamydomonas reinhardtii</em> (<em> Chlamydomonas</em>) Is uitgegroeid tot een populaire organisme voor het onderzoek in diverse gebieden van de celbiologie en genetica vanwege zijn eenvoudige levenscyclus, het gemak van de groei en manipulatie voor genetische analyse, genomische middelen en transformability van de kern en beide organellen. Paring stammen is een gangbare praktijk bij het genetische benaderingen worden gebruikt in<em> Chlamydomonass</em>, Om vegetatieve diploïden te creëren voor de analyse van dominantie, of na tetrad dissectie om na te gaan nucleaire vs organellar erfenis, tot allelism te testen, om te epistasy analyseren, of om de bevolking voor het doel van de kaart op basis van klonen te genereren. Daarnaast worden genetische kruisen routinematig gebruikt om organellar genotypen te combineren met het bijzonder nucleaire genotypes. Hier laten we zien standaard methoden voor gametogenese, paring, zygote kieming en tetrade scheiding. Dit protocol bestaat uit een gemakkelijk te volgen reeks van stappen die ervoor zorgt dat genetische benaderingen vatbaar is voor wetenschappers die minder bekend zijn met<em> Chlamydomonas</em>. Belangrijke parameters en knelpunten worden toegelicht. Tot slot worden de middelen voor verdere informatie en alternatieve methoden.
Protocol
Discussion
Genetische analyse is eenvoudig in Chlamydomonas, maar het vereist specifieke technieken voor het genereren van gameten en aparte tetrade nageslacht. Met een gezonde stammen, zijn de technieken gemakkelijk verworven. Bij sommige mutante stammen, wordt het meer een kunst, en lezers moeten Volume 1 refereren aan de onlangs gepubliceerde Chlamydomonas bronnenboek voor historische notities en praktische tips. Bovendien moet worden opgemerkt dat er vele variaties op het basisthema hierboven beschreven, vari…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit protocol is gebaseerd op technieken geleerd in het laboratorium van Francis-Andre Wollman aan het Institut de Biologie Fysisch-Chimique, Parijs, Frankrijk. De auteurs danken een schuld van dankbaarheid aan Jacqueline Girard-Bascou, die oorspronkelijk DBS geïntroduceerd om Chlamydomonas genetische technieken. Chlamydomonas onderzoek in het auteurs 'laboratorium wordt ondersteund door de National Science Foundation Award MCB-0646350.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Mating type plus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Mating type minus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Growth medium | |||
| N10 | Growth medium | |||
| Difco agar | Reagent | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Tools | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Tools | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Tools | Fisher Scientific | 08-920A |
Referenzen
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 119-273 (2005).
