Спаривание и Тетрада Разделение Chlamydomonas reinhardtii Для генетического анализа
Summary
Спаривание и тетрады разделение необходимо для генетического анализа в<em> Chlamydomonas reinhardtii</em>. Здесь мы показываем, стандартные методы гаметогенеза, спаривание, зигота прорастания и тетрады вскрытия. Этот протокол состоит из легкого в последующей серии шагов, которые сделают генетические подходы поддаются ученых, которые меньше знакомы с<em> Chlamydomonas</em>.
Abstract
Одноклеточная зеленая водоросль<em> Chlamydomonas reinhardtii</em> (<em> Chlamydomonas</em>) Стала популярной организм для исследований в различных областях клеточной биологии и генетики из-за его простой жизненный цикл, простота роста и манипуляции для генетического анализа, геномной ресурсы и трансформируемость ядра и обе органеллы. Спаривание штаммов является обычной практикой, когда генетические подходы, используемые в<em> Chlamydomonass</em>, Чтобы создать вегетативной диплоиды для анализа доминирования, или после тетрады вскрытия установить ядерные против органелл наследования, чтобы проверить аллелизм, проанализировать epistasy, или для получения населением с целью картографический клонирования. Кроме того, генетические кресты обычно используется для объединения органелл генотипов с особенно ядерного генотипов. Здесь мы показываем, стандартные методы гаметогенеза, спаривание, зигота прорастания и тетрады разделения. Этот протокол состоит из легкого в последующей серии шагов, которые сделают генетические подходы поддаются ученых, которые меньше знакомы с<em> Chlamydomonas</em>. Основные параметры и горячих точках объясняются. Наконец, ресурсы для получения дополнительной информации и альтернативные методы предоставляются.
Protocol
Discussion
Генетический анализ прост в Chlamydomonas, но она требует конкретных методов для создания половых клеток и отдельных потомства тетрады. При здоровых штаммов, методы легко приобретены. С некоторыми мутантных штаммов, становится больше искусство, а читателям следует обращаться Том 1 неда?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Этот протокол основан на навыки, полученные в лаборатории Фрэнсиса-Андре Вольман в Институте де Biologie физико-Chimique, Париж, Франция. Авторы в долгу благодарности к Жаклин Girard-Bascou, который первоначально введена DBS к Chlamydomonas генетических методов. Chlamydomonas исследования в лаборатории авторов при поддержке Национального научного фонда награду MCB-0646350.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Mating type plus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Mating type minus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Growth medium | |||
| N10 | Growth medium | |||
| Difco agar | Reagent | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Tools | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Tools | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Tools | Fisher Scientific | 08-920A |
Referenzen
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 119-273 (2005).
